HCV不同標志物檢測結(jié)果比較分析.docx

1、HCV不同標志物檢測結(jié)果比較分析李華龍潤?quán)l(xiāng)楊蓉蔣蕊鞠董承紅易紅昆白慈珠謝忠平摘要目的分析丙型肝炎病毒抗原、抗體及核酸標志物實驗室檢測結(jié)果之間的關(guān)聯(lián)性。方法用丙型肝炎病毒抗體(HCV-Ab).丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)擴增(PCR)熒光定斌、丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-CAg)及丙型肝炎病毒抗原(HCV-Ag)檢測試劑食，分別檢測血清或血漿樣品中的HCV-Ab、HCV-RNA、HCV-CAg和HCV-Ag丙型肝炎病毒4種標志物，對檢測結(jié)果之間的關(guān)聯(lián)性進行分析。結(jié)果在1551份血清或血漿樣品中，共檢出HCV-Ab陽性樣品565份(36.43%)、HCV-Ag(游離抗原)陽性樣品48份(3

2、.09%)JiCV-RNA陽性樣品317份(20.44%)JICV-CAg陽性樣品25份(1.61%),HCV-Ab及HCV-RNA檢出率明顯高于抗原檢出率(P0.01),其陽性樣品檢出率按高低順序依次為HCV-Ab、HCV-RNAJiCV-Ag和HCV-CAg。結(jié)論4種標志物的檢測可以聯(lián)合運用，能有效降低HCV-Ab檢測帶來的漏檢風(fēng)險。關(guān)鍵詞丙型肝炎病毒標志物HCV-AbHCV-RNAHCV-CAgHCV-AgComparativeStudyontheResultsDetectedbyDifTerentMarkersofHepatitisCVirus,liHua,longRunxiang,Y

3、angRang,etal.InstituteofMedicalBiology,PekingUnionMedicalCollege,ChineseAcademyofMedicalScience,Yunnan6501J8,ChinaAbstractObjectiveToanalyzetherelevanceofresultsdetectedbyHCV-CAg,HCV-Ab,HCV-RNAasmarkers.MethodsTheenzymeimmunoassaykitswereusedtomeasurethelevelofHCV-Ab,HCV-RNA,HCV-CAgandHCV-Aginserumo

4、rplasmasamples,andthecorrelationamongthemwasevaluatedbystatisticanalysis.ResultsThepositiveofHCV-Ab,HCV-RNA,HCV-CAgandHCV-Agwere565,317,48,25amongthe1551clinicalserumandplasmasamples,respectively.ThedetectionrateofHCV一AbandHCV-RNAwasobviouslyhigherthanHCV-CAg(PHCV-RNAHCV-CAgHCV-Ag.ConclusionTheunite

5、dapplicationofdifferentfourmarkerscanreducetheundetectedprobabilityefficiently.KeywordsHepatitisCvirus；Marker；HCV-Ab；HCV-RNA；HCV-CAg；HCV-Ag丙型病毒性肝炎是由丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus,HCV）感染引起的重要的世界性傳染病之一，在中國人群的感染率達3.2%,其中50%-85%感染者發(fā)展為慢性丙型肝炎,10%-30%發(fā)展為肝硬化，肝硬化患者中約3%10%可演變?yōu)楦渭毎?。HCV初發(fā)感染往往比較隱匿，僅有約20%30%的感染者呈急性肝炎表現(xiàn),所

6、以選擇快速、靈敏、特異的檢測方法檢出HCV十分重要1）。本研究應(yīng)用HCV核心抗原試劑盒、HCV游離抗原試劑盒、丙型肝炎病毒（HCV）抗體檢測試劑盒（ELISA）及HCV核酸擴增（PCR）熒光定量檢測試劑盒，對1551份血清或血漿臨床樣品檢測內(nèi)型肝炎病毒不同的標志物，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。材料與方法1.材料：（】）血清或血漿標本來源：云南省第一人民醫(yī)基金項目：國家島技術(shù)發(fā)展計劃（863”項目）基金資助項目（2007AA02Z400）；云南省聯(lián)合資助項目計劃（2OO8GAOO8）作者簞位：650118昆明，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所/云南省重大傳染病疫苗研究重點實驗室通訊作者：謝忠平

7、，電子信箱:XZP218院、昆明醫(yī)學(xué)院第一附屬人民醫(yī)院及云南省血液中心3個單位的血清或血漿樣品。（2）丙型肝炎病毒核酸擴增（PCR）熒光定量檢測試劑：深圳匹基生物工程有限公司生產(chǎn)，批號20080702o（3）丙型肝炎病毒核心抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）：國內(nèi)某公司上市產(chǎn)品，批號20091101。（4）丙型肝炎病毒抗體檢測試劑盒（ELISA）：上?？迫A生物工程有限公司生產(chǎn)，批號200908011。（5）丙型肝炎病毒游離抗原檢測試劑盒（EL1SA）：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所生產(chǎn)。2.方法：（1）丙型肝炎病毒核酸擴增（PCR）熒光定信檢測：采用丙型肝炎病毒核酸擴增（PCR）熒光定信檢測試劑，按

8、試劑盒說明書進行熒光定成檢測。（2）內(nèi)型肝炎病毒核心抗原檢測：按試劑盒說明書進行ELISA檢測HCV-Ags（3）丙型肝炎病毒抗體檢測：按試劑盒說明書進行ELISA檢測HCV-Ab。（4）丙型肝炎病毒游離抗原檢測：包被HCV多表位復(fù)合抗原的多克隆抗體酶標板，先加入樣品緩沖液50凹1,待檢樣品50,371孵育2h,洗板5次后，加酶結(jié)合物100微升/孔，37T孵育lh。洗板5次后，加TMB顯色液,室溫顯色15min,于450nm波長檢測0D值。結(jié)果1.HCV不同標志物檢測結(jié)果分析：在1551份血清或血漿樣品中，共檢出HCV-Ab陽性樣品565份、HCV-Ag陽性樣品48份、HCV-RNA陽性樣品3

9、17份.HCV-CAg陽性25樣品。其中，HCV-Ab陽性樣品（陽性率36.43%）檢出率高于HCV-Ag陽性樣品（陽性率3.09%次2=543.422,P=0.000）、HCV-CAg陽性樣品（陽性率1.61%,*2=610.320,P=0.000）及HCV-RNA陽性樣品（陽性率20.445%,/=97.437,P=0.000）,2種試劑檢出率皆顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義;HCV-Ag陽性樣品檢出率（3.09%）高于HCV-CAg陽性樣品（1.61%）,2種試劑檢出率顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義（?=7.421,?=0.006）；HCV-RNA陽性樣品（20.44%）檢出率高于HCV-Ag陽性樣品（3.

10、09%）,2種試劑盒檢出率顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義（V=224.687,P=0.000）；HCV-RNA陽性樣品（20.44%）檢出率高于HCV-CAg陽性樣品（1.61%）,2種試劑檢出率顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義（X=280.203,P=0.000,表1）01HCV抗原檢測試劑盒臨床研究1551份樣品結(jié)果分析部分樣品多個指標均為陽性，所以各指標項下數(shù)據(jù)和大于所檢測樣品總數(shù)分析指標HCV-AbUCV-ArHCVCArHCV-RNA全陰性合計陽性陽性陽性陽性樣品數(shù)5654S253179841551百分率（%）36.433.091.6120.4463.442.HCV-Ab指標相關(guān)性檢測結(jié)果分析：在565份

11、HCV-Ab陽性樣品中，檢出48份HCV-Ag（游離抗原）陽性樣品，檢出率為8.50%；檢出23份HCV核心抗原（HCV-CAg）陽性樣品，檢出率為4.07%；檢出317份HCV-RNA陽性樣品，檢出率為56.11%。在984份全陰性樣品中，檢出2份HCV核心抗原（HCV-CAg）陽性樣品.檢出率為0.20%；但未檢出HCV抗原及HCV-RNA（表2）。以上結(jié)果說明：HCV-RNA、HCV-Ag及HCV-CAg在HCV-Ab陽性樣品中的檢出率明顯高于HCV-Ab陰性樣品,具有明顯的關(guān)聯(lián)性。衰2HCV抗原檢測試劑盒臨床研究不同性質(zhì)樣品結(jié)果分析樣品特性HCV-Ag陽性HCV-CAg陽性HCV-RN

12、A陽性樣品數(shù)樣品數(shù)百分率（%）樣品數(shù)百分率（%）樣品數(shù)百分率（%）HCV-Ab陽性488.50234.0731756.11565HCV-Ab陰性0020.2000984合計483.09251.6131720.4415513.兩種HCV抗原檢測試劑檢測結(jié)果分析：在317份HCV-Ab及HCV-RNA雙陽性的樣品中，HCV抗原檢測試劑檢出34份HCV游離抗原陽性樣品（陽性率10.73%）,HCV核心抗原檢測試劑檢出23份HCV核心抗原陽性樣品（陽性率7.26%）,HCV抗原檢測試劑檢出率高于HCV核心抗原檢測試劑，但2種試劑檢出率顯示差異無統(tǒng)計學(xué)意義（*2=2.333,P=0.1267）O在248

13、份HCV-Ab陽性、但HCV-RNA陰性的樣品中，HCV抗原檢測試劑檢出14份HCV游離抗原陽性樣品（陽性率5.65%）,HCV核心抗原檢測試劑未檢出陽性樣品（陽性率0）,2種試劑檢出率有明顯差異（尸=14.407,P=0.0001）。在984份HCV-Ab及HCV-RNA雙陰性的樣品中，HCV抗原檢測試劑未檢出陽性樣品（陽性率0）,HCV核心抗原檢測試劑檢出2份HCV核心抗原陽性樣品（陽性率0.20%）,2種試劑檢出率無明顯差異（校正比？=0.501,2=0.479,表3）。表32種HCV抗原檢測試劑對不同樣品檢測結(jié)果分析檢測試劑HCV-Ab陽性HCV-Ab陽性HCV-Ab陰性土HCV-Ab

14、陽性HCV-RNAPHftHCV-RNA陰性HCV-RNA陰性（ns565）（r=317）（n=248）（n=986）陽性數(shù)百分率（%）陽性數(shù)百分率（%）陽性數(shù)百分率（%）陽性數(shù)白分率（%）HCV-Ag檢測HCV-CAg檢測3410.73145.65488.5000237.2600234.0720.20統(tǒng)計分析V=2.333,P=0.127x2=14.407,P=0.000x2=9.393=0.002校正x2=0.501,P=0.4794.HCV-Ab與HCV-RNA檢測結(jié)果關(guān)聯(lián)性分析:將本次所有樣品HCV-RNA（熒光定覺PCR）與HCV-Ab（ELISA）檢測結(jié)果進行分析，若以HCV-RN

15、A結(jié)果為金標準，則與用于HCV-Ab（ELISA）檢測結(jié)果一致性84.01%、靈敏度100.00%、特異度79.90%、陽性預(yù)測值56.11%、陰性預(yù)測值100.00%oHCV-Ab（ELISA）檢出率（36.43%）明顯高于核酸檢出率（20.44%）。二者之間差異經(jīng)配對檢驗有顯著性（/=248.0,P=0.0000）；對兩種檢測結(jié)果進行關(guān)聯(lián)度分析，兩種檢測結(jié)果明顯相關(guān)，其=0.6696（/=6919,P=0.0000）。若以HCV-Ab結(jié)果為金標準，則與HCV-RNA（熒光定敏PCR）檢測結(jié)果一致性、靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值分別為84.01%、56.11%J00.00%J00.

16、00%及79.90%。此結(jié)果提示，由于檢測原理及檢測的病毒標志物不同，熒光定鼠PCR與ELISA法檢測結(jié)果之間存在一定的差異，并不能完全吻合而取代，也許更重要的是相互補充（表4）。表4HCV-Ab與HCV-RNA檢測結(jié)果分析HCV-Ab（批簽發(fā)產(chǎn)品）HCV-RNA（金標準）合計陽性陰性陽性317248565(36.43%)陰性0986986合計317(20.44%)12341551討論HCV感染的實驗室檢查是內(nèi)型肝炎診斷的重要依據(jù)，所以檢測方法的選擇非常重要。HCV感染通常是持續(xù)性的終生感染，抗體檢測是一個非常有效的方法，但由于存在“窗口期”及“靜默感染”，此期檢測不到相應(yīng)的抗體，所以仍然有輸

17、血后丙肝的發(fā)生6）。國外資料報道ELISA法檢測HCV核心抗原比檢測HCV抗體縮短窗口期平均58.2天，僅比RT-PCR檢測HCV-RNA多0.243.33天，而抗體出現(xiàn)則比檢測到HCV-RNA晚28140天。反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）是一個很敏感的方法。HCV-RNA可以在暴露后的12周被檢出。另外，在一些HCV感染后恢復(fù)期的人群中，抗HCV可能會逐漸降低到檢測限之下，或免疫功能低下的HCV感染者，抗HCV會持續(xù)陰性，這時，HCV-RNA的檢測是感染的唯一證據(jù)。故使用RT-PCR技術(shù)檢測HCV-RNA是判斷感染最有效的方法。但其技術(shù)復(fù)雜、條件要求較高，不易在多數(shù)實驗室推廣。HCV抗原

18、（HCV-Ag）包括核心抗原（HCV-CAg）、NS5、NS3及NS4等，是HCV感染者體內(nèi)出現(xiàn)的早期感染標志，其消長趨勢與HCV-RNA有明顯的一致性，具有早期診斷的重要價值。HCV-Ag或HCV-CAg的檢測有助于評價HCV在細胞中的表達情況。ELISA法較PCR法簡便、快速，其方法簡單、影響因素少、重復(fù)性好。因此，在不具備RNA檢測條件的實驗室開展HCV-CAg檢測或HCV-Ag檢測是很好的篩查方法。本研究在1551份血清或血漿樣品中，共檢出HCV-Ab陽性樣品565份（陽性率為36.43%）、HCV-RNA陽性樣品317份（陽性率為20.445%）,2種試劑檢出率顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義（

19、x2=97.437,?=0.000）。HCV-RNA較HCV-Ab檢出率低，原因是由于本實驗采集的樣品部分為特殊樣品，且在HCV的3種標志物中，RNA不穩(wěn)定，而核酸的穩(wěn)定性較抗體差，導(dǎo)致在進行RT-PCR檢測時，樣品的檢出率降低t，0J，o在317份HCV-Ab和HCV-RNA雙陽性樣品及984份HCV-Ab.和HCV-RNA雙陰性樣品，HCV-Ag及HCV-CAg2種標志物檢測結(jié)果檢出率差異皆無統(tǒng)計學(xué)意義，由此說明HCV-Ag檢測與HCV-CAg檢測結(jié)果有高度的相關(guān)性。但在565份HCV-Ab陽性樣品中檢出48份HCV-Ag（檢出率為8.50%）,23份HCV-CAg（檢出率為4.07%）,

20、2種試劑檢出率有明顯差異（*2=9.393,P=0.0022）；在248份HCV-Ab陽性、但HCV-RNA陰性的樣品中，未檢測出HCV-CAg陽性樣品，而HCV抗原檢測試劑檢出14份，陽性率達5.65%,2種試劑檢出率有明顯差異（P=0.000）o可能是因為HCV-Ag檢測試劑所使用的抗體為HCV多表位復(fù)合抗原的多克隆抗體，除C表位外，尚有NS3、NS5等多個表位，相對于HCV核心抗原的單克隆而言，捕獲能力強、檢測靈敏度提高。綜合比較分析，HCV的抗原、抗體及核酸標志物之間是相互關(guān)聯(lián)的，任何單一標志物的檢測均存在漏檢風(fēng)險，HCV-CAg試劑與HCV-Ag試劑可作為HCV-Ab檢測的補充試劑，

21、可聯(lián)合應(yīng)用于臨床檢測及血源篩選，但其靈敏度有待提高m：。參考文獻1付涌水.丙型肝炎病毒感染的流行病學(xué)J.中國輸血雜志，2009,22（11）:873-875物朝國，陳川.丙型肝炎病毒感染的實驗室檢測及臨床應(yīng)用J.國外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊，2004,25（4）：379-3812 KrajdenM.ShivjiR,GunadatmK,etal.Evaluationofthecoreantigenassayasasecond-linesupplementaltestfordiagnosisofactivehepatitisCvirusinfectionJ.JClinMicrobiol,200

22、4,42（9）：4054-4059LegrerTJ,RiggertJ,SimsonG,elal.TestingofindividualblooddonationsforHCVRNAreducestheresidualriskoftransfusion-transmittedHCVinfectionJ.Trannfusion,2000,40(10):192-1973 WidellA,MoinegrenV,PieksmaF,al.DetectionofhepatitisCoreantigeninserumorplasmaasamarkerofhepatitisCviraemiaintheserol

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26、南醫(yī)學(xué),2008,19(10):152-153(收稿：2011-10-15)(修回：2011-10-20)足踝部腱鞘巨細胞瘤的臨床分型、分期與治療張宇栗向東王殊郭征李靖范宏斌劉軍朱偉軍摘要目的總結(jié)足踝部腱鞘巨細胞痛臨床特點與治療、預(yù)后之間的關(guān)系，建立一種能指導(dǎo)診斷、治療、預(yù)測預(yù)后的臨床分型、分期方法。方法回顧性分析1984-2009年期間21例足踝部酸鞘巨細胞痛住院患者的臨床資料及隨訪結(jié)果，據(jù)此對足踝部腱鞘巨細胞瘤進行臨床分型、分期。結(jié)果21例患者以男性居多，患者平均年齡為38.0歲，腫擒好發(fā)于右足(71.4%)以及滑膜關(guān)節(jié)周圍(81.0%),半數(shù)以上患者以無痛性腫物為主要癥狀(61.9%),

27、X線檢查對關(guān)節(jié)受腫瘤侵犯的檢出率低(66.7%),但MRI非常敏感(100%),病理檢查提示大部分腫瘤細胞增生活躍(52.4%)o根據(jù)腫瘤的生物學(xué)行為可將其分為兩型；A型位于足踝部腱鞘周圍；B型位于足踝部大關(guān)節(jié)周圍。其中B型又劃分為I期：局限于包膜內(nèi)；II期：突破包膜局部浸潤；ID期：彌漫侵襲并進入關(guān)節(jié)腔。21例病例中A型4例，B型17例(I期6例，口期9例，皿期2例)。對A型和B型I期患者行邊緣切除,Bin期給予灶內(nèi)切除和術(shù)后放療，DI期在擴大切除的基礎(chǔ)上輔以放療。對所有病例經(jīng)過平均119.6個月的隨訪，僅I例B型皿期患者于術(shù)后9月復(fù)發(fā)并惡性變，其余患者功能恢復(fù)滿意。結(jié)論足踝部的!精巨細胞瘤包含生物學(xué)行為特點不同的兩種亞型，根據(jù)臨床資料對腫瘤進行分型、分期，可以很好地指導(dǎo)治療和改善預(yù)后。關(guān)鍵詞腱鞘巨細胞痛足踝臨床分型與分期手術(shù)治療輔助治療ClassificationandTreatmentofGiantCellTumorofTendonSheathiatheFootandAnkle.ZhangYu,LiXiangdong,WangZhen,Guozheng,IaJing,FanHongbin,LiuJun,ZhuWeijun.InstituteofOrthopedicSurgery,