（人教版）生物實驗中試劑的作用及實驗方法總結(jié)

1、生物實驗中試劑的作用及實驗方法總結(jié)一、化學物質(zhì)的檢測方法淀粉碘液 (藍色)還原性糖斐林試劑班氏試劑(磚紅色)CO2Ca(OH)2溶液(澄清石灰水變渾濁)乳酸pH試紙O2余燼復然蛋白質(zhì)被蛋白酶水解 、雙縮脲試劑(紫紅色)脂肪蘇丹染液 (橘黃色)、蘇丹染液 (紅色) DNA二苯胺(藍色)染色體龍膽紫溶液，醋酸洋紅溶液二、實驗條件的控制方法1、加水中氧氣泵入空氣或吹氣或放入綠色植物2、減少水中氧氣容器密封或油膜覆蓋或用涼開水 3、除去容器中CO2NaOH溶液4、除去葉中原有淀粉置于黑暗環(huán)境5、除去葉中葉綠素酒精水浴加熱6、除去光合對呼吸干擾給植株遮光7、如何得到單色光棱鏡色散或透明薄膜濾光8、血液抗

2、疑加入檸檬酸鈉9、線粒體提取細胞勻漿離心10、骨無機鹽的除去鹽酸溶液11、滅菌方法培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌;接種環(huán)用火焰灼燒滅菌;雙手用肥皂冼凈，擦干后用75%酒精消毒;實驗室或接種箱用甲醛蒸汽或紫外燈滅菌;整個過程都在實驗室無菌區(qū)或酒精燈旁進行。三、實驗結(jié)果的顯示方法光合速度O2釋放量或CO2吸收量或有機物生成量水生植物可依氣泡的產(chǎn)生量或產(chǎn)生速率;離體葉片若事先沉入水底可依單位時間內(nèi)上浮的葉片數(shù)目;植物體上的葉片可依指示劑(如碘液)處理后葉片顏色深淺。呼吸速度O2吸收量或CO2釋放量或有機物消耗量原子或分子轉(zhuǎn)移途徑放射性同位素示蹤細胞液濃度大小質(zhì)壁分離植物細胞是否死亡質(zhì)壁分離甲狀腺激素動物耗氧量

3、,發(fā)育速度等生長激素生長速度(體重、體長變化)胰島素作用動物活動狀態(tài)菌量菌落數(shù)，亞甲基藍褪色程度四、實驗中控制溫度的方法1、還原糖，DNA鑒定沸水浴加熱2、酶促反應水浴保溫3、用酒精溶解葉中的葉綠素酒精要隔水加熱、4、細胞和組織培養(yǎng)以及微生物培養(yǎng)恒溫箱培養(yǎng)五、實驗中常用器材和藥品的使用1、NaOH：用于吸收CO2或改變?nèi)芤旱膒H2、Ca(OH)2：鑒定CO23、CaCl2提高細菌細胞壁的通透性4、HCl：解離或改變?nèi)芤旱膒H5、NaHCO3：提供CO26、NaCl：配制生理鹽水或用于提取DNA7、瓊脂：激素或其他物質(zhì)的載體或培養(yǎng)基的凝固劑8、亞甲基藍：用于檢測污水的細菌含量9、酒精：用于消毒、

4、提純DNA、葉片脫色及配制解 離液10、蔗糖：測定植物細胞液濃度或觀察質(zhì)壁分離和復 原、作為碳源和能源物質(zhì)11、濾紙：過濾或紙層析12、紗布、尼龍布：過濾，遮光13、龍膽紫溶液或醋酸洋紅：堿性染料，用于染色體 染色14、檸檬酸鈉血液抗凝劑六、一些常見的實驗方法、根據(jù)顏色來確定某種物質(zhì)的存在：淀粉+I2(藍色);還原性糖+斐林試劑(磚紅色);脂肪+蘇丹(橘黃)或+蘇丹(紅色);蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑(紫色);大腸桿菌+伊紅和美藍(菌落為深紫色，有金屬光澤)、用顏色標記法來確定原腸胚三個胚層的分化情況。 、用熒光標記法來證明細胞膜具有一定的流動性、同位素示蹤法：光合作用產(chǎn)生氧氣的來源; 光合作用中二氧

5、化碳的去向;噬菌體侵染細菌實驗證明DNA是遺傳物質(zhì)，蛋白質(zhì)不是遺傳物質(zhì);DNA的復制是半保留復制。、確定某種元素為植物生長必需的元素的方法:水培法(完全培養(yǎng)液與缺素完全培養(yǎng)液對照)、獲得無籽果實的方法:用適宜濃度的生長素處理花蕾期已去雄的子房，如無 籽蕃茄、誘導染色體變異，如無籽西瓜。、確定某種激素功能的方法：飼喂法，切除注射法，閹割移植法，切除口服法。、確定傳入、傳出神經(jīng)的功能：刺激+觀察效應器的反應或測定神經(jīng)上的電位變化。、植物雜交的方法雌雄同花：花蕾期去雄+套袋 +開花期人工授粉+套袋雌雄異花：花蕾期雌花套袋+開花期人工授粉+套袋、確定某一顯性個體基因型的方法：測交; 該顯性個體自交。、

6、確定某一性狀為顯性性狀或隱性性狀的方法：具有一對相對性狀的純合體的雜交自交，觀察后代是否有性狀分離。、確定某一個體是否具有抗性基因的方法：確定小麥是否具有抗銹病基因，用銹病菌去侵染，一段時間后，觀察有無銹斑出現(xiàn)。、鑒定血型的方法：用標準血清與待測血型混合，在顯微鏡下觀察血液的凝集情況。、育種的方法：雜交育種;人工誘變育種;單倍體育種;基因工程育種;細胞工程育種;多倍體育種等。、測定種群密度的方法：樣方法; 標志重捕法、生態(tài)瓶的制作方法;瓶必須透明，且封閉、分離微生物的方法：平板劃線法;用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)(如：圓褐固氮菌的分離，金黃色葡萄球菌的分離，細菌和酵母菌的分離)、測定微生物群體生長的方法：

7、測定細菌的數(shù)目-顯微計數(shù)測定細菌的重量-取一定體積的培養(yǎng)基，經(jīng)離心分離，反復洗滌后，稱濕重，或烘干后稱干重。七、實驗研究方法1、顯微觀察法 如觀察植物細胞有絲分裂的實驗，觀察植物細胞質(zhì)壁分離和復原的實驗。2、觀察法 觀察微生物的外在性狀和表現(xiàn)等，如觀察注射了甲狀腺激素的小狗的活動狀況，觀察動物的毛色和植物花色的遺傳實驗等。3、同位素示蹤法 如噬菌體侵染細菌的實驗，用18O和14C追蹤光合作用中氧原子和碳原子轉(zhuǎn)移途徑的實驗等。4、加法創(chuàng)意 如用飼喂法研究甲狀腺激素的實驗、用注射法研究生長激素的實驗，用移植法研究性激素的實驗等。5、減法創(chuàng)意 如用閹割法、摘除法研究性激素、甲狀腺激素、生長激素的實驗

8、，雌蕊授粉后除去發(fā)育著的種子實驗等。6、雜交實驗法 如孟德爾發(fā)現(xiàn)遺傳定律的植物雜交、測交的實驗，小麥的雜交實驗等。7、化學分析法 如番茄和水稻對Ca 和Si選擇吸收的實驗，葉綠體中色素的提取和分離實驗等。8、理論分析法 如大小草履蟲競爭的實驗，植物根向地生長、莖背地生長的實驗，植物向光性的實驗等。9、模擬實驗法 如滲透作用的實驗裝置，分離定律的模擬實驗等。八、實驗技術(shù)1、光學顯微鏡的使用適用于觀察生物的微觀結(jié)構(gòu)，如細胞的結(jié)構(gòu)，包括光鏡下可看到的各種細胞器。2、臨時裝片、切片和涂片的制作技術(shù)適用于顯微觀察，凡需在顯微鏡下觀察的生物材料，必須先制成臨時裝片、切片或涂片。如“觀察植物細胞的質(zhì)壁分離和

9、復原的實驗”中要制作洋蔥表皮的臨時裝片，在生物組織中脂肪的鑒定中要制作花生種子的切片等。3、研磨和過濾技術(shù)適用于從生物組織中提取物質(zhì)，如酶、色素等。研磨時要先將生物材料切碎，然后加入研磨劑常用SiO2、提取液及其他必要物質(zhì)，充分研磨后，往往要進行過濾，以除去濾渣，所用過濾器具則根據(jù)需要或或根據(jù)試題中提供的器材加以選用，如可用濾紙、紗布、脫脂棉、尼龍布等。4、解離技術(shù)用于破壞細胞壁，分散植物細胞，制作臨時裝片。5、恒溫技術(shù)適用于有酶參加的生化反應，一般用水浴或恒溫箱。根據(jù)題目要求選用。6、紙層析技術(shù)適用于溶液中物質(zhì)分離。重要步驟包括制備濾紙條、畫濾液細線、層析分離。7、根尖培養(yǎng)技術(shù) 觀察植物根尖

10、有絲分裂的實驗8、溶液培養(yǎng)法 探究植物必需的礦質(zhì)元素的實驗，拓展微生物生長因子的判斷的實驗;植物的無土栽培注意溶液濃度和溶解氧。 生物實驗中的化學試劑 $酒精在生物試驗中的重要作用$ 1 體積分數(shù)為 50%的酒精 1.1 作用 洗去浮色。 1.2 原理 蘇丹是弱酸性染料，易溶于體積分數(shù)為 50%酒精。 1.3 應用 脂肪的鑒定實驗。在該實驗中，用蘇丹對花生子葉薄片染色后，在薄片上滴 12 滴體 積分數(shù)為 50%的酒精溶液，可以洗去被染玻片標本上的蘇丹染液浮色。 2 體積分數(shù)為 95%的酒精 2.1 作用 解離； 析出提取含雜質(zhì)較少的 DNA。 2.2 原理 解離原理：用質(zhì)量分數(shù)為 15%的鹽酸

11、和體積分數(shù)為 95%的酒精 11 混合，能使組織 中的細胞相互分離開來； 析出提取含雜質(zhì)較少的 DNA 的原理：DNA 不溶于酒精，尤其是體積分數(shù)為 95%的冷 凍酒精，而細胞中的某些物質(zhì)可以溶解于酒精。 2.3 應用 觀察植物細胞的有絲分裂； DNA 的粗提取與鑒定。3 體積分數(shù)為 75%的酒精 3.1 作用 消毒殺菌。 3.2 原理 體積分數(shù)為 75%的酒精，能夠順利地滲入到細菌體內(nèi)，吸收細菌蛋白的水分,使其脫水變 性凝固而失去功能，以達到消毒殺菌的目的。高于體積分數(shù)為 75%濃度的酒精與細菌接觸 時，就可能使得菌體表面迅速凝固，形成一層薄膜，阻止了酒精繼續(xù)向菌體內(nèi)部滲透，待到 適當時機，

12、薄膜內(nèi)的細胞可能將薄膜沖破而重新復活。在此高濃度下，酒精迅速凝固蛋白質(zhì) 的作用往往隨著其濃度升高而增強，因此，其消毒殺菌的效果也就越差。若酒精的濃度低于 75，也因不能順利地滲入到細菌體內(nèi)而徹底殺死細菌。如果使用體積分數(shù)為 75的酒精， 既能使組成細菌的蛋白質(zhì)凝固，又不能形成薄膜，這樣，酒精可繼續(xù)向內(nèi)部滲透，從而達到 較好的消毒效果。值得注意的是，體積分數(shù)為 75%的酒精溶液的殺菌能力不是絕對很強， 它對芽孢就不起作用。 3.3 應用 學習微生物的培養(yǎng)技術(shù)。在接種開始時，待用肥皂將雙手洗干凈后，再用體積分數(shù)為 75% 的酒精棉球擦拭雙手，然后在進行接種操作。4 無水酒精 4.1 作用 提取色素

13、。 4.2 原理 葉綠體中的各種色素均是有機物， 能溶解在有機溶劑中， 各色素在無水酒精中的溶解度較 大，且酒精無毒，方便操作。 4.3 應用 葉綠體中色素的提取與分離。5 工業(yè)酒精（一般是體積分數(shù)為 95%的酒精） 5.1 作用 燃燒加熱。 5.2 原理 酒精是富含能量的有機物，燃燒能產(chǎn)生大量的熱量。 5.3 應用 此處包括各類必須加熱的實驗，如生物組織中還原糖的鑒定、比較過氧化氫酶和 Fe3+的 催化效率、探索淀粉酶對淀粉和蔗糖的作用、DNA 的粗提取與鑒定、溫度對酶活性的影響、 學習微生物培養(yǎng)的基本技術(shù)、自身固氮菌的分離等實驗。 在觀察根尖分生組織細胞的有絲分裂中，與酒精 1:1 混合，

14、起解離作用 在觀察 DNA 和 RNA 在細胞中的分布中，改變細胞膜的通透性，加速染色劑進入細胞，同 時使染色質(zhì)中的 DNA 與蛋白質(zhì)分離，有利于 DNA 與染色劑結(jié)合。酒精在生物實驗中的作用有以下四個方面1.有機溶劑酒精是能與水和大多數(shù)有機溶劑混溶的親水性和脂溶性有機溶劑，是實驗室常用的溶劑。其特點是在常溫常壓下呈液態(tài)，具有較大的揮發(fā)性，在溶解過程中，溶質(zhì)與溶劑的性質(zhì)均無改變。親水性的成分除蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、果膠、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。難溶于水的親脂性成分，在乙醇中的溶解度也較大。因此，利用酒精的這種特性在生物實驗中常有下面幾種用途。1.1脫色劑酒精是一種常用的脫色試劑。在一

15、些以顏色變化為觀察對象的實驗中，必須將材料中會引起干擾作用的色素除去，即要進行脫色處理以免干擾對實驗結(jié)果的觀察。如在“探究葉綠體在光照下合成淀粉實驗”中，將處理過的天竺葵葉片放入盛有酒精的小燒杯里，隔水加熱，使葉片褪色（破壞和溶解葉片中所含的色素）。這樣就可在滴加碘液后,避免對觀察葉片顏色變化的干擾。1.2漂洗劑酒精是良好的有機漂洗劑。材料經(jīng)染色或相應處理后會有一些染料或物質(zhì)附著在其表面，必須將材料表面的浮色等清洗掉才能避免對后續(xù)實驗步驟以及實驗結(jié)果觀察的干擾。對于不溶于水的物質(zhì)需用酒精漂洗。如在“脂肪的鑒定實驗”中，用蘇丹染液對脂肪組織進行染色后，可用體積分數(shù)為50%的酒精來沖洗浮色，以免干

16、擾對細胞內(nèi)脂肪顆粒的觀察。因為50%酒精對脂肪組織沒有破壞作用并且容易揮發(fā)，且蘇丹染料在酒精溶解度較高，所以用50%的酒精作為洗去浮色的漂洗劑。1.3提取劑和層析劑酒精的溶解性能比較好，對細胞的穿透能力較強。能夠溶解各種色素和蛋白質(zhì)等物質(zhì)，且酒精無毒，方便操作，可用酒精作為提取和分離物質(zhì)的試劑。在“綠葉中色素的提取和分離實驗”中，可以用酒精作為提取色素的試劑。利用各種色素在層析液中溶解度的不同,使色素隨層析液在濾紙上因擴散速度差異而分離。用醫(yī)用酒精(體積分數(shù)為95%的酒精)作為層析液分離各種色素。在“DNA的粗提取與鑒定實驗”中，采用酒精沉淀法，利用DNA不溶于酒精，而蛋白質(zhì)、脂肪及磷脂等能溶

17、解其中，可以進一步提出含雜質(zhì)較少的DNA絲狀物。2.固定劑酒精的脫水能力比較強，又能使蛋白質(zhì)變性硬化組織。是一般固定液中不可缺少的成分。用其作為簡單固定劑使用時，常用于組織制片固定劑或組織保存劑。如在“觀察植物細胞有絲分裂實驗”中, 一般采用質(zhì)量分數(shù)為15%的鹽酸和體積分數(shù)為95%的酒精按體積比1：1混合而成的藥液作為解離試劑。鹽酸能夠使洋蔥細胞的細胞壁軟化，并使細胞間的中膠層物質(zhì)溶解，從而達到分離細胞的目的。酒精的作用是固定蛋白質(zhì)，使細胞的原生質(zhì)凝固，不發(fā)生變化，固定細胞的分裂相，以盡可能保持原來的結(jié)構(gòu)供觀察。酒精也可與其它試劑混合成復合固定劑，如卡諾固定液就是由無水酒精3份：冰醋酸1份配制

18、而成，適用于一般植物組織和細胞的固定，常用于根尖、花藥壓片及子房石蠟切片等。3.消毒劑酒精是常用的外用消毒藥，具有消毒殺菌作用，常用于皮膚創(chuàng)傷清洗、注射、輸血、抽血以及手術(shù)前皮膚的消毒等。不同濃度的酒精其用途和作用也不同。7075濃度殺菌作用最強，此濃度的酒精與細菌的滲透壓近似，在細菌表面蛋白未變性前能不斷地向菌體內(nèi)部滲入，使細菌所有蛋白脫水、變性凝固，最終殺死細菌，以達到消毒殺菌的目的。濃度低于70，則滲透性降低，達不到滅菌消毒目的。高于體積分數(shù)為75%濃度的酒精與細菌接觸時，就可能使得菌體表面迅速凝固，形成一層薄膜，阻止了酒精繼續(xù)向菌體內(nèi)部滲透，等到條件適宜，薄膜內(nèi)的細胞可能將薄膜沖破而重

19、新復活。在高濃度下，酒精迅速凝固蛋白質(zhì)的作用往往隨著其濃度升高而增強，但其消毒殺菌的效果也就越差。4.燃燒劑酒精是富含能量的有機物，燃燒能產(chǎn)生大量的熱量，目前酒精可以代替汽油作燃料，是一種可再生能源。在各學校的實驗室作為酒精燈加熱的優(yōu)質(zhì)染料工業(yè)酒精而得到廣泛應用。生物實驗中的許多生物化學反應都需要加熱，如還原糖的鑒定、有關酶特性的一系列驗證性實驗、DNA的粗提取與鑒定實驗等。鹽酸在生物實驗中的作用酶在不同Ph下的活性：提供酸性環(huán)境。質(zhì)量分數(shù)15%的鹽酸和體積分數(shù)95%的酒精：解離。如：觀察植物細胞的有絲分裂，觀察低溫下染色體的數(shù)目變化。（濃鹽酸會殺死細胞。濃鹽酸除了解離細胞外，也有一定的固定細

20、胞的作用。質(zhì)量分數(shù)15%的鹽酸和體積分數(shù)95%的酒精：解離。如：觀察植物細胞的有絲分裂，觀察低溫下染色體的數(shù)目變化。（濃鹽酸會殺死細胞。濃鹽酸除了解離細胞外，也有一定的固定細胞的作用。觀察DNA和RNA在細胞中的分布中，改變細胞膜的通透性,加速染色劑進入細胞，同時使染色質(zhì)中的DNA與蛋白質(zhì)分離，有利于DNA與染色劑結(jié)合。研究通過激素的調(diào)節(jié)。斯他林和貝利斯的實驗，在鹽酸的作用下，小腸黏膜可能產(chǎn)生一種化學物質(zhì)。鹽酸在驗證骨的組成成分實驗中用到了。高中生物實驗試劑歸納1、斐林試劑： 成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.05g/ml CuSO4（乙液）。用法：將斐林試劑甲液和乙液等體積混合，再

21、將混合后的斐林試劑倒入待測液，水浴加熱或直接加熱，如待測液中存在還原糖，則呈磚紅色。 2、班氏糖定性試劑：為藍色溶液。和葡萄糖混合后沸水浴會出現(xiàn)磚紅色沉淀。用于尿糖的測定。 3、雙縮脲試劑：成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.01g/ml CuSO4（乙液）。用法：向待測液中先加入2ml甲液，搖勻，再向其中加入34滴乙液，搖勻。如待測中存在蛋白質(zhì)，則呈現(xiàn)紫色。 4、蘇丹：用法：取蘇丹顆粒溶于95%的酒精中，搖勻。用于檢測脂肪?？蓪⒅救境砷冱S色（被蘇丹染成紅色）。 5、二苯胺：用于鑒定DNA。DNA遇二苯胺（沸水?。蝗境伤{色。 6、甲基綠：用于鑒定DNA。DNA遇甲基綠（常溫）會被

22、染成藍綠色。 7、50%的酒精溶液：在脂肪鑒定中，用蘇丹染液染色，再用50%的酒精溶液洗去浮色。8、75%的酒精溶液：用于殺菌消毒，75%的酒精能滲入細胞內(nèi)，使蛋白質(zhì)凝固變性。低于這個濃度，酒精的滲透脫水作用減弱，殺菌力不強；而高于這個濃度，則會使細菌表面蛋白質(zhì)迅速脫水，凝固成膜，妨礙酒精透入，削弱殺菌能力。75的酒精溶液常用于手術(shù)前、打針、換藥、針灸前皮膚脫碘消毒以及機械消毒等。9、95%的酒精溶液：冷卻的體積分數(shù)為95%的酒精可用于凝集DNA。 10、15%的鹽酸：和95%的酒精溶液等體積混合可用于解離根尖。 11、龍膽紫溶液：(濃度為0.01g/ml或0.02g/ml)用于染色體著色，可將染色體染成紫色，通常染色