禽白血病病毒感染對(duì)新城疫和禽流感疫苗免疫效果的影響.docx

1、動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2017,38(12):119-122ProgressinVeterinaryMedicine禽白血病病毒感染對(duì)新城疫和禽流感疫苗免疫效果的影響張桂枝。靳雙星】"，黃炎坤】，陳文萍2(1.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，河南鄭州450046,2.舞陽縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南深河462400)摘要：為研究禽白血病病毒(ALV)感染對(duì)新城疫(ND)和禽流感(AI)疫苗免疫效果的影響，采用ELISA方法對(duì)河南省某地方品種雞場(chǎng)進(jìn)行ALV-p27抗原檢測(cè)，同時(shí)采集試驗(yàn)雞的血清樣品，檢測(cè)ND、AI(H9)和AKHs)亞型的免疫抗體水平，并比較了ALV經(jīng)種蛋垂直傳播感染1日齡罪雞和

2、后期感染對(duì)ND、AI疫苗免疫效果影響的差異。結(jié)果表明，ALV經(jīng)種蛋垂直傳播感染1日齡雛雞，能顯著降低ND、AI(H9)和AI(H5)疫苗免疫的抗體水平，陽性試驗(yàn)組與陰性組相比血清中ND.H9.H5(Re-6),H5(Re-7)和Hs(Re-8)抗體效價(jià)分別降低1.71log2、2.37log2J.59log2、1.00log2和1.79log2；雞群后期感染ALV,對(duì)ND和AI疫苗的免疫沒有明顯的抑制作用，陽性試驗(yàn)組與陰性組相比無顯著差異。關(guān)鍵詞：禽白血病病毒：新城疫疫苗3禽流感疫苗；免疫效果中圖分類號(hào)：S813.7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào).1007-5038(2017)12-0119-04禽白

3、血病病毒(Avianleukemiavirus,ALV)屬反轉(zhuǎn)錄病毒，是在雞群中普遍存在并常誘發(fā)腫瘤的三大類病毒之一，幾乎波及所有的商品雞群有關(guān)研究表明，雞群感染ALV除引起腫瘤導(dǎo)致直接發(fā)病死亡外；還嚴(yán)重影響雞的生產(chǎn)性能，推遲性成熟、產(chǎn)蛋高峰維持時(shí)間縮短、產(chǎn)蛋率降低、受精率降低，尤其是祖代和父母代雞群暴發(fā)禽白血病后，ALV經(jīng)過垂直感染可嚴(yán)重影響種蛋孵化率和雛雞的質(zhì)量；另外，ALV還可導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞成熟受抑制，阻斷T淋巴細(xì)胞的發(fā)育，導(dǎo)致胸腺和法氏囊不同程度的萎縮，使感染雞產(chǎn)生免疫抑制，造成機(jī)體抵抗力明顯下降，增加其他疾病繼發(fā)感染的幾率。迄今為止，有關(guān)ALV感染對(duì)疫苗免疫效果的影響報(bào)道較少，尤其是

4、ALV通過種蛋垂直傳播感染和后期水平傳播感染對(duì)疫苗免疫效果影響的差異未見報(bào)道。本課題組根據(jù)對(duì)河南省地方品種雞ALV感染情況調(diào)查結(jié)果，選擇某雞場(chǎng)開展了禽白血病的凈化工作，在凈化試驗(yàn)中重點(diǎn)考察了ALV感染對(duì)新城疫和禽流感兩大重要疫病疫苗免疫效果的影響，并比較了ALV垂直傳播感染1日齡雛雞和后期水平傳播感染對(duì)疫苗免疫效果影響的差異，為禽白血病的凈化及新城疫和禽流感的有效防控提供理論依據(jù)。1材料與方法1.1材料1.1.1 主要儀器和試劑酶標(biāo)儀為Therm0公司產(chǎn)品；微量加樣器、96孔微量反應(yīng)板、離心機(jī)、微量振蕩器、ALV-p27抗原檢測(cè)試劑盒均為BioChek公司產(chǎn)品；雞新城疫、禽流感Hs和血凝抑制試

5、驗(yàn)檢測(cè)抗原和陽性血清為中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所產(chǎn)品。1.1.2試驗(yàn)雞及免疫狀況試驗(yàn)雞來源于河南省某地方品種雞場(chǎng)，按照本場(chǎng)免疫程序分別進(jìn)行了雞馬立克病疫苗、新支Hm二聯(lián)凍干苗、法氏囊凍干苗、新支流三聯(lián)油苗、禽流感H5N】(Rb6+Re-7+Re8)油苗、新支H52二聯(lián)凍干苗和新支流減四聯(lián)油苗等的免疫接種。1.2方法檢刪方法1.2.1.1泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原檢測(cè)采樣前在樣品管中加入1mL樣品稀釋液，用無菌棉簽采集試驗(yàn)雞泄殖腔棉拭子，與稀釋液混勻后冷凍。反復(fù)凍融2次，檢測(cè)前將樣品恢復(fù)至25C,按照Bio-Chek公司ELISA試劑盒的操作說明進(jìn)行檢測(cè)。收稿日期：2017-04-08基金項(xiàng)目：河南

6、省重大科技專項(xiàng)計(jì)州項(xiàng)目(161100510200)；?？萍紕?chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(HUAHE2015003)作者簡介：張桂枝(1970)，女，河南原陽人，副教授.碩士，主委從事畜禽疫病防治的教學(xué)與科研工作。*通訊作者1.2.1.2新城疫和禽流感抗體水平測(cè)定采用微量血凝（HA）試驗(yàn)，在96孔微量凝集反應(yīng)板中，測(cè)定抗原的凝集滴度，然后配制4單位抗原；采用微量血凝抑制（HI）試驗(yàn)，測(cè)定血清樣品中新城疫、禽流感乩、禽流感H5抗體效價(jià)，用nlog2來表示。1.2.1.3經(jīng)種蛋垂直傳播1日齡雛雞感染ALV對(duì)疫苗免疫效果的檢測(cè)出雛當(dāng)天收集1日齡雛雞胎糞進(jìn)行ALV-p27抗原檢測(cè)。選取抗原陽性雞50只，單獨(dú)隔離飼養(yǎng)作為

7、試驗(yàn)組；選取抗原陰性雞50只作為陰性組。2組雞的飼養(yǎng)管理和免疫程序完全一致,分別在45日齡和65日齡2個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每組各隨機(jī)采集24只雞的血清，檢測(cè)新城疫（45日齡）、禽流感H9抗體效價(jià)（45日齡）和禽流感H5抗體效價(jià)（65日齡），并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析比較其差異。1.2.1.4后期感染ALV對(duì)疫苗免疫效果的檢測(cè)選取1日齡胎糞ALV-p27抗原陰性雞作為試驗(yàn)動(dòng)物，8周齡時(shí)檢測(cè)其ALV-p27抗原淘汰陽性雞，陰性雞飼養(yǎng)至23周齡再次檢測(cè)泄殖腔棉拭子ALV-P27抗原，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果將其分為兩組，抗原陽性雞為試驗(yàn)組（40只），由于經(jīng)過了1日齡和8周齡檢測(cè)淘汰陽性雞，因此該試驗(yàn)組中的雞大部分是后期感染ALV所致

8、；23周齡抗原陰性雞作為陰性組（40只）。2組雞的飼養(yǎng)管理和免疫程序完全一致，在180日齡每組各隨機(jī)采集24只雞的血清，檢測(cè)新城疫、禽流感Hs、禽流感H9抗體效價(jià)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析比較其差異。1.2.2試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)所得的所有數(shù)據(jù)，采用MicrosoftExcel軟件進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)分析，抗體效價(jià)數(shù)據(jù)以平均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差來表示。2結(jié)果2.1經(jīng)種蛋垂直傳播1日齡雛雞感染ALV對(duì)ND和AI疫苗免疫效果的影響2.1.1 對(duì)ND抗體效價(jià)的影響雛雞飼養(yǎng)至45日齡時(shí)，分別采集陽性試驗(yàn)組和陰性組各24只雞的血清，利用微量HA-HI試驗(yàn)，測(cè)定樣品中ND抗體效價(jià)。結(jié)果顯示，陽性試驗(yàn)組ND抗體效價(jià)平均值為8.29l

9、og2,陰性組為10.00log2,陽性試驗(yàn)組的抗體水平顯著低于陰性組（P<0.05）（表1）。2.1.2 對(duì)禽流感Hg抗體效價(jià)的影響檢測(cè)結(jié)果顯示，陽性試驗(yàn)組禽流感H,抗體效價(jià)平均值為7.13log2,陰性組為9.50log2,陽性試驗(yàn)組的抗體水平顯著低于陰性組（P<0.05）（表Do對(duì)禽流感氏抗體效價(jià)的影響錐雞飼養(yǎng)至65日齡時(shí)，分別采集陽性試驗(yàn)組和陰性組各24只雞的血清，利用微量HA-HI試驗(yàn)，測(cè)定樣品中禽流感也（Re-6）、壓（Re-7）和H5（Re-8）抗體效價(jià)。結(jié)果顯示，陽性試驗(yàn)組禽流感H5（Re-6）抗體效價(jià)平均值為8.58log2,陰性組為10.171og2,陽性組顯著

10、低于陰性組（PV0.05）；陽性試驗(yàn)組禽流感H5（Re-7）抗體效價(jià)平均值為5.71log2,陰性組為6.71log2,兩組間差異極顯著（PV0.01）;陽性試驗(yàn)組禽流感H5（Re-8）抗體效價(jià)平均值為8.17log2,陰性組為9.96log2,兩組間差異極顯著（P<0.01）（表2）。表145日齡雞血清中ND.AI-H,抗體水平(nlog2)Table1NDandAI-H9antibodytiterinserumof45-dayoldchickens組別雞只數(shù)ND抗體效價(jià)AIH9抗體效價(jià)GroupsThenumberofchickensNDantibodytiterAI-H9antib

11、odytiter陽性組Positivegroup248.29±】.04.7.13±0.99.陰性組Negativegroup2410.00±0.729.50±0.59注：*表示差異顯著(P<0.05).Note：*MeansignificantdifferencePV。.05).表265日齡雞血清中AI-H5抗體水平(nlog2)Table2AI-H$antibodytiterinserumof65-dayoldchickens組別Groups雞只數(shù)ThenumberofchickensH5(Rl6)抗體效價(jià)H$(Re-6)antibodytite

12、rH5(Re-7)抗體效價(jià)Hs(Re-7)antibodytiterH5(Re-8)抗體效價(jià)Hs(Re-8)antibodytiter陽性組Positivegroup248.58土0.78-5.71±0.818.17土0.76,陰性組Negativegroup2410.17±0.706.71±0.699.96±0.55注：*表示差異顯著(PV0.05)；*表示差異極顯著(PV0.01).Note：«MeansignificantdifferencedPV0.05);*Meanextremelysignificantdifference(PVO.

13、Ol).2.2后期感染ALV對(duì)ND和AI疫苗免疫效果的影響2.2.1對(duì)ND抗體效價(jià)的影響180日齡時(shí)，分別采集陽性試驗(yàn)組和陰性組各24只雞的血清，測(cè)定樣品中ND抗體效價(jià)，結(jié)果顯示，陽性試驗(yàn)組ND抗體效價(jià)平均值為10.63log2,陰性組平均值為10.88log2,陽性組略低于陰性組，但兩組間差異不顯著(P>0.05)(表3)。2.2.2對(duì)禽流感H9抗體效價(jià)的影響檢測(cè)結(jié)果顯示，陽性試驗(yàn)組禽流感H9抗體效價(jià)平均值為10.00log2,陰性組平均值為10.25log2,陽性組略低于陰性組，但兩組間差異不顯著(P>0.05)(表3)。2.2.3 對(duì)禽流感H$抗體效價(jià)的影響檢測(cè)結(jié)果顯示，陽性

14、試驗(yàn)組禽流感H5(Re-6)抗體效價(jià)平均值為8.33log2,陰性組為8.29log2,陽性組略高于陰性組，但兩組間差異不顯著(P>0.05)o陽性試驗(yàn)組禽流感Hs(Re-7)抗體效價(jià)平均值為7.79log2,陰性組為8.331og2,陽性組低于陰性組，但兩組間差異不顯著(P>0.05)；陽性試驗(yàn)組禽流感H"Re-8)抗體效價(jià)平均值為8.25log2,陰性組為8.46log2,陽性組略低于陰性組，兩組間差異不顯著(P>0.05)(表3)。表3180日齡雞血清中ND與AI-H9、Hs抗體水平(log2)Tabic3NDandAI-H5/9antibodytiterin

15、serumof180-dayoldchickens組別Groups檢測(cè)雞只數(shù)ThenumberofchickensND抗體效價(jià)NDantibodytiterh9抗體效價(jià)HgantibodytiterHs(Re-6)抗體效價(jià)Hs(Re-6>antibodytiterH5(Re-7)抗體效價(jià)H$(Re-7)antibodytiterH5(Re-8)抗體效價(jià)Hs(Re-8)antibodytiter陽性組Positivegroup2410.63±0.5810.00土0.888.33±1.137.79±1.258.25±1.07陰性蛆Negativegro

16、up2410.88±0.3410.25±0.618.29±l.O48.33±0.968.46±0.722.3垂直傳播感染ALV和后期感染ALV對(duì)、D和Al疫苗免疫效果影響的差異性比較由表1、表2、表3檢測(cè)結(jié)果可知，經(jīng)種蛋垂直傳播1日齡雛雞感染ALV能顯著降低ND、禽流感和H5疫苗免疫的抗體水平，陽性組血清中ND、禽流感H9和Hs抗體效價(jià)顯著低于陰性組，兩組間差異均極顯著(PV0.01);而后期感染ALV,對(duì)ND和AI疫苗的免疫沒有明顯的抑制作用，陽性組血清中ND、禽流感H9和H5抗體效價(jià)與陰性組相比無顯著差異(P>0.05)。3討論由于E

17、LISA方法檢測(cè)ALV-p27抗原，無法檢測(cè)出所有的外源性ALV："：,因此，盡管雞群在1日齡和8周齡兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)ALV-P27抗原淘汰陽性雞，雞群中仍然存在少數(shù)抗原陰性帶毒雞，這部分雞生長到一定日齡后仍可向外排毒，導(dǎo)致與其接觸雞群感染ALV,這是雞群后期水平感染ALV的重要原因。根據(jù)本試驗(yàn)23周齡ALV-P27抗原檢測(cè)結(jié)果，陽性率達(dá)4.73%。因此在開展禽白血病凈化工作時(shí)，一個(gè)世代需經(jīng)多次檢測(cè)淘汰抗原陽性雞并結(jié)合病毒的分離，同時(shí)要健全生物安全制度和孵化管理，經(jīng)過45世代凈化才能達(dá)到徹底根除目的。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，ALV經(jīng)種蛋垂直傳播感染1日齡雛雞能顯著降低感染雞群ND和AI疫苗

18、的免疫效果，陽性組血清中ND、禽流感H9和H5抗體效價(jià)顯著低于陰性組，兩組間差異均極顯著(PV0.01)；而后期水平傳播感染ALV,對(duì)ND和AI疫苗的免疫沒有明顯抑制作用，陽性組血清中ND、禽流感H9和H5抗體效價(jià)與陰性組相比無顯著差異。王建新等報(bào)道，1日齡肉雞人工感染ALV-J能顯著降低新城疫的抗體效價(jià)，與本試驗(yàn)研究結(jié)果ALV經(jīng)種蛋垂直傳播感染1日齡雛雞能顯著抑制ND、禽流感H9和H5免疫效果相一致。司興奎等研究報(bào)道ALV感染程度與新城疫、禽流感的免疫抗體水平具有明顯的負(fù)相關(guān)性"I°張丹俊等研究報(bào)道五華雞群感染ALV-J對(duì)247.278和337日齡雞血清中ND、禽流感H9

19、和H5抗體效價(jià)沒有明顯影響LI,與本試驗(yàn)研究結(jié)果后期水平傳播感染ALV對(duì)疫苗的免疫效果沒有顯著影響也相符合。研究表明ALV可以通過干擾功能性白細(xì)胞介素2(IL-2)的合成，導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞成熟受抑制和阻斷T淋巴細(xì)胞的發(fā)育。商營利等研究表明，ALV-J可引起雞胸腺、法氏囊及脾臟中淋巴細(xì)胞的凋亡，凋亡現(xiàn)象主要在早期，隨日齡的增加凋亡細(xì)胞逐漸減少這可以部分解釋本試驗(yàn)中ALV經(jīng)種蛋垂直傳播感染1日齡雛雞能顯著降低ND、禽流感和壓疫苗免疫的抗體水平，而后期水平傳播感染對(duì)ND和AI疫苗的免疫沒有明顯抑制作用。ALV感染越早對(duì)雞群的危害越嚴(yán)重，因此，做好種雞AL凈化，降低雛雞ALV感染率是充分發(fā)揮ND、AI等

20、疫苗免疫效果，有效預(yù)防新城疫和禽流感的重要措施之一。參考文獻(xiàn)：1 崔治中.禽白血病病毒研究的過去、現(xiàn)在和將來J.生命科學(xué)，2012,24(4),35-38.2 杜巖，崔治中，泰及建，等.從市場(chǎng)商品肉雞中檢出J亞群念白血病病毒J.中國家旗學(xué)報(bào),1999,3(1):1-4.3 SunSH.CuiZZ.EpidemiologicalandpathologicalstudiesofsubgroupJavianleukosisvirusinfectiousinChineselocal“yellow"chickenJ.AvianPathol,2007,36：221-6.4 XuB,DongW,Y

21、uC.etal.OccurrenceofavianleucosisvirussubgroupJincommerciallayerflocksinChinaJ.AvianPathol,2004,33(1),7-13.5徐海鵬，孟凡峰，董宣.等.種蛋中內(nèi)源性念白血病病毒的檢測(cè)和鑒定EJJ.W牧獸醫(yī)學(xué)報(bào).2014,45(8),1317-1323.6王波，李清源.劉紹瓊，等.皖南黃肉種雞種蛋中含白血病病毒的感染狀態(tài)檢測(cè)J.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào).2011,42(2),224-227.7王建新，崔治中，張紀(jì)元，等.J亞群含白血病病毒與含網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒共感染對(duì)肉浦生長和免疫功能的抑制作用J.中國獸踐學(xué)報(bào),200

22、3,23(3),211-213.8司興奎，尹慶亮.張濟(jì)培,等.華南某種雞場(chǎng)禽白血病病奏感染對(duì)4種免疫抗體水平的影響.中國家,2009,31(6),12-15.9張丹俊，戴銀，趙瑞宏.等.食白血病病毒J亞群感來對(duì)五華孺生產(chǎn)性能和免疫性能的影響口.中國番牧獸醫(yī).2012.39(2),141-142.10商營利，劉思當(dāng)，丁寶君，等.雞感染J亞群冬白血病病毒的免疫抑制機(jī)理J.中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2005.25(6),573-577.11李每.畬白血病病疑及雞傳染性貧血病病毒對(duì)念流感疫苗免疫效果的影響究D.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士論文,2016.EffectofAvianLeukosisVirusInfection

23、onImmunizedEfficacyofNewcastleDiseaseandAvianInfluenzaVaccineZHANGGui-zhi',JINShuang-xing1,HUANGYan-kun1»CHENWen-ping2.CollegeofAnimalScienceandTechnologyHenanUniversityofAnimalHusbandryandEconomyZhengzhouHenan*450046tCAtnai2.WuyangCountryAnimalDiseasePreventionandCountroICenterfLuoheHenan462400)Abstract；ToinvestigatetheeffectofAvianLeukosisvirus(ALV)infectiononimmunizedefficacyofnew-castledisease(ND)andAvianInfluenza(Al)v