細(xì)胞移植修復(fù)脊髓損傷的進(jìn)展

1、細(xì)胞移植修復(fù)脊髓損傷的進(jìn)展         【關(guān)鍵詞】  細(xì)胞移植修復(fù)脊髓損傷的進(jìn)展脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)是脊柱損傷的嚴(yán)重并發(fā)癥，其一直是臨床工作中困擾人們的難題。SCI修復(fù)面臨的主要問題是：(1)脊髓空洞、膠質(zhì)瘢痕構(gòu)成阻礙軸突生長的機(jī)械屏障；(2)原發(fā)和繼發(fā)的神經(jīng)元凋亡，使脊髓缺乏自我修復(fù)能力；(3)神經(jīng)營養(yǎng)因子缺乏；(4)損傷局部存在抑制軸突再生的因素如Nogo、髓磷脂相關(guān)糖蛋白等1。近年來，細(xì)胞移植在實(shí)驗(yàn)性SCI的治療中顯示了良好的效果，給SCI的治療帶來了新的希望

2、。本文對(duì)細(xì)胞移植治療SCI的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。        細(xì)胞移植可以通過改變SCI后的病理過程從而促進(jìn)脊髓功能恢復(fù)，主要包括：(1)移植物可填充損傷部位并形成細(xì)胞橋，從而為損傷軸突的再生提供機(jī)械或生物通道；(2)分泌生長因子，為軸突或神經(jīng)元再生提供必要條件；(3)替代或提供新的神經(jīng)元從而形成新的神經(jīng)環(huán)路。目前細(xì)胞移植研究較多的是胚胎干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、骨髓基質(zhì)干細(xì)胞、臍血干細(xì)胞、雪旺細(xì)胞及嗅鞘細(xì)胞等。 1  干細(xì)胞移植      干細(xì)胞具有自我更新和

3、多向分化的能力，體外培養(yǎng)可以向神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等多種細(xì)胞分化，同時(shí)也是SCI基因治療的理想載體細(xì)胞。干細(xì)胞不僅可以從胚胎組織獲取，而且可以從成年哺乳動(dòng)物的腦或脊髓等組織中獲得，其分離純化及培養(yǎng)擴(kuò)增方法已較為成熟。1.1  胚胎干細(xì)胞  (embryonic stem cells，ESCs)        ESCs是從動(dòng)物早期胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)中分離出來的多能性細(xì)胞，它有與早期胚內(nèi)細(xì)胞群相似的生物學(xué)特征。1998年，Itskovitz-Eldor等2首次從人類的囊胚取得了ESCs并建立了人的ESCs系。ESC

4、s經(jīng)體外培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞后植入脫髓鞘病變大鼠模型的體內(nèi)，結(jié)果表明ESCs源性的前體細(xì)胞可與宿主神經(jīng)元建立聯(lián)系并為再生軸突髓鞘化3。Howard等4從基因修飾方面對(duì)ESCs進(jìn)行研究，將編碼抗凋亡蛋白的bcl-2基因?qū)SCs進(jìn)行修飾，移植入SCI部位，6周后發(fā)現(xiàn)移植部位發(fā)生明顯的異常生長，病理檢查發(fā)現(xiàn)移植部位發(fā)現(xiàn)大量未分化細(xì)胞，并向首尾端各移行達(dá)1.5 cm，結(jié)果表明bcl-2修飾的ESCs可以導(dǎo)致細(xì)胞的瘤樣生長，同對(duì)照組相比有更高的死亡率。目前研究來看，ESCs用于SCI的治療效果是肯定的，但是也存在許多問題有待解決，比如臨床應(yīng)用存在感染逆轉(zhuǎn)錄病毒及其它病原體

5、的危險(xiǎn)。尤其ESCs移植所涉及到的倫理方面的問題及來源問題限制了其臨床應(yīng)用5。1.2  神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cellS，NSCs)        胚胎組織移植促進(jìn)脊髓再生的根本原因在于其含有的大量NSCs，目前已經(jīng)可以分離和體外培養(yǎng)NSCs使之分化為各種神經(jīng)細(xì)胞。NSCs具有增殖、自我更新和多向分化能力。成年哺乳動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)存在一些休眠的NSCs。SCI后這些NSCs可以復(fù)蘇、增殖、分化來代替壞死凋亡的神經(jīng)元。Kulbatski等研究表明6，NSCs不僅存在于胚胎神經(jīng)系統(tǒng)，如大腦皮質(zhì)、海馬、紋

6、狀體、嗅球、腦室沿線包括側(cè)腦室、第三腦室和第四腦室、間腦、中腦、小腦、脊髓、視網(wǎng)膜中，也存在于成年動(dòng)物腦的某些部位，因此NSCs在哺乳動(dòng)物胚胎期神經(jīng)系統(tǒng)中的分布具有較大的普遍性。NSCs與其它干細(xì)胞類似，在體內(nèi)的分化過程均受到局部環(huán)境中各種信號(hào)分子的作用，在環(huán)境信號(hào)的作用之外，干細(xì)胞本身對(duì)不同信號(hào)的敏感性及不同信號(hào)濃度的反應(yīng)性不同，且表現(xiàn)出分化的時(shí)序性，復(fù)雜的內(nèi)外信號(hào)系統(tǒng)共同決定著NSC最終的走向。王巖峰7,8等通過對(duì)海馬源性研究表明NSCs移植后可以改變脊髓損傷區(qū)的微環(huán)境，上調(diào)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子mRNA，促進(jìn)生長相關(guān)蛋白43mRNA的表達(dá)，并認(rèn)為NSCs移植后可存活并促進(jìn)髓鞘蛋白前脂蛋白基因

7、的表達(dá)，是促進(jìn)脊髓損傷后髓鞘再生的機(jī)制之一。2005年，Nakamura等9從8-9周胚胎脊髓分離的富含NSCs的組織移植物在體外進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增并用BrdU標(biāo)記，移植入成年狨猴SCI部位后發(fā)現(xiàn)移植的NSCs存活良好并移行到距損傷中心7 mm處。雙重?zé)晒饷庖呷旧Y(jié)果表明移植后8周，NSCs分化成為神經(jīng)元和少突膠質(zhì)細(xì)胞。同對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組有更多的神經(jīng)微絲。對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行功能評(píng)價(jià)，實(shí)驗(yàn)組優(yōu)于對(duì)照組。移植NSCs于損傷脊髓替代或補(bǔ)充損傷的神經(jīng)元，誘導(dǎo)其向特定細(xì)胞類型分化并與宿主神經(jīng)元形成突觸聯(lián)系，是一種非常具有潛在臨床應(yīng)用價(jià)值的方法。1.3  骨髓基質(zhì)細(xì)胞(Bone marrow Stroma

8、l cellS，MSCs)        在骨髓除造血干細(xì)胞之外還存在一類具有干細(xì)胞特點(diǎn)并可以向多種非造血組織分化的細(xì)胞，被稱為骨髓基質(zhì)細(xì)胞。MSCs具有治療SCI潛能，可以進(jìn)行自體分離培養(yǎng)擴(kuò)增移植，從而避免了倫理方面的問題和免疫排斥反應(yīng)。加之取材、培養(yǎng)簡單，因而被認(rèn)為是進(jìn)行人體基因治療的理想載體細(xì)胞。MSCs可分化為多種非造血組織細(xì)胞，而且可以對(duì)其利用腺病毒或反轉(zhuǎn)錄病毒進(jìn)行基因修飾10，培養(yǎng)后重新移植入病人。Dezawa等11將大鼠和人的MSCs分離培養(yǎng)并定向分化成為神經(jīng)元和雪旺細(xì)胞。將分化來的神經(jīng)元和雪旺細(xì)胞進(jìn)行移植治療

9、SCI在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中取得了良好的效果。Bakshi等12從表達(dá)人胎盤堿性磷酸酶的轉(zhuǎn)基因大鼠獲取骨髓基質(zhì)細(xì)胞，利用腰穿技術(shù)將MSCs移植入SD大鼠的SCI部位，降低了SCI的囊變和再損傷，取得滿意的療效，移植入脊髓半切的大鼠脊髓內(nèi)的人MSCs無需進(jìn)行免疫抑制即可存活數(shù)月而沒有炎癥或免疫排斥反應(yīng)的跡象。這些優(yōu)點(diǎn)使MSCs成為臨床基因治療SCI的可選擇細(xì)胞。1.4  臍血干細(xì)胞(human umbilical cord blood tells，HUCBs)         人HUCBs具有多向分化潛能，在體外培養(yǎng)或體內(nèi)移植

10、后可分化為神經(jīng)細(xì)胞，并可促進(jìn)神經(jīng)損傷動(dòng)物的功能恢復(fù)。從遺傳學(xué)角度來講HUCBs比MSCs更適合于移植治療SCI。Kuh等13將HUCBs移植入大鼠SCI部位，通過免疫熒光染色，BBB功能評(píng)分，結(jié)果表明HUCBs移植組較對(duì)照組有更好的療效，而HUCBs聯(lián)合腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derired neutrophic factor，BDNF)組較其它各組療效更佳。雙重免疫熒光染色證實(shí)HUCBs分化為各種神經(jīng)細(xì)胞，并誘導(dǎo)運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)。Zhao等14將磁柱分選的臍血CD34+造血干細(xì)胞和骨髓MSC直接移植到脊髓半切模型大鼠的損傷區(qū)周圍，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雖然兩組大鼠的神經(jīng)功能均有明顯改善，但前者較后者

11、在移植后7 d和14 d的功能改善更為明顯。這表明，在促進(jìn)SCI的功能恢復(fù)方面，臍血CD34+細(xì)胞比骨髓MSC發(fā)揮作用的時(shí)間窗要早。同時(shí)，臍血細(xì)胞分化、替代損傷的神經(jīng)元可能不是損傷修復(fù)的唯一機(jī)制，還可能通過分泌營養(yǎng)因子和調(diào)節(jié)自體免疫過程來實(shí)現(xiàn)神經(jīng)保護(hù)功能。HUCBS來源豐富，取材方便，無任何生理與倫理問題，且有較強(qiáng)的增殖分化能力；HUCBS的低免疫應(yīng)答性使得同胞間或非血緣供者移植后的急、慢性移植物抗宿主病的發(fā)生率低且程度輕，這些優(yōu)點(diǎn)將使HUCBs成為SCI臨床治療的一個(gè)研究方向。2  雪旺細(xì)胞(Schwann cells，SCs)    

12、60; SCs是周圍神經(jīng)的主要結(jié)構(gòu)和功能細(xì)胞，在神經(jīng)再生中起著重要作用。SCs在神經(jīng)損傷后，分裂、增殖形成Bungner帶，引導(dǎo)軸突生長，并能合成分泌10余種SCs源性神經(jīng)營養(yǎng)因子，如神經(jīng)生長因子、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長因子等和層粘蛋白、纖維連接蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)以及神經(jīng)細(xì)胞粘附分子等細(xì)胞粘附分子，起到避免周圍神經(jīng)損傷后引起的神經(jīng)元逆行性死亡，引導(dǎo)和促進(jìn)軸突再生以及促進(jìn)髓鞘形成的作用15,16。近年來，利用SCs移植促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)軸突再生的研究進(jìn)展迅速。經(jīng)培養(yǎng)純化的SCs，無論在體內(nèi)或體外均能支持和促進(jìn)脊髓神經(jīng)突起的生長。Takami等17以NYU法制作大鼠SCl

13、模型，分別將嗅鞘細(xì)胞、SCs以及二者混合移植入損傷部位，12周后行脊髓病理切片、免疫組化染色，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3組脊髓空洞體積均較空白對(duì)照組明顯減小，細(xì)胞向損傷部位兩端擴(kuò)散。SCs移植組軸突再髓鞘化程度明顯高于其他3組；SCs移植組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物功能恢復(fù)最好。從而認(rèn)為SCs移植在SCI修復(fù)中的作用不可替代。SCs移植入SCI部位促進(jìn)軸突再生和功能恢復(fù)具體機(jī)制如下：(1)SCI后，SCs可橋接損傷區(qū)，并分裂、增殖形成Bungners帶，引導(dǎo)軸突生長；(2)形成髓鞘，覆蓋再生軸索：(3)減輕空腔形成和星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)，并可以吞噬局部膠質(zhì)瘢痕；(4)SCs可分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子，而神經(jīng)營養(yǎng)因子是對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的生長發(fā)育、

14、分化再生及功能具有調(diào)節(jié)作用的蛋白。        目前關(guān)于SCs的研究傾向于以下兩個(gè)方面：基因修飾SCs和自體激活SCs。2.1  基因修飾后的SCs移植治療SCI        隨著分子生物學(xué)的，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，可以將表達(dá)特定物質(zhì)的目的基因通過重組腺病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒、質(zhì)粒等轉(zhuǎn)入靶細(xì)胞內(nèi)，并保證其存活、分泌生長因子以及引導(dǎo)軸突生長所需的細(xì)胞外基質(zhì)等。近年來基因治療已被廣泛應(yīng)用于SCI治療，它可以提供長期、安全、部位局限的促進(jìn)脊髓功能恢復(fù)、軸突再生

15、的物質(zhì)；不僅如此，它還可以向中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的特定部位的實(shí)質(zhì)內(nèi)運(yùn)送營養(yǎng)因子，從而成為當(dāng)今SCI治療中的一大熱點(diǎn)。馮世慶18等將NGF和BDNF基因修飾的SCs應(yīng)用于SCI的治療，實(shí)驗(yàn)表明轉(zhuǎn)基因SCs可以持續(xù)大量分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子，從而讓局部釋放的神經(jīng)營養(yǎng)因子不斷刺激、引導(dǎo)宿主纖維和移植物的整合與聯(lián)系，促進(jìn)SCI的修復(fù)。陳禮剛等19將pSVPoMcat微基因修飾雪旺氏細(xì)胞(SC)脊髓內(nèi)移植，研究顯示PSVPoMoat微基因修飾SC可抑制GFAP的表達(dá)，促進(jìn)SCI后神經(jīng)元的功能恢復(fù)以及神經(jīng)軸突的再生?；蛐揎椀腟Cs具有以下特點(diǎn)：(1)移植后能在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)長期存活；(2)能分泌高水平的神經(jīng)營養(yǎng)因子

16、；(3)使軸突髓鞘化；(4)能誘導(dǎo)對(duì)神經(jīng)營養(yǎng)因子反應(yīng)的軸突生長旺盛；(5)可在體內(nèi)長時(shí)間的表達(dá)轉(zhuǎn)移基因。SCs不僅本身即可促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的再生、髓鞘的重建和部分神經(jīng)功能的恢復(fù)，同時(shí)又可作為SCI基因治療的移植載體。2.2  自體激活的SCs治療SCI        對(duì)自體SCs移植的研究一直進(jìn)展迅速，為了能夠更加迅速有效分離SCs，Vroemen等20利用磁性活細(xì)胞分類(magnetic-actiVated cell separation，MACS)技術(shù)分離表達(dá)p75低親和力神經(jīng)生長因子(low affinity

17、 nerve growthfactor receptor，p75LNGFr)的SCs，為臨床解決SCs來源提供迅速有效的方法。國內(nèi)馮世慶21,22等將自體激活的SCs植入SCI動(dòng)物模型，自體激活SCs移植后通過順行示蹤法標(biāo)記腦部皮質(zhì)脊髓束；標(biāo)記移植物和P0免疫組化法觀察移植物的存活情況；光鏡觀察脊髓組織形態(tài)學(xué)改變；并對(duì)大鼠后肢神經(jīng)功能恢復(fù)情況用BBB評(píng)分進(jìn)行評(píng)價(jià)，綜合評(píng)價(jià)對(duì)脊髓組織形態(tài)與功能的修復(fù)作用。并將此研究成果應(yīng)用于臨床，選擇合適的SCI志愿者行自體激活SCs移植I期臨床研究。結(jié)果表明：(1)采用自體激活SCs移植治療SCI，其自體激活的SCs可持續(xù)大量分泌脊髓再生所必需的神經(jīng)營養(yǎng)因子，

18、顯著促進(jìn)受損神經(jīng)元再生，誘導(dǎo)再生軸突通過損傷脊髓和移植物界面；(2)移植的SCs能夠填充損傷后的脊髓空洞，誘導(dǎo)軸突再生，連接損傷軸突的遠(yuǎn)、近端，恢復(fù)脊髓的解剖完整性，受損的軸突髓鞘化，恢復(fù)脊髓的傳導(dǎo)能力；(3)自體激活SCs混懸液中含有的巨噬細(xì)胞能夠吞噬膠質(zhì)瘢痕，減少脊髓再生抑制性微環(huán)境的產(chǎn)生；(4)自體細(xì)胞移植無免疫排斥反應(yīng)，不涉及倫理問題。        隨著SCs的提取、純化、培養(yǎng)擴(kuò)增技術(shù)和轉(zhuǎn)基因技術(shù)、自體激活技術(shù)的成熟，SCs移植治療SCI成為最有希望應(yīng)用于臨床的方法之一，但SCI后功能的恢復(fù)很大程度上依賴于再生的軸

19、突能否順利穿過膠質(zhì)瘢痕交界區(qū)域，能否建立有效的突觸聯(lián)接。植入的SCs在局部的遷移距離非常有限；而且其植入損傷脊髓后是否能長時(shí)間存活，從而最大限度地保證損傷軸突再髓鞘化和脊髓再生也尚未確定22,23。因此，如何保持SCs移植入SCI部位后的生物活性并增加其遷移范圍，使再生軸突突破SCI膠質(zhì)瘢痕界面，建立由功能的突觸聯(lián)接將是今后研究的方向之一。3  嗅鞘細(xì)胞(olfactory ensheathing cells，OECs)        嗅粘膜神經(jīng)元是體內(nèi)唯一生后形成的神經(jīng)元，它在成熟的個(gè)體內(nèi)可持續(xù)分裂，OECs在成

20、年哺乳動(dòng)物終生都可以成功地誘導(dǎo)嗅覺軸突再生。OEC是一種特殊的膠質(zhì)細(xì)胞，分布于嗅神經(jīng)的全長構(gòu)成嗅神經(jīng)元賴以生存的外環(huán)境。OECs兼具雪旺細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的特點(diǎn)，但它與二種細(xì)胞又不同。原位雜交研究提示OEC不僅可以分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子還能表達(dá)層黏蛋白、纖黏連蛋白、膠質(zhì)源性連接素和神經(jīng)細(xì)胞黏附分子等促進(jìn)軸突的修復(fù)和再生。Lopez-Vales等24將OECs移植入大鼠T8SCI部位，運(yùn)動(dòng)功能得到顯著改善，為臨床應(yīng)用OECs治療SCI提供理論基礎(chǔ)。Santos等25的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，SCI后植入OECs，大鼠的運(yùn)動(dòng)功能和感覺運(yùn)動(dòng)反射得到恢復(fù)，相關(guān)的上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突再生長入脊髓橫斷處的遠(yuǎn)端組織內(nèi)，并生長較

21、長距離。然而也有一些作者持不同意見，一些實(shí)驗(yàn)研究表明并非OECs直接促進(jìn)了髓鞘化和軸突再生26。OECs植入SCI部位后，增強(qiáng)了損傷部位自體雪旺細(xì)胞的內(nèi)在功能，和雪旺細(xì)胞一起為軸突再生提供良好的三維立體微環(huán)境。1             Collazos-Castro等27通過實(shí)驗(yàn)表明OECs植入SCI部位后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)功能并沒有得到改善，反而可以導(dǎo)致軸突的異常生長。作者建議在進(jìn)行臨床之前，應(yīng)該作進(jìn)一步研究。      &#

22、160; 盡管關(guān)于OECs的功能眾說紛紜，但是植入OECs是SCI的一種有希望的方法，用OECs治療人類SCI，可直接從患者的嗅粘膜獲得OECs并進(jìn)行培養(yǎng)，用于治療SCI，可解決免疫排斥反應(yīng)問題。目前自體OECs移植治療SCI已經(jīng)進(jìn)入I期臨床研究階段28，29，但真正應(yīng)用于臨床治療SCI尚需時(shí)日。 4  與展望        SCI損傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)研究中細(xì)胞移植為提高軸突再生能力、替代細(xì)胞成分、阻止脫髓鞘和使髓鞘再生等，從而促進(jìn)脊髓修復(fù)，進(jìn)而為感覺及運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)提供了機(jī)會(huì)，而且某些方面已取得了可喜成就，有些甚至已經(jīng)進(jìn)

23、入了臨床試驗(yàn)階段。然而所有這些對(duì)脊髓長距離上行或下行纖維的修復(fù)是不夠的。目前的脊髓再生研究多關(guān)注下行運(yùn)動(dòng)纖維的再生及運(yùn)動(dòng)功能的改善，而事實(shí)上，上行感覺纖維的再生及感覺功能的恢復(fù)也不容忽視。各移植細(xì)胞在脊髓損傷治療中的作用機(jī)理不同，所以聯(lián)合移植將是研究的一個(gè)方向。        另外SCl的治療，軸突的再生是受多方面因素影響的。如何克服這些抑制軸突再生的因素，使再生的軸突穿越膠質(zhì)瘢痕產(chǎn)生有效的突觸聯(lián)接，恢復(fù)損傷后的脊髓功能將是值得我們?nèi)ド钊胩剿鞯?。目前的研究大多還停留在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段，要想應(yīng)用于臨床尚有大量問題需要解決。把脊髓再

24、生修復(fù)的研究成果應(yīng)用于臨床SCI治療的工作剛剛起步，還需要我們?nèi)ド钊胩剿餮芯俊！尽?#160; 1 Corti S, Locatelli F, Papadimitriou D, Strazzer S, Comi GP. Somatic stem cell research for neural repair: current evidence and emerging perspectivesJ.Ce11 Mol Med,2004,8 (3): 329-337.2 Lerou PH, Daley GQ. Therapeutic potential of embryonic stem ceils

25、J.Blood gev,2005,19 (6): 321-331.3 Faulkner J, Keirstead HS. Human embryonic stem cellderived oligodendrocyte progenitors for the treatment of spinal cord injuryJ.Transpl Immunol,2005，15 (2): 131-142.4 Howard MJ, Liu S, Schottler F, et al. Transplantation of apoptosisresistant embryonic stem cells i

26、nto the injured rat spinal cordJ. Somatosens Mot Res,2005,22 (1-2): 37-44.5 Rodriguez CI, Galan A, Valbuena D, et al. Derivation of clinicalgrade human embryonic stem cellsJ. geprod Biomed Online, 2006,12(1): 112-118.6 I Kulbatski,AJ Mothe, H Nomura, and CH Tarot. Endogenous and exogenous CNSderived

27、 stem/progenitor cell approaches for neurotraumaJ. Curr Drug Targets, 2005,6(1): 111-126.7 王巖峰，呂剛，李花等.神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠脊髓損傷后BDNF與GAP43基因表達(dá)的影響J.2004，12：1870-1872.8 王巖峰，呂剛，刁延娜,等.神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)脊髓損傷后PLP基因表達(dá)的影響J.矯形外科雜志，2005，13：605-607.9 Nakamura M, Toyama Y, Okano H,et al. Transplantation of neural stem cells for spi

28、nal cord injuryJ.2005,45(ll):874-876.10Lu P,Jones LL, Tuszynski MH. BDNFexpressing marrow stromal cells support extensive axonal growth at sites of spinal cord injuryJ.Exp Neurol. 2005,191(2):344-360.11Dezawa M, Hoshino M, Nabeshima Y, et al. Marrow stromal ceils: implicationsin health and disease in the nervous systemJ. Curr Mol Med,2005,5(7):723-732.12Bakshi A, Barshinger AL, Swanger SA, et al. Lumbar puncture delivery of bone marrow stromal cells in spinal cord contusion: a novel method for minimally invasive cell transplantationJ.