保健食品中免疫球蛋白IgG的測(cè)定

1、保健食品中免疫球蛋白IgG的測(cè)定Determination of immunoglobulin content in health food1適用范圍本方法規(guī)定了初乳粉中免疫球蛋白IgG的測(cè)定本方法適用于初乳粉中免疫球蛋白IgG的測(cè)定本方法最小檢出量：2.0卩g。本方法最小檢出濃度：當(dāng)取樣量0.1g，稀釋至25mL進(jìn)樣量20卩L時(shí)，最小檢出濃度為 0.5mg/mL本方法最佳線(xiàn)性范圍：0.2 1.0mg/mL2 方法原理根據(jù)高效親和色譜的原理，在磷酸鹽緩沖液條件下免疫球蛋白IgG與配基連接，在pH2.5的鹽酸甘氨酸條件下洗脫免 疫球蛋白IgG3 試劑3.1 pH6.5 0.05mol/L磷酸鹽緩

2、沖液 A液3.2 pH2.5 0.05mol/L甘氨酸鹽酸緩沖液B液3.3 IgG 標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱(chēng)取IgG標(biāo)準(zhǔn)品（Sigma化學(xué)公司）O.OIOOg,用pH6.5 0.05mol/L磷酸鹽緩沖液溶解并定容至10.0mL,搖勻，濃度為 1.0mg/mL。3.4 IgG 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：以 IgG標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用 pH6.5 0.05mol/L磷酸鹽緩沖液稀釋成含 IgG 0.2mg/mL, 0.4mg/mL, 0.6mg/mL, 0.8mg/mL, 1.0mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列。臨用時(shí)配制。4 儀器和設(shè)備HPLC儀具紫外檢測(cè)器和梯度洗脫裝置。5 分析步驟5.1試樣處理：稱(chēng)取0.1g （精確至0.00

3、1g ）試樣，用 A液稀釋至25.0mL,搖勻，通過(guò)0.45卩m微孔濾膜后進(jìn)樣。先用5倍柱體積的重蒸水洗柱，再用10倍柱體積的A液平衡柱，進(jìn)樣，按洗脫程序進(jìn)行洗脫522 HPLC參考條件色譜柱Pharmacia HI-Trap Protein G柱，1mL。波長(zhǎng)：280nm移動(dòng)相:A液B液進(jìn)行梯度洗脫，見(jiàn)下表o梯度洗脫表：TimeFlowA%B%GradientmL/min00.410004.50.4100065.50.40100615.00.40100615.50.41000622.00.4100066分析結(jié)果表示6.1計(jì)算C V 100x =m 1000式中 x :試樣中IgG的含量，g/100g ;m :試樣的質(zhì)量，g;C:被測(cè)液中IgG的含量，mg/mL；V:試樣定容的體積，mL。6.2結(jié)果表示：計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7技術(shù)參數(shù)允許差： 5%回收率：94.4