乳及乳制品中亞硝酸鹽含量的測定

1、 乳及乳制品中亞硝酸鹽的測定學習目標學習目標v知識目標：知識目標：v1. 1. 能解釋測定亞硝酸含量原理，寫出測定亞硝酸鹽含量的能解釋測定亞硝酸含量原理，寫出測定亞硝酸鹽含量的流程和注意事項。流程和注意事項。v技能目標：技能目標：v1.1.會正確使用分光光度計；會正確使用分光光度計；v2.2.能正確繪制標準曲線；能正確繪制標準曲線；v3.3.能準確報告檢測結(jié)果，評價亞硝酸鹽含量是否符合標準。能準確報告檢測結(jié)果，評價亞硝酸鹽含量是否符合標準。 v素質(zhì)目標：素質(zhì)目標： 1.1.培養(yǎng)學生嚴謹、務實的學習精神；培養(yǎng)學生嚴謹、務實的學習精神； 2.2.培養(yǎng)學生開拓創(chuàng)新、團結(jié)協(xié)作的職業(yè)素質(zhì)。培養(yǎng)學生開拓創(chuàng)

2、新、團結(jié)協(xié)作的職業(yè)素質(zhì)。 檢測依據(jù)檢測依據(jù)乳及乳制品中亞硝酸鹽與硝乳及乳制品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定酸鹽的測定離子色譜法離子色譜法分光光度法分光光度法123GB 5009.33-2010乳及乳制品中亞硝酸鹽的測定乳及乳制品中亞硝酸鹽的測定vGB 5009.33-2010-GB 5009.33-2010-第三法第三法測定原理測定原理v試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在濾液中，加入磺胺和試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在濾液中，加入磺胺和N-1-萘基萘基-乙二胺二鹽酸鹽，使其顯粉紅色，然后用分光光乙二胺二鹽酸鹽，使其顯粉紅色，然后用分光光度計在度計在538 nm波長下測其吸光度。波長下測其吸光度。v將

3、測得的吸光度與亞硝酸鈉標準系列溶液的吸光度進行比將測得的吸光度與亞硝酸鈉標準系列溶液的吸光度進行比較，就可計算出樣品中的亞硝酸鹽含量。較，就可計算出樣品中的亞硝酸鹽含量。具體工作任務分解具體工作任務分解任務任務3：樣品亞硝酸鹽含量測定：樣品亞硝酸鹽含量測定 任務任務2：樣品預處理：樣品預處理 任務任務4：結(jié)果記錄并分析處理：結(jié)果記錄并分析處理 任務任務1：儀器設備及試劑的準備：儀器設備及試劑的準備任務任務5：填寫檢驗報告單：填寫檢驗報告單 任務一：儀器設備及試劑的準備任務一：儀器設備及試劑的準備v儀器儀器v所有玻璃儀器都要用蒸餾水沖洗，以保證不帶有亞硝酸鹽。所有玻璃儀器都要用蒸餾水沖洗，以保證

4、不帶有亞硝酸鹽。v天平：感量為天平：感量為0.1 mg和和1 mg。v燒杯：燒杯：100 mL。v錐形瓶：錐形瓶：250 mL，500 mL。v比色管：比色管：50 mL。v移液管：移液管：1 mL、2 mL、5 mL和和10 mL。v量筒：根據(jù)需要選取。量筒：根據(jù)需要選取。v玻璃漏斗：直徑約玻璃漏斗：直徑約9 cm，短頸。，短頸。v定性濾紙：直徑約定性濾紙：直徑約18 cm。v分光光度計：測定波長分光光度計：測定波長538 nm，使用，使用1 cm2 cm光程的比色光程的比色皿。皿。任務一：儀器設備及試劑的準備任務一：儀器設備及試劑的準備v試劑：試劑：測定用水應是不含亞硝酸鹽的蒸餾水或去離子

5、水。測定用水應是不含亞硝酸鹽的蒸餾水或去離子水。v鹽酸鹽酸-氨水緩沖溶液：氨水緩沖溶液：pH 9.609.70。v硫酸鋅溶液硫酸鋅溶液v亞鐵氰化鉀溶液亞鐵氰化鉀溶液v顯色液顯色液1：體積比為：體積比為450:550的鹽酸。的鹽酸。v顯色液顯色液2：5 g/L的磺胺溶液。的磺胺溶液。v顯色液顯色液3：1g/L鹽酸萘乙二胺溶液鹽酸萘乙二胺溶液v亞硝酸鈉標準溶液：相當于亞硝酸根的濃度為亞硝酸鈉標準溶液：相當于亞硝酸根的濃度為1.00g /mL。v將亞硝酸鈉在將亞硝酸鈉在110120的范圍內(nèi)干燥至恒重。冷卻后稱的范圍內(nèi)干燥至恒重。冷卻后稱取取0.150 g，溶于，溶于1000 mL容量瓶中，用水定容。

6、在使用的當容量瓶中，用水定容。在使用的當天配制該溶液。取天配制該溶液。取10 mL上述溶液和上述溶液和20 mL緩沖溶液于緩沖溶液于1000 mL容量瓶中，用水定容。每容量瓶中，用水定容。每1 mL該標準溶液中含該標準溶液中含1.00g的的NO2。分光光度計的使用分光光度計的使用v（1）預熱儀器）預熱儀器 將選擇開關置于將選擇開關置于“T”，打開電源開關，使儀，打開電源開關，使儀器預熱器預熱20分鐘。分鐘。v為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照，預熱儀器時和不測定為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照，預熱儀器時和不測定時應將試樣室蓋打開，使光路切斷。時應將試樣室蓋打開，使光路切斷。 v（2）選定波長）

7、選定波長 根據(jù)實驗要求，轉(zhuǎn)動波長手輪，調(diào)至所需要根據(jù)實驗要求，轉(zhuǎn)動波長手輪，調(diào)至所需要的單色波長。的單色波長。 v（3）調(diào)節(jié)）調(diào)節(jié)T=0% 輕輕旋動輕輕旋動“0%”旋鈕，使數(shù)字顯示為旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”（此時試樣室是打開的）。（此時試樣室是打開的）。 v（4）調(diào)節(jié)）調(diào)節(jié)T=100% 將盛蒸餾水（或空白溶液，或純?nèi)軇⑹⒄麴s水（或空白溶液，或純?nèi)軇┑谋壬蠓湃氡壬笞苤械牡谝桓駜?nèi)，并對準光路，把試的比色皿放入比色皿座架中的第一格內(nèi)，并對準光路，把試樣室蓋子輕輕蓋上，調(diào)節(jié)透過率樣室蓋子輕輕蓋上，調(diào)節(jié)透過率“100%”旋鈕，使數(shù)字顯示旋鈕，使數(shù)字顯示正好為正好為“100.0”。 v（

8、5）吸光度的測定）吸光度的測定 將選擇開關置于將選擇開關置于“A”，蓋上試樣室，蓋上試樣室蓋子，將空白液置于光路中，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)節(jié)旋鈕，使蓋子，將空白液置于光路中，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)節(jié)旋鈕，使數(shù)字顯示為數(shù)字顯示為“.000”。將盛有待測溶液的比色皿放入比色。將盛有待測溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格內(nèi)，蓋上試樣室蓋，輕輕拉動試樣架皿座架中的其它格內(nèi)，蓋上試樣室蓋，輕輕拉動試樣架拉手，使待測溶液進入光路，此時數(shù)字顯示值即為該待拉手，使待測溶液進入光路，此時數(shù)字顯示值即為該待測溶液的吸光度值。讀數(shù)后，打開試樣室蓋，切斷光路。測溶液的吸光度值。讀數(shù)后，打開試樣室蓋，切斷光路。重復上述測定操作重復上述測

9、定操作12次，讀取相應的吸光度值，取平次，讀取相應的吸光度值，取平均值。均值。 v （6）關機）關機 實驗完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，實驗完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架用軟紙擦凈。并將比色皿座架用軟紙擦凈。注意事項注意事項 v（1）為了防止光電管疲勞，）為了防止光電管疲勞，不測定時必須將試樣室蓋打開不測定時必須將試樣室蓋打開，使光路切斷，以延長光電管的使用壽命。使光路切斷，以延長光電管的使用壽命。 v（2）取拿比色皿時，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而）取拿比色皿時，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光學表面。不能碰比色皿的光學表面。 v（3）比色皿不能用堿

10、溶液或氧化性強的洗滌液洗滌，也不）比色皿不能用堿溶液或氧化性強的洗滌液洗滌，也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附著的水或溶液應用擦鏡紙或細能用毛刷清洗。比色皿外壁附著的水或溶液應用擦鏡紙或細而軟的吸水紙吸干，不要擦拭，以免損傷它的光學表面。而軟的吸水紙吸干，不要擦拭，以免損傷它的光學表面。 任務二：樣品預處理任務二：樣品預處理v一、樣品的稱取和溶解：一、樣品的稱取和溶解：v在在100 mL燒杯中稱取燒杯中稱取10 g樣品，準確至樣品，準確至0.001 g。用。用112 mL 5055的水將樣品洗入的水將樣品洗入500 mL錐形瓶中，混勻。錐形瓶中，混勻。v二、脂肪和蛋白的去除：二、脂肪和蛋白的去除：

11、v按順序加入按順序加入24 mL硫酸鋅溶液、硫酸鋅溶液、24 mL亞鐵氰化鉀溶液和亞鐵氰化鉀溶液和40 mL緩沖溶液，加入時要邊加邊搖，每加完一種溶液都要充緩沖溶液，加入時要邊加邊搖，每加完一種溶液都要充分搖勻。靜置分搖勻。靜置15 min1 h。然后用濾紙過濾，濾液用。然后用濾紙過濾，濾液用250 mL錐形瓶收集。錐形瓶收集。任務三：乳粉亞硝酸鹽含量測定任務三：乳粉亞硝酸鹽含量測定v移取移取:20 mL濾液于濾液于50 mL比色管中，加水至約比色管中，加水至約30 mL。v在每個比色管中先加入在每個比色管中先加入3 mL顯色液顯色液1，邊加邊混；再加入，邊加邊混；再加入2.5 mL顯色液顯色

12、液2。小心混合溶液，使其在室溫下靜置。小心混合溶液，使其在室溫下靜置5 min，避免直射陽光。加入，避免直射陽光。加入1mL顯色液顯色液3，小心混合，使，小心混合，使其在室溫下靜置其在室溫下靜置5 min，避免直射陽光。用水定容至刻度，避免直射陽光。用水定容至刻度，混勻?；靹颉在在15 min內(nèi)用內(nèi)用538 nm波長，以空白試驗液體為對照測定波長，以空白試驗液體為對照測定上述樣品溶液的吸光度。上述樣品溶液的吸光度。標準曲線的制作標準曲線的制作v分別移取分別移取0 mL、1mL、2mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、8 mL和和10 mL亞硝酸鈉標準溶液于亞硝酸鈉標準溶液于9個個50

13、 mL比色管中。在每比色管中。在每個比色管中加水，使其體積約為個比色管中加水，使其體積約為30 mL。v在每個比色管中先加入在每個比色管中先加入3 mL顯色液顯色液1，邊加邊混；再加入，邊加邊混；再加入2.5 mL顯色液顯色液2。小心混合溶液，使其在室溫下靜置。小心混合溶液，使其在室溫下靜置5 min，避免，避免直射陽光。加入直射陽光。加入1mL顯色液顯色液3，小心混合，使其在室溫下靜置，小心混合，使其在室溫下靜置5 min，避免直射陽光。用水定容至刻度，混勻。在，避免直射陽光。用水定容至刻度，混勻。在15 min內(nèi)，用內(nèi)，用538 nm波長，以第一個溶液（不含亞硝酸鈉）為對照波長，以第一個溶

14、液（不含亞硝酸鈉）為對照測定另外八個溶液的吸光度。測定另外八個溶液的吸光度。v將測得的吸光度對亞硝酸鹽質(zhì)量濃度作圖。亞硝酸根的質(zhì)量將測得的吸光度對亞硝酸鹽質(zhì)量濃度作圖。亞硝酸根的質(zhì)量濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標。亞硝酸根的質(zhì)量濃度以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標。亞硝酸根的質(zhì)量濃度以g/100 mL表示。表示。亞硝酸鹽含量計算亞硝酸鹽含量計算v式中：式中：vX樣品中亞硝酸根含量，樣品中亞硝酸根含量，mg/kg；vc根據(jù)濾液的吸光度，從標準曲線上讀取的根據(jù)濾液的吸光度，從標準曲線上讀取的NO2的濃度，的濃度，g/100mL；vm樣品的質(zhì)量，樣品的質(zhì)量，g；vV所取濾液的體積，所取濾液的體積，mL。v樣品中以亞硝酸鈉表示的亞硝酸鹽含量，按式計算：樣品