小鼠巨噬細胞吞噬酵母菌實驗的改良法

1、小鼠巨噬細胞吞噬酵母菌實驗的改良法           作者:孫明潔，高燕，趙冬，王珂,  靖學(xué)芳【摘要】  目的  探討一種簡便易行的小鼠巨噬細胞吞噬酵母菌實驗的改良法。 方法  在巨噬細胞吞噬雞紅細胞和巨噬細胞吞噬酵母菌實驗基礎(chǔ)上建立一種新的吞噬實驗方法。 結(jié)果  實驗組吞噬10min的結(jié)果吞噬百分率57，吞噬20min的結(jié)果吞噬百分率86，吞噬30min的結(jié)果吞噬百分率63。  結(jié)論  結(jié)果顯示小鼠巨噬細胞吞噬酵母菌20

2、min的吞噬百分率可高達86，說明這種改良法簡單而有效。        【關(guān)鍵詞】  小鼠巨噬細胞；酵母菌；吞噬酵母菌實驗改良法        The mice macrophage swallows the saccharomycetes experimental improvement method            【Abstract】 

3、 Objective  Discusses one kind of simple macrophage to swallow the saccharomycetes method.   Methods  Swallows the chicken red blood cell by the macrophage and the macrophage swallows the saccharomycetes in the foundation newly to establish one kind to swallow experimental method

4、.  Results  Experimental group，the phagocyte swallows saccharomycetes 10 minutes after to swallow the percentage to be possible to reach as high as 57%. The phagocyte swallows saccharomycetes 20 minutes after to swallow the percentage to be possible to reach as high as 86% . The phagocyte

5、swallows saccharomycetes 30 minutes after to swallow the percentage to be possible to reach as high as 63%.  Conclusion  The result showed the mice macrophage swallows saccharomycetes 20 minutes after to swallow the percentage to be possible to reach as high as 86%，simply explains this kin

6、d of improvement method but to be effective.         【Key words】  mice macrophage；saccharomycete；swallows the saccharomycetes experimental improvement method        巨噬細胞對顆粒性抗原具有很強的吞噬功能，可用雞紅細胞、酵母菌等作為吞噬顆粒來觀察其吞噬效果。多年來在實驗課教學(xué)中，我們一直采用雞紅細胞作為吞

7、噬顆粒，因為它具有個體大呈梭型，核明顯并且著色清楚與其他細胞易區(qū)別的優(yōu)點，但是也存在著一定的缺點，例如：費用高及血球制備比較麻煩等，再加上近年來高致病性禽流感的發(fā)生，在這種情況下，我們考慮到用酵母菌作為吞噬顆粒來觀察其吞噬效果。經(jīng)查閱有關(guān)資料，并結(jié)合我們的教學(xué)安排，考慮到整個實驗所用的時間較長，以及所用的儀器設(shè)備對我們來講在短期內(nèi)解決都是個問題，面對這種情況，我們根據(jù)以往的實驗課教學(xué)經(jīng)驗決定，在巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗和巨噬細胞吞噬酵母菌實驗這兩個實驗的基礎(chǔ)上，探索一種時間短、簡便易行的新方法來達到預(yù)期的效果，于是做了改良的小鼠巨噬細胞吞噬酵母細胞實驗。    &

8、#160;   1  材料與方法        1.1  實驗動物  ICR小白鼠，體重18 22g，雄性，由首都醫(yī)科大學(xué)實驗動物部提供，顆粒飼料喂養(yǎng)。分籠飼養(yǎng)于空調(diào)室內(nèi)，室溫（23±2），相對濕度45%65%，自由飲用自來水，自動控制晝夜各12h，自動換氣通風(fēng)。        1.2  實驗材料  金黃色葡萄球菌、酵母菌均由首都醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)系提供。瑞氏染料、甲醇均由北京化學(xué)試劑廠提供。0.

9、9氯化鈉注射液由石家莊四藥有限公司提供。        1.3  方法          金黃色葡萄球菌的制備  將金黃色葡萄球菌接種到普通斜面培養(yǎng)基上，于37溫箱培養(yǎng)后，每支培養(yǎng)基中加1ml的0.9 % 氯化鈉注射液，反復(fù)吹打沖洗斜面培養(yǎng)物上的金黃色葡萄球菌，收集菌液，然后將收集到的菌液，參照標準比濁管用0.9 氯化鈉注射液調(diào)至為3億/ml菌的菌液，放4冰箱備用。        酵母菌

10、菌液的制備  將酵母菌接種到沙氏斜面培養(yǎng)基上，于37溫箱培養(yǎng)后，每支培養(yǎng)基中加1ml的0.9 % 氯化鈉注射液反復(fù)吹打沖洗斜面培養(yǎng)物上的酵母菌，收集菌液，然后將收集到的菌液，參照標準比濁管用0.9 % 氯化鈉注射液調(diào)至為10億/ml菌的菌液，放4冰箱備用。          實驗  將小白鼠分成6組，每組3只。第1、2、3組為對照組，經(jīng)腹腔注射0.9 % 氯化鈉注射液0.6ml/只，第4、5、6組為實驗組，經(jīng)腹腔注射3億/ml的金黃色葡萄球菌菌液0.6ml/只。48h后將所有的小白鼠腹腔均注射10億/ml

11、的酵母菌菌液1ml/只。注射10min后、20min后和30min后，取對照組、實驗組各一組小白鼠，行頸椎脫臼處死，輕輕按摩腹部后，消毒小鼠腹部皮膚，持鑷提起腹中部皮膚并剪開，暴露腹膜，避開血管剪開腹膜一小口。用毛細吸管取出腹腔液，并收集于試管中。每組的每只小鼠取腹腔液滴于3張玻片，每張一滴，推片，自然干燥，固定。滴加瑞氏染液30min后，加等量蒸餾水，染3min后，水沖，濾紙吸干，在顯微鏡油鏡下觀察結(jié)果。并且計算吞噬百分率14。        2  結(jié)果        2.1  對照組  見圖1。吞噬10mim的結(jié)果吞