血清谷氨酰轉(zhuǎn)移酶GGT速率法測(cè)定

1、血清- 谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(-GGT) 速率法測(cè)定1. 實(shí)驗(yàn)原理GGT催化谷氨?；D(zhuǎn)移給受體的反應(yīng)。本法以 -谷氨酰-3- 羧基-對(duì)硝基苯胺為底物，將底物上的谷氨?；D(zhuǎn)移至受體雙甘肽，生成對(duì)硝基苯胺和 -谷氨 酰 雙 甘 肽 。 在 405nm 進(jìn) 行 吸 光 度 檢 測(cè) ， 吸 光 度 升 高 的 速 率 與 標(biāo) 本 中 GGT 活力成正比。GGT- 谷氨酰 -3- 羧基 - 對(duì)硝基苯胺 + 雙甘肽2. 標(biāo) 本 ：對(duì)硝基苯胺+- 谷氨酰雙甘肽2.1病人準(zhǔn)備：無特殊。2.2類型：血清或 EDTA血漿。3. 標(biāo)本存放：室溫可保存 8 小時(shí)；28可保存 3 天；-20 保存至少可穩(wěn)定 1周。4. 標(biāo)本運(yùn)

2、輸：常溫條件下保存運(yùn)輸。5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染的標(biāo)本。6. 實(shí)驗(yàn)材料6.1試劑 利德曼 -GGT 測(cè)定試劑盒（試劑 16 64ml 試 劑 2 6 16ml ）6.1.1試劑組成試 劑 1（ R1）：Tris 緩 沖 液pH8.25100mmol/L甘氨酰甘氨酸150mmol/L試 劑 2（ R2）：-谷氨酰-3- 羧基-對(duì)硝基苯胺2.9mmol/L6.1.2試劑準(zhǔn)備：試劑為即用式。6.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存：試劑保存于 28，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。6.1.4變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有看得見的微生物生長(zhǎng)，有濁度，或者未開蓋的液體有沉淀時(shí)，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。6.1.5注 意 事 項(xiàng)

3、 ：試 劑 中 含 疊 氮 鈉（ 0.95g/L）為防腐劑。不 可入口！避免接觸皮膚及粘膜。應(yīng)采取必要的預(yù)防措施使用試劑。6.2校 準(zhǔn) 品 ： 使 用 DiaSys公 司 提 供 的 TruCal U校準(zhǔn)品對(duì)自動(dòng)分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)，具體參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文 件 。6.3質(zhì)控品：具體參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP 文件。7. 儀器：貝克曼 AU680 生化分析儀8. 操作步驟8.1項(xiàng)目基本參數(shù)：參見 AU680 生化分析儀項(xiàng)目測(cè)定參數(shù).SOP 文件8.2儀器操作步驟：參見 AU680 生化分析儀操作規(guī)程.SOP 文件9. 檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析10. 質(zhì)量控制：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把

4、非定值血清水平 I 與 II 質(zhì)控做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以 2S 為質(zhì)控警告限，3S 為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP 文件。11. 計(jì) 算 方 法 ： 以 TruCal U 復(fù) 合 校 準(zhǔn) 品 GGT 校 準(zhǔn) 值 校 準(zhǔn) 儀 器 后 ，在 病 人 結(jié) 果可報(bào)告范圍內(nèi)，儀器直接報(bào)告可靠的檢測(cè)結(jié)果。不使用校準(zhǔn) 品 進(jìn)行 GGT活力檢測(cè)，可以直接使用A/min 均 值 乘 以 計(jì) 算因子得到結(jié)果，但是這樣所得結(jié)果的可靠性不如使用校準(zhǔn)品。計(jì)算 GGT 活力的計(jì)算因子見下 表 ：A/min因 子 = GGT 活 力 U/L底物起始的反應(yīng)（37）樣品起始的反應(yīng)（3

5、7）405nm1421115812. 參考值范圍3、4 ：女性 7-32U/L； 男 性 11-49U/L。參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考值。13. 臨床意義1： -谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）又稱 -谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶。存在于肝臟和膽汁中，是肝膽疾病最敏感的指示物。因?yàn)樵撁笇?duì)肝膽疾病具有高陰性預(yù)期值，因此 -谷氨酰轉(zhuǎn)移酶的檢測(cè)被廣泛地用于排除肝膽疾病。結(jié)合丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、膽堿酯酶等其它酶， -谷氨酰轉(zhuǎn)移酶對(duì)于肝臟疾病的鑒別診斷非常有價(jià)值。14. 操作性能14.1線 性 范 圍 ： 2-500U/L。14.2 精密度：精

6、密度的評(píng)估是根據(jù) NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法，AU680 批內(nèi)精密度小于 3%，總精密度小于 3%。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。批內(nèi)精密度xsCV批間精密度xsCVn=20(U/L)(U/L)(%)n=20(U/L)(U/L)(%)樣 品 139.90.992.48樣 品 141.50.621.49樣 品 273.60.851.16樣 品 272.30.610.85樣 品 32061.320.64樣 品 32040.740.3614.3 方 法 學(xué) 比 較 ： 本 公 司 的 試 劑 盒 (y) 與 某 商 品 化 試 劑 盒 (x) ， 同 時(shí) 對(duì) 78 個(gè)樣品進(jìn)行

7、 GGT 活力檢測(cè)，將檢測(cè)結(jié)果作方法學(xué)比較，其統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下：y=1.00x+1.00U/L； r=0.999 。14.4靈敏度：本試劑的檢測(cè)限為 2U/L。14.5病人結(jié)果可報(bào)告范圍：2-500U/L。15. 超出范圍結(jié)果處理：本法對(duì) GGT活力檢測(cè)的最大 500U/L ，當(dāng)樣品測(cè)定值超 過 上 限 時(shí) ，應(yīng) 將 樣 品 用 9g/L氯 化 鈉 溶 液 作 1+5 稀 釋 ，重 新 測(cè) 定 ，結(jié) 果 乘 以6 。16. 病危報(bào)警值的處理17. 方法局限性17.1本 法 對(duì)GGT活力檢測(cè)的最大 500U/L ，當(dāng)樣品測(cè)定值超過上限時(shí)，應(yīng)將樣 品 用 9g/L氯化鈉溶液作 1+5 稀釋，重新測(cè)定，

8、結(jié)果乘 6。17.2干擾物質(zhì)：當(dāng)樣品中抗壞血酸濃度 1704mol/L， 膽 紅 素 濃 度684mol/L ，血 紅 蛋 白 濃 度 4.00g/L ，甘 油 三 酯 濃 度22.6mmol/L時(shí) 沒 有 觀 察到干擾。18. 補(bǔ)救措施：當(dāng)儀器發(fā)生故障時(shí)，迅速聯(lián)系儀器廠家進(jìn)行維修。19. 參考文獻(xiàn)1.ThomasL.ClinicalLaboratoryDiagnostics.1 sted.Frankfurt:2. Persijn JP, van der Silk W. A new method for the determination ofgamma-glutamyltranSHeraseinserum.JClinChem ClinBiochem1976;14:421-7.3. Szasz G. Gamma-Glutamyltranspeptidase. In: Bergmeyer HU. Methodender enzymatischen Analyse. Weinheim: Verlag Chemie, 1974.p. 757.4.FischbachF,ZawtaB.Age-dependen