引物純化方法介紹

1、Wuhan Anygene Biotechnology Co.,Ltd.引物純化方法介紹1) RPC 純化，它對DNA有特異性的吸附，可以被有機溶液洗脫， 但不會被水洗脫，所以能有效地去除鹽分，但是它不能有效去除比 目的片段短的小片段。這種方法處理的產物中雖然含有比目的片段少5'端一個或兩個或多個堿基的產物，卻一般不會對普通 PCR反應產生影響。但是對于需要用于測序、用于克隆的引物不能使用這個 級別。2) OPC 柱純化，OPC柱中裝有對DMT具有親和力的樹脂，合成DNA片段時保留5'端最后一個堿基上的DMT所有合成產物吸附在 0PC柱上以后，用稀的有機溶劑洗柱，帶有DMT勺片

2、段吸附能力強，不易被洗脫，不帶有 DMT勺片段吸附能力弱，被洗脫。然后用三氟 乙酸TFA或三氯乙酸TCA脫去DMTS團，再用濃一點的有機溶劑洗脫DNA這種方法的優(yōu)點是快速，簡易。但是其專一性吸附DMT能力有限，不免仍然有短片段帶入的可能，而且負載量小。特別是對 長于25堿基以上的片段純化效果不好。3) HPLC 純化，這是國外廠家常常使用的辦法。它是依據(jù)不同 大小的片段帶有的凈荷多少來分離產物的。合成粗產物中不同長度 的DNA片段決定了它帶有不同的凈電荷，較長的片段帶有高電荷比 帶電荷低的短片段在離子交換柱中流動得慢。先將粗產物檢測主峰 位置，再增加加樣量，回收主峰位置的部分。它的優(yōu)點是自動化

3、程度高、省人力；缺點是純化量小、不能純化長片段 (對于長于40堿基的片段，無法純化)。4) PAGE純化，幾乎所有專業(yè)書籍上介紹的最佳純化方法。它是依據(jù)DNA片段在變性聚丙烯酰胺凝膠中電泳時的遷移率不同來 分離大小片段的。由于各分子所帶電荷和大小不同，綜合影響其在 凝膠中的遷移速度，大片段遷移得慢，經(jīng)過一定時間的電泳，大小 片段會分開，然后停止電泳，剝離凝膠，置于熒光TLC板上在紫外燈下切割目的條帶，浸泡碎膠，并從泡膠的鹽溶液中回收目的DNA優(yōu)點是純化效果很好、尤其是純化長鏈效果更好、而且是可以直觀 看見DNA片段合成情況的質控環(huán)節(jié)。通常認為的缺點是實驗室水平 的PAGE屯化實驗步驟多費人工、電泳及后處理過程樣品損失量大、 電泳裝置局限或電泳時間如果不夠會影響純化效果。但這些缺點完 全可以克服。我們通過擴大規(guī)模流水作業(yè)使實驗過程便于掌握和節(jié) 武漢安基生物科技有限公司電話：027 59007099 傳真：027 59007099網(wǎng)址： 由b箱：synWuhan Anygene Biotechnology省人力；在粗樣品中加入尿素飽和液損失；改用C18柱回收產物，使得回收效率大大提高；通過特制電 泳裝置，增加凝膠厚度和長度來增加負載量和分離效果等等。所以 我們一直使用PAGE屯化方式保證合成產物的純度。為了保障后續(xù)實驗，最好選用PA