東亞鉗蝎提取物對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠肝損傷的保護(hù)作用

1、東亞鉗蝎提取物對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠肝損傷的保護(hù)作用                             作者：黃迎春，張鐵鋼，林強(qiáng)，韓永平【摘要】  目的研究東亞鉗蝎提取物BmKE及其醇提部位（BmKEA）對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠肝損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)理。方法BmKE、BmKEA、陽性對(duì)照VE灌胃第5天，

2、小鼠腹腔注射四氯化碳造成急性肝損傷，測(cè)定小鼠血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT），天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）的活性和丙二醛（MDA）含量的變化。結(jié)果BmKE及BmKEA預(yù)處理和后，肝損傷小鼠血清中ALT，AST活性均有所下降，其中，BmKEA高、中劑量組達(dá)到顯著性差異（P<0.05）。BmKE低劑量組和BmKEA所有處理組血清中MDA含量極顯著下降（P<0.001）。結(jié)論BmK及BmKEA通過減少肝細(xì)胞ALT和AST的泄漏，減少脂質(zhì)過氧化而保護(hù)肝臟免受損傷，BmKEA是抗氧化的活性部位。 【關(guān)鍵詞】  東亞鉗蝎提取物； 肝損傷AbstractObjectiveTo study th

3、e protective effect of extract from Buthus martensic Karch(BmKE) and the fraction separated using alcohol(BmKEA) on liver injury induced by carbon tetrachloride(CCl4) in mice and its mechanism. MethodsMice were administrated with BmKE and BmKEA with high,middle and low dosages, positive control(Vita

4、minE) for 5d,respectively, and then acute liver injury was induced by 0.5% CCl4 ip 0.1 ml×kg-1. The mice were killed 36h after CCl4 treatment. Alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase(ALT and AST) activities in serum were measured. Maleic dialdehyde(MDA) in serum was detected.Res

5、ultsThe high and middle dosages of BmKEA significantly reduced the levels of ALT and AST(P<0.05)in serum. BmKEA remarkedly decreased the content  of MDA(P<0.001) in serum.ConclusionThe BmkE and BmKEA can protect carbon tetrachloride-induced liver injury in mice by reducing the leakage of

6、ALT and AST from the liver cells and lipid peroxidation. The BmKEA is active part of antioxidation.Key wordsButhus martensic Karch;  Liver injury;  Antioxidation    東亞鉗蝎Buthus martensii Karsch，BmK，屬節(jié)肢動(dòng)物門，蛛形綱，蝎目，鉗蝎科，是在蝎群中分布最為廣泛的一種，是傳統(tǒng)的藥用動(dòng)物，中醫(yī)以完整的干燥蟲體入藥，稱為“全蝎”或“全蟲”。其性平、味腥、有毒，有

7、祛風(fēng)、止痙、通絡(luò)、解毒功能，可治療驚風(fēng)抽搐、癲癇、中風(fēng)、半身不遂、口眼歪斜、偏頭痛、破傷風(fēng)、淋巴結(jié)核和風(fēng)疹瘡腫等癥。藥理研究表明，蝎子對(duì)心腦血管疾病和多種類型的癌癥也有一定的療效，對(duì)預(yù)防許多慢性病有顯著的效果1。由于受到中醫(yī)“藥食同源”的理論的影響，現(xiàn)在人們也把它作為一種功能食品搬上了餐桌。一般認(rèn)為蝎子對(duì)機(jī)體作用的主要成分是蝎毒2。近年，有人研究蝎子生長(zhǎng)過程中的代謝產(chǎn)物蝎皮，并且發(fā)現(xiàn)其蛋白組分具有免疫調(diào)節(jié)藥理活性和對(duì)T/B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化具有顯著促進(jìn)作用3，4。本研究在建立小鼠四氯化碳肝損傷模型的基礎(chǔ)上，用去掉蝎尾毒腺的東亞鉗蝎提取液（BmKE）及其醇提部位（BmKEA）進(jìn)行預(yù)防和治療，以觀察Bm

8、KE和BmKEA的保肝降酶和抗氧化作用。1  材料和方法1.1  提取物的制備及使用劑量首先用剪刀剪掉蝎子尾部的毒腺，將剩余的部分剪碎在液氮中研磨碎，然后加入10%的無菌葡萄糖溶液，充分搖勻，在03冷藏靜置2 h，取上清液冷凍干燥，4冰箱保存，此為東亞鉗蝎提取物（BmKE）。用50%乙醇在4抽提4 h，4，8000 r/min，離心20 min，取上清液冷凍干燥，4冰箱保存，此為BmKE醇提部位（BmKEA）。使用劑量， BmKE高劑量（36 g/kg）、中劑量（18 g/kg）、低劑量（9 g/kg），BmKEA是BmKE的1/36，高劑量（1 g/kg）、中劑量（0.5

9、 g/kg）、低劑量（0.25 g/kg）。1.2  動(dòng)物ICR小鼠（二級(jí)），雄性，體重1822 g，購(gòu)自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部。飼養(yǎng)在潔凈動(dòng)物房，合格證號(hào)為：京動(dòng)許字（1999）第042號(hào)，籠具用過氧乙酸溶液消毒，溫度（22±2），濕度40%70%，光照，自由進(jìn)食與飲水，飲用水為凈化水。1.3  陽性對(duì)照藥維生素E，北京雙鶴藥業(yè)醫(yī)藥技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品。生產(chǎn)批號(hào)030602，密封，在干燥處保存，用前用吐溫80乳化，蒸餾水稀釋。1.4  急性肝損傷實(shí)驗(yàn)取健康ICR雄性小鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組，四氯化碳模型組，不同劑量的給藥保護(hù)組，每組10只，實(shí)驗(yàn)開始先

10、灌胃給藥，1次/d。正常對(duì)照組，模型組小鼠分別用蒸餾水（0.3 ml/只），VE陽性藥組予VE陽性藥（0.1 mg/只），BmKEA組分為BmKEA大劑量組（20 mg/只），中劑量組（10 mg/只），小劑量組（5 mg/只）。實(shí)驗(yàn)第5 d，除正常組外，其余各組腹腔注射0.5%CCl4-橄欖油0.1 ml/kg。誘導(dǎo)產(chǎn)生小鼠急性肝損傷模型。造模型后36 h將小鼠全部處死。處死前15 h禁食，但不禁水，小鼠在末次給藥后1 h取眼球放血處死，分離血清后測(cè)ALT，AST的活性和MDA含量。1         1.5&#

11、160; 測(cè)定分析方法ALT，AST活性的測(cè)定采用ALT、AST測(cè)定試劑盒，在TRACECB171自動(dòng)生化分析儀上測(cè)定（日本島津），血清MDA含量的測(cè)定采用MDA測(cè)定試劑盒。以上試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。1.6  統(tǒng)計(jì)學(xué)分析組間比較采用Cochran & Cox近似t檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用±s表示，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。2  結(jié)果2.1  BmKE及BmKEA對(duì)血清ALT活性的影響小鼠在處死前36 h腹腔注射CCl4誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷，并在小鼠末次給藥后1 h取眼球放血處死，分離血清，檢測(cè)血清ALT的活性

12、。結(jié)果見表1。由表1可見四氯化碳(CCl4) 所致急性肝損傷小鼠血清ALT活性與正常對(duì)照組小鼠比較，ALT的活性明顯升高(P<0.001)；維生素E組陽性藥對(duì)照組的ALT活性與急性肝損傷模型組比較，降低明顯(P<0.05)；可能是因?yàn)槠渌s質(zhì)的影響，BmKE的高劑量組血清ALT活性雖然降低，但是沒有達(dá)到顯著性差異，中，低劑量組及BmKEA高、中、低劑量組血清ALT活性，分別較模型組降低明顯，有顯著性差異（P<0.05）。表 1  BmKE及BmKEA對(duì)血清ALT(U%)活性的影響(略)2.2  BmKE及BmKEA對(duì)血清AST活性的影響四氯化碳(CCl4)

13、 所致急性肝損傷小鼠血清AST的活性與正常對(duì)照組小鼠比較AST的活性明顯升高(P<0.001)；維生素E組陽性藥對(duì)照組和BmKE各劑量組以及BmKEA低劑量組的AST活性與急性肝損傷模型組比較，AST活性有所降低，但是均未達(dá)到顯著性差異；BmKEA高、中劑量組血清AST活性，分別較模型組降低明顯，有顯著性差異（P<0.05）。表 2  BmKE及BmKEA對(duì)血清AST(U%)活性的影響(略)2.3 BmKE及BmKEA對(duì)血清MDA含量變化的影響模型組的MDA含量與正常對(duì)照組比較，MDA含量升高顯著，(P<0.001)；維生素E組與模型組比較， MDA含量下降顯著，(

14、P<0.05)；BmKE高、中劑量組及BmKEA中劑量組血清MDA含量分別較模型組降低顯著，P<0.05；BmKE低劑量組，BmKEA高、低劑量組血清MDA含量分別較模型組降低極顯著，P<0.01。表3  BmKE及BmKEA對(duì)血清MDA含量的影響(略)3  討論    CCl4對(duì)肝臟細(xì)胞的毒性是多方面的，如使肝細(xì)胞內(nèi)的ALT、AST釋放，引起血清中ALT和AST的大大增加，使肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的脂質(zhì)引起過氧化反應(yīng)，造成細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的損害，MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物，被作為自由基產(chǎn)生的間接指標(biāo)5。  

15、;  本研究顯示，BmKE及BmKEA均能夠顯著降低CCl4誘導(dǎo)的肝損傷模型血清中的ALT和AST的活性，這是由于BmKE和BmKEA阻止了肝細(xì)胞內(nèi)ALT和AST的釋放，從而達(dá)到保肝降酶的作用。BmKE和BmKEA能夠極顯著降低血清中MDA的含量，表明BmKE和BmKEA能夠穩(wěn)定細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，減輕脂質(zhì)過氧化對(duì)細(xì)胞膜造成的損傷。這可能是因?yàn)樵谥|(zhì)過氧化反應(yīng)中，BmKE和BmKEA阻止了自由基連鎖反應(yīng)，使生物膜磷脂中的不飽和脂肪酸未受到氧化，而不能生成過氧化脂質(zhì)，從而產(chǎn)生抗氧化作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，BmKE的醇提部位BmKEA是抗氧化的活性部位?！尽?#160; 1吳英良.我國(guó)全蝎及其有效成分的藥理毒理研究及臨床應(yīng)用進(jìn)展J.中草藥，1995， 26（2）：97.2趙渤. 蝎子、蜈蚣養(yǎng)殖實(shí)用技術(shù)M.北京：農(nóng)業(yè)出版社，2002：6