不同提取方法趕黃草提取物清除DPPH自由基的作用研究

1、不同提取方法趕黃草提取物清除DPPH自由基的作用研究作者：賀曉華，許龍，談滿良，杜方麓，曾建國(guó)【摘要】 目的研究趕黃草提取物對(duì)DPPH自由基的清除作用。方法采用不同溶劑、不同提取方法制得趕黃草提取物，以抗壞血酸為對(duì)照，研究其對(duì)DPPH自由基的清除作用。結(jié)果不同溶劑提取物對(duì)DPPH自由基清除率強(qiáng)弱依次為95 %乙醇水丙酮，不同極性部分對(duì)DPPH自由基清除率強(qiáng)弱依次為醋酸乙酯部分正丁醇部分水部分石油醚部分，趕黃草提取物濃度達(dá)到一定濃度后與抗壞血酸對(duì)DPPH自由基清除能力相當(dāng)。結(jié)論回流提取法是最適合提取趕黃草中有效成分的方法，趕黃草95 %乙醇回流提取物具有良好的清除DPPH自由基的能力，醋酸乙酯部

2、分清除DPPH自由基能力最強(qiáng)。 【關(guān)鍵詞】 趕黃草； DPPH自由基； 清除率Abstract：ObjectiveTo study the extracts from Penthorum chinense Pursh on scavenging DPPH free radical. MethodsThe DPPH scavenging activities of Penthorum chinense Pursh extracted by different methods and different solvents were studied and compared with that of

3、 ascorbic acid. ResultsThe scavenging activity was decreased in the order of Penthorum chinense Pursh extracts obtained from 95 % ethanolwateracetone, and Polar different parts on DPPH free radical strong scavenging activity were part of ethyl N-butanol water petroleum ether. Penthorum chinense Purs

4、h extract and ascorbic acid in a certain concentration had the same DPPH free radical scavenging activity.ConclusionThe reflux is the best method, 95 % ethanol extract has good activity to scavenge the DPPH free radical, and ethyl acetate the most strong seavenging activity to DPPH free radical.Key

5、words：Penthorum chinense Pursh; DPPH free radical; Scavenging activity 趕黃草為虎耳草科扯根菜屬Penthorum Gronvexl植物扯根菜Penthorum chinense Pursh的干燥地上部分1。趕黃草為苗族民間的草藥，主要分布于四川、貴州、湖南等地，具有清熱解毒、退黃利濕、活血散瘀、利水消腫之功效2。趕黃草中含有黃酮、有機(jī)酸、揮發(fā)油等成分，其中沒食子酸和槲皮素為趕黃草中有效成分3，具有抗乙肝病毒和保肝的作用。對(duì)于趕黃草清除DPPH自由基的活性研究及其抗氧化研究尚未見報(bào)道。 衰老、癌癥及炎癥等疾病與體內(nèi)脂質(zhì)過氧化

6、和自由基有直接關(guān)系，因?yàn)樽杂苫膳c生物體內(nèi)的許多物質(zhì)如脂肪酸、蛋白質(zhì)等作用，奪取它們的氫原子，造成相關(guān)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能的破壞，更重要的是其氧化產(chǎn)物和中間產(chǎn)物會(huì)傷害生物膜、酶、維生素、蛋白質(zhì)及活細(xì)胞功能，其中一些還被認(rèn)為是致癌物質(zhì)，因此對(duì)消除自由基的探討已得到普遍關(guān)注4。清除自由基的檢測(cè)方法很多，如順磁共振法、電子自旋共振法、化學(xué)發(fā)光法等，但這些方法大多需用昂貴的儀器，一般實(shí)驗(yàn)室難以應(yīng)用。DPPH分析法是一種篩選自由基清除劑，評(píng)價(jià)抗氧化活性的簡(jiǎn)便方法5。當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí)，由于其與DPPH中電子配對(duì)使DPPH液吸收逐漸消失，DPPH液褪色程度與配對(duì)電子數(shù)成化學(xué)計(jì)量關(guān)系，因而可用分光光度法進(jìn)行

7、定量分析。為了了解趕黃草的抗氧化性質(zhì)，進(jìn)而闡明其所具有的抗病毒保肝作用機(jī)制，本文對(duì)趕黃草提取物清除DPPH自由基的活性進(jìn)行了研究。1 儀器與試劑 雙光束紫外可見分光光度計(jì)TU-1901(北京普析通用儀器有限公司)，電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器有限公司)，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 (北京市永光明醫(yī)療儀器廠)，超聲清洗儀(昆明市超聲儀器有限公司)，數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省榮華儀器制造有限公司)。 二苯基苦味?；诫?DPPH)，購(gòu)自sigma公司。 供試藥材趕黃草2007-10下旬采自湖南瀏陽，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)周日寶教授鑒定為虎耳草科植物趕黃草Penthorum c

8、hinense Pursh。2 方法2.1 趕黃草有效成分的提取2.2 趕黃草提取物清除DPPH自由基能力的測(cè)定 清除率=1（AiAj）Ac100% IC50=50消耗的DPPH質(zhì)量加入的試樣溶液中溶質(zhì)的質(zhì)量3 結(jié)果3.1 DPPH吸收光譜與測(cè)定波長(zhǎng)的確定 DPPH在溶液中具有典型紫紅色，當(dāng)它與能提供1個(gè)電子的自由基清除劑作用時(shí)，生成淺色產(chǎn)物，使溶液的典型紫紅色變淺。測(cè)定DPPH溶液在200600 nm之間的光譜圖，由圖1可知，DPPH溶液在醇-水體系中其327 nm和517 nm處吸光度都具有極大值，但517 nm處的極大值在加入槲皮素后降低較顯著，故選用在95%乙醇體系下517 nm處DP

9、PH含量的變化來進(jìn)行測(cè)定。1 回流提取法是最適合提取趕黃草中有效成分的方法，其具有操作簡(jiǎn)單，方法穩(wěn)定的特點(diǎn)。 趕黃草提取物均具有清除DPPH自由基的作用，95 %乙醇提取物的清除DPPH自由基作用最強(qiáng)，以下依次為水、丙酮提取物。 不同方法提取物清除DPPH自由基的結(jié)果表明，在一定濃度范圍內(nèi)，趕黃草提取物濃度越大，其清除自由基能力越強(qiáng)。 在石油醚、醋酸乙酯、正丁醇和水4個(gè)不同極性部分中，清除DPPH自由基能力最強(qiáng)的部分是在醋酸乙酯萃取部分。 趕黃草種質(zhì)資源在四川、貴州、湖南都有分布，但目前其價(jià)值被開發(fā)利用(藥用、保健)的還很少。本研究通過對(duì)趕黃草提取物中具有抗氧化作用的活性物質(zhì)對(duì)DPPH自由基的

10、清除能力進(jìn)行了考察，證明了趕黃草具有很強(qiáng)的抗氧化作用，這對(duì)于趕黃草的綜合利用和進(jìn)一步開發(fā)具有重要意義?！尽?1院植物研究所中國(guó)高等植物屬檢索表M北京：科學(xué)出版社，1979：2052全國(guó)中草藥匯編編寫組全國(guó)中草藥匯編，下冊(cè)，第2版M北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：4803張 旭，楊 明趕黃草有效成分研究J成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，25（4）：46 4Meydani M Blumberg A. Antioxidants and aging immune responseIN Bendich A，Phillips M, Tengerdy Reds antioxidants Nutrients and immune functionsMNew York and London：Plenum press,1990：57.5Bors S W，Van beek T AScreening of plant extra