實驗9細菌的代謝產(chǎn)物

1、|1 1、掌握細菌糖發(fā)酵試驗、掌握細菌糖發(fā)酵試驗、IMViCIMViC試驗、硫試驗、硫化氫試驗、尿素分解試驗的原理、結果判化氫試驗、尿素分解試驗的原理、結果判斷及醫(yī)學意義；斷及醫(yī)學意義；|2 2、熟悉上述試驗的操作方法。、熟悉上述試驗的操作方法。 材料材料 |1 1、菌種：大腸桿菌、傷寒沙門菌、痢疾桿菌、菌種：大腸桿菌、傷寒沙門菌、痢疾桿菌、變形桿菌培養(yǎng)物；金黃色葡萄球菌、白色葡變形桿菌培養(yǎng)物；金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌培養(yǎng)物；銅綠假單萄球菌、檸檬色葡萄球菌培養(yǎng)物；銅綠假單胞菌培養(yǎng)物；胞菌培養(yǎng)物；|2 2、培養(yǎng)基：、培養(yǎng)基：SSSS平板、平板、EMBEMB、克氏雙糖培養(yǎng)基、克

2、氏雙糖培養(yǎng)基、生化反應管、普通瓊脂平板、血平板；生化反應管、普通瓊脂平板、血平板；|其他：接種環(huán)、接種針、酒精燈、培養(yǎng)箱等。其他：接種環(huán)、接種針、酒精燈、培養(yǎng)箱等。標本標本膿血便、肛拭子膿血便、肛拭子選擇選擇/ /鑒別培基鑒別培基生化反應生化反應血清學鑒定血清學鑒定玻片凝玻片凝集試驗集試驗SSSS平板平板, , EMBEMB平板平板（1 1）營養(yǎng)物質(zhì)：營養(yǎng)物質(zhì)：牛肉膏、蛋白胨牛肉膏、蛋白胨（2 2）抑制劑：抑制劑：膽鹽、枸椽酸鹽、煌綠等，抑制非致膽鹽、枸椽酸鹽、煌綠等，抑制非致病菌的生長；但膽鹽能同時促進病原菌的生長。病菌的生長；但膽鹽能同時促進病原菌的生長。（3 3）鑒別用糖：鑒別用糖：乳糖

3、乳糖（4 4）指示劑：指示劑：中性紅中性紅（5 5）原理：原理：腸道桿菌均能分解葡萄糖產(chǎn)酸，但大多腸道桿菌均能分解葡萄糖產(chǎn)酸，但大多數(shù)非致病菌又能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，而致病菌不數(shù)非致病菌又能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，而致病菌不分解乳糖。據(jù)此，在培養(yǎng)基中加入乳糖和指示劑，分解乳糖。據(jù)此，在培養(yǎng)基中加入乳糖和指示劑，制成鑒別培養(yǎng)基。中性紅為指示劑，酸性時呈現(xiàn)制成鑒別培養(yǎng)基。中性紅為指示劑，酸性時呈現(xiàn)紅色，堿性時呈淡黃色。紅色，堿性時呈淡黃色。|大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸，通過中性紅顯色，菌落大而混大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸，通過中性紅顯色，菌落大而混濁，呈現(xiàn)紅色濁，呈現(xiàn)紅色 |志賀氏菌屬和沙門氏菌屬的細菌不分解乳糖，而

4、分解蛋志賀氏菌屬和沙門氏菌屬的細菌不分解乳糖，而分解蛋白質(zhì)產(chǎn)生堿性物質(zhì)，菌落形態(tài)為光滑微黃透明，園形、白質(zhì)產(chǎn)生堿性物質(zhì)，菌落形態(tài)為光滑微黃透明，園形、中等大小，邊緣整齊的菌落。中等大小，邊緣整齊的菌落。|由于宋內(nèi)氏痢疾桿菌有分解膽鹽中的某些物質(zhì)和發(fā)酵乳由于宋內(nèi)氏痢疾桿菌有分解膽鹽中的某些物質(zhì)和發(fā)酵乳糖糖( (產(chǎn)酸產(chǎn)酸) )較慢等特點，而使菌落呈淡紅或紅色的較大或邊較慢等特點，而使菌落呈淡紅或紅色的較大或邊緣不整齊的扁平菌落。某些沙門氏菌屬及變形桿菌因緣不整齊的扁平菌落。某些沙門氏菌屬及變形桿菌因 產(chǎn)產(chǎn)生硫化氫，使菌落呈現(xiàn)黑色中心。生硫化氫，使菌落呈現(xiàn)黑色中心。組成：無糖培養(yǎng)基乳糖伊紅美藍組成：

5、無糖培養(yǎng)基乳糖伊紅美藍 底物底物 指示劑、抑菌劑指示劑、抑菌劑 原理：原理： 細菌細菌 乳糖乳糖 產(chǎn)酸：伊紅美藍產(chǎn)酸：伊紅美藍 紫黑紫黑/ /紫紅紫紅 結果：結果： 分解乳糖細菌分解乳糖細菌 菌落變黑，有金屬光澤菌落變黑，有金屬光澤 不分解乳糖細菌不分解乳糖細菌 菌落無色、半透明（粉色）菌落無色、半透明（粉色）分解|一、糖發(fā)酵試驗一、糖發(fā)酵試驗|二、二、 IMViCIMViC試驗（試驗（ I:吲哚吲哚（indol）試驗，）試驗，M:甲基紅（甲基紅（methyl red）試驗，試驗，V:V.（Voges-Proskauer）試驗；）試驗；C:檸檬酸（檸檬酸（citrate utilization

6、）實驗）實驗(枸櫞酸枸櫞酸鹽鹽)，i是為個好讀加上去的是為個好讀加上去的.）|三、硫化氫試驗三、硫化氫試驗|四、尿素分解試驗四、尿素分解試驗|五、細菌的色素產(chǎn)生五、細菌的色素產(chǎn)生|六、其他六、其他 原理：原理：細菌具有多種酶系統(tǒng)能分解糖類，產(chǎn)酸產(chǎn)氣。細菌具有多種酶系統(tǒng)能分解糖類，產(chǎn)酸產(chǎn)氣。不同的細菌對各種糖類的分解不同，因而可以利用不同的細菌對各種糖類的分解不同，因而可以利用糖發(fā)酵進行各種細菌糖發(fā)酵進行各種細菌( (特別是腸道細菌特別是腸道細菌) )的鑒別。的鑒別。|大腸桿菌能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸；分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣；大腸桿菌能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸；分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣；|痢疾桿菌、沙門氏菌、變形桿菌則不能乳糖

7、（乳糖痢疾桿菌、沙門氏菌、變形桿菌則不能乳糖（乳糖除宋內(nèi)氏遲產(chǎn)酸外均不產(chǎn)酸產(chǎn)氣）；分解葡萄糖產(chǎn)除宋內(nèi)氏遲產(chǎn)酸外均不產(chǎn)酸產(chǎn)氣）；分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣酸不產(chǎn)氣( (僅福氏僅福氏6 6型可產(chǎn)少量氣型可產(chǎn)少量氣) ) |葡萄糖發(fā)酵試驗|乳糖發(fā)酵試驗 原理：原理： IMViCIMViC試驗試驗是一組用于腸桿菌科細菌鑒別的實是一組用于腸桿菌科細菌鑒別的實驗，由靛基質(zhì)試驗、甲基紅試驗、驗，由靛基質(zhì)試驗、甲基紅試驗、VPVP試驗和枸櫞酸試驗和枸櫞酸鹽利用試驗組成。鹽利用試驗組成。靛基質(zhì)試驗：靛基質(zhì)試驗：大腸桿菌陽性；變形桿菌陽性；痢疾桿大腸桿菌陽性；變形桿菌陽性；痢疾桿菌陰性、沙門菌陰性；菌陰性、沙門菌陰性；

8、甲基紅試驗：甲基紅試驗：四種腸道桿菌均為陽性；四種腸道桿菌均為陽性；VPVP試驗：試驗：除變形桿菌部分菌株陽性外，其余均為陰性；除變形桿菌部分菌株陽性外，其余均為陰性；枸櫞酸鹽利用試驗：枸櫞酸鹽利用試驗：大腸桿菌和痢疾桿菌陰性，變形大腸桿菌和痢疾桿菌陰性，變形桿菌以陽性為主，傷寒沙門菌陰性，副傷寒沙門菌桿菌以陽性為主，傷寒沙門菌陰性，副傷寒沙門菌和其它沙門菌部分陽性。和其它沙門菌部分陽性。|（一）基本原理（一）基本原理|1. 吲哚實驗是用來檢測吲哚的產(chǎn)生。有些細菌能產(chǎn)生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚和丙酮酸。吲哚與對二甲氨基苯甲醛結合，形成紅色的玫瑰吲哚。但并非所有微生物都具有分解色氨

9、酸產(chǎn)生吲哚的能力，因此吲哚實驗可以作為一個生物化學檢測的指標。|2. 甲基紅實驗是用來檢測葡萄糖產(chǎn)生的有機酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。當細菌代謝糖產(chǎn)生酸時，培養(yǎng)基就會變酸，使加入培養(yǎng)基的甲基紅指示劑由橘黃色（pH6.3）變?yōu)榧t色（pH4.2），即甲基紅反應。|3. 伏-普實驗是用來測定某些細菌利用葡萄糖產(chǎn)生非酸性或中性末端產(chǎn)物的能力，如丙酮酸進行縮合、脫羧生成乙酰甲基甲醇，此化合物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物，即伏-普反應陽性；不產(chǎn)生紅色化合物者為陰性反應。4. 檸檬酸鹽試驗是用來檢測細菌利用檸檬酸鹽試驗是用來檢測細菌利用檸檬酸的能力

10、。有些細菌能分解檸檬酸形成檸檬酸的能力。有些細菌能分解檸檬酸形成CO2，由于培養(yǎng)基中鈉離子的存在而形成碳酸鈉，使由于培養(yǎng)基中鈉離子的存在而形成碳酸鈉，使pH升高，培養(yǎng)基顏色變化。升高，培養(yǎng)基顏色變化。陽陽性性陰陰性性對對照照大腸桿菌、變形桿菌陽性；大腸桿菌、變形桿菌陽性；痢疾桿菌、沙門菌陰性；痢疾桿菌、沙門菌陰性；四種腸道桿菌四種腸道桿菌VP均為陽性均為陽性四種腸道桿菌四種腸道桿菌VP均為陰性均為陰性原理：某些細菌能分解培養(yǎng)基中硫氨基酸（如胱胺酸）產(chǎn)生疏化氫、硫化氫與硅酸亞鐵中的亞鐵離子結合形成黑色的硫化鐵，|變形桿菌，傷寒桿菌能產(chǎn)生硫化氫，生成黑色沉淀物；|大腸桿菌、痢疾桿菌不產(chǎn)生硫化氫；硫

11、化氫試驗陰性。原理：原理：|變形桿菌含有尿素酶，經(jīng)變形桿菌含有尿素酶，經(jīng)2 24 4小時培養(yǎng)能分解培養(yǎng)小時培養(yǎng)能分解培養(yǎng)基中較多量尿素產(chǎn)生大量基中較多量尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基的氨，使培養(yǎng)基PHPH變?yōu)辂|變?yōu)辂|性，而呈現(xiàn)紅色。即陽性性，而呈現(xiàn)紅色。即陽性反應，陽性反應可棄之。反應，陽性反應可棄之。|痢疾桿菌屬及沙門氏菌屬痢疾桿菌屬及沙門氏菌屬之細菌不能分解尿素而不之細菌不能分解尿素而不呈現(xiàn)堿性反應即陰性反應，呈現(xiàn)堿性反應即陰性反應，陰性反應陰性反應 需繼續(xù)作生化反需繼續(xù)作生化反應及血清學試驗。應及血清學試驗。（五）（五） 克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基反應試驗克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基反應試驗組成：基礎培養(yǎng)

12、基組成：基礎培養(yǎng)基1 1份葡萄糖份葡萄糖1010份乳糖鐵鹽酚紅份乳糖鐵鹽酚紅 營養(yǎng)營養(yǎng) 底物底物 底物底物 底物底物 指示劑指示劑( (酚紅指示劑酚紅指示劑: :酸性時黃色酸性時黃色, ,堿性時紅色堿性時紅色) )原理：原理：(1)(1)只分解葡萄糖只分解葡萄糖 產(chǎn)酸（葡萄糖少，產(chǎn)酸量少）產(chǎn)酸（葡萄糖少，產(chǎn)酸量少）(2)(2)分解葡萄糖乳糖分解葡萄糖乳糖 產(chǎn)酸（乳糖多，產(chǎn)酸多）產(chǎn)酸（乳糖多，產(chǎn)酸多） 上下層均為黃色上下層均為黃色(3)(3)產(chǎn)生產(chǎn)生H H2 2S S鐵鹽鐵鹽 FeS FeS 培養(yǎng)基成黑色培養(yǎng)基成黑色分解葡萄糖和乳糖只分解葡萄糖分解葡萄糖產(chǎn)生硫化氫對照管|動力試驗：動力試驗：分別取四種腸道桿菌的培養(yǎng)物，用穿分別取四種腸道桿菌的培養(yǎng)物，用穿刺接種方法接種于刺接種方法接種于4 4支半固體培養(yǎng)培養(yǎng)基，支半固體培養(yǎng)培