溶血性鏈球菌

1、Page 1Page 2 溶血性鏈球菌又稱沙培林溶血性鏈球菌又稱沙培林對(duì)對(duì)熱熱和和化學(xué)清毒劑化學(xué)清毒劑均敏感均敏感, ,常常引起扁桃體、咽部、中耳等引起扁桃體、咽部、中耳等感染。亦為腎盂腎炎、產(chǎn)褥感染。亦為腎盂腎炎、產(chǎn)褥熱、猩紅熱的病原體。熱、猩紅熱的病原體。Page 3一、生物學(xué)特性一、生物學(xué)特性 二、流行病學(xué)二、流行病學(xué) 三、致病性三、致病性 五、檢驗(yàn)和控制五、檢驗(yàn)和控制 四、抵抗力四、抵抗力Page 41、形態(tài)與染色、形態(tài)與染色 鏈球菌呈鏈球菌呈球形球形或或橢圓形橢圓形，直徑，直徑0.6-1.0m，呈，呈鏈鏈狀排列，長(zhǎng)短不一狀排列，長(zhǎng)短不一，從，從4-8個(gè)至個(gè)至20-30個(gè)菌細(xì)胞組成個(gè)菌

2、細(xì)胞組成不等，鏈的長(zhǎng)短與細(xì)菌的種類及生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān)。不等，鏈的長(zhǎng)短與細(xì)菌的種類及生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān)。在在液體培養(yǎng)基中易呈長(zhǎng)鏈液體培養(yǎng)基中易呈長(zhǎng)鏈，固體培養(yǎng)基中常呈短鏈固體培養(yǎng)基中常呈短鏈，由于鏈球菌能產(chǎn)生由于鏈球菌能產(chǎn)生脫鏈酶脫鏈酶，所以正常情況下鏈球菌，所以正常情況下鏈球菌的鏈的鏈不能無限制的延長(zhǎng)不能無限制的延長(zhǎng)。多數(shù)菌株在多數(shù)菌株在血清肉湯中血清肉湯中培養(yǎng)培養(yǎng)2-4h易形成透明質(zhì)酸的莢膜，繼易形成透明質(zhì)酸的莢膜，繼續(xù)培養(yǎng)后消失。該菌不形成續(xù)培養(yǎng)后消失。該菌不形成芽芽胞，無鞭毛，易被普通的堿性胞，無鞭毛，易被普通的堿性染料著色，革蘭氏陽性染料著色，革蘭氏陽性，老齡，老齡培養(yǎng)或被中性粒細(xì)胞吞噬后，培養(yǎng)

3、或被中性粒細(xì)胞吞噬后，轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。Page 52、培養(yǎng)特征、培養(yǎng)特征需氧需氧或或兼性厭氧菌兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高營養(yǎng)要求較高，普通培普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良，養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良，需補(bǔ)充血清、血液、腹水，大需補(bǔ)充血清、血液、腹水，大多數(shù)菌株需核黃素、維生素多數(shù)菌株需核黃素、維生素B6、煙酸等生長(zhǎng)因子。、煙酸等生長(zhǎng)因子。最適生長(zhǎng)溫度為最適生長(zhǎng)溫度為37，在，在20-42能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)，最適，最適pH為為7.4-7.6。在血清肉湯中易成長(zhǎng)鏈，管底呈絮狀或顆粒狀沉在血清肉湯中易成長(zhǎng)鏈，管底呈絮狀或顆粒狀沉淀生長(zhǎng)。淀生長(zhǎng)。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、邊在血平板上形成灰白色、半透明

4、、表面光滑、邊緣整齊、直徑緣整齊、直徑0.5-0.75mm的細(xì)小菌落，不同菌株的細(xì)小菌落，不同菌株溶血不一。溶血不一。Page 63、生化反應(yīng)、生化反應(yīng)分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，對(duì)乳糖、甘露醇、水楊苷、山梨對(duì)乳糖、甘露醇、水楊苷、山梨醇、棉子糖、蕈糖、七葉苷的分醇、棉子糖、蕈糖、七葉苷的分解能力因不同菌株而異。一般不解能力因不同菌株而異。一般不分解菊糖，不被膽汁溶解，觸酶分解菊糖，不被膽汁溶解，觸酶陰性。陰性。Page 74、抗原結(jié)構(gòu)、抗原結(jié)構(gòu)鏈球菌的抗原構(gòu)造較復(fù)雜，主要有三種：鏈球菌的抗原構(gòu)造較復(fù)雜，主要有三種：（1）核蛋白抗原核蛋白抗原 或稱或稱P抗原，無特異性，抗原

5、，無特異性，各種鏈球菌均相同。各種鏈球菌均相同。（2）多糖抗原多糖抗原或稱或稱C抗原，系群特異性抗抗原，系群特異性抗原，是細(xì)胞壁的多糖組分，可用稀鹽酸等提原，是細(xì)胞壁的多糖組分，可用稀鹽酸等提取。取。（3）蛋白質(zhì)抗原蛋白質(zhì)抗原 或稱表面抗原，具有型特或稱表面抗原，具有型特異性，位于異性，位于C抗原外層，其中可分為抗原外層，其中可分為M、T、R、S四種不同性質(zhì)的抗原成分，與致病性四種不同性質(zhì)的抗原成分，與致病性有關(guān)的是有關(guān)的是M抗原。抗原。Page 85、分類、分類根據(jù)鏈球菌在血液培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖后是否溶血根據(jù)鏈球菌在血液培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖后是否溶血及其溶血性質(zhì)分為三類。及其溶血性質(zhì)分為三類。（1

6、）-溶血性鏈球菌溶血性鏈球菌：菌落周圍有：菌落周圍有1-2mm寬的寬的草綠草綠色溶血環(huán)色溶血環(huán)，也稱甲型溶血，這類鏈球菌多為，也稱甲型溶血，這類鏈球菌多為條件致病條件致病菌。菌。（2）-溶血性鏈球菌溶血性鏈球菌：菌落周圍形成一個(gè)：菌落周圍形成一個(gè)2-4mm寬、寬、界限分明、完全透明的界限分明、完全透明的無色溶血環(huán)無色溶血環(huán)，也稱乙型溶血，也稱乙型溶血，因而這類菌亦稱為溶血性鏈球菌，該菌的因而這類菌亦稱為溶血性鏈球菌，該菌的致病力強(qiáng)致病力強(qiáng)，常引起人類和動(dòng)物的多種疾病。常引起人類和動(dòng)物的多種疾病。 （3）-鏈球菌鏈球菌：不產(chǎn)生溶血素不產(chǎn)生溶血素，菌落周圍無溶血，菌落周圍無溶血環(huán)，也稱為丙型或不溶

7、血性鏈球菌，該菌環(huán)，也稱為丙型或不溶血性鏈球菌，該菌無致病性無致病性，常存在于乳類和糞便中，偶爾也引起感染常存在于乳類和糞便中，偶爾也引起感染 。Page 9溶血性鏈球菌在自然界中分布較廣，存在于水、空氣、塵埃、溶血性鏈球菌在自然界中分布較廣，存在于水、空氣、塵埃、糞便及健康人和動(dòng)物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過直接接糞便及健康人和動(dòng)物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過直接接觸、空氣飛沫傳播或通過皮膚、粘膜傷口感染，被污染的食觸、空氣飛沫傳播或通過皮膚、粘膜傷口感染，被污染的食品如品如奶、肉、蛋及其制品奶、肉、蛋及其制品也會(huì)對(duì)人類進(jìn)行感染。上呼吸道感也會(huì)對(duì)人類進(jìn)行感染。上呼吸道感染患者、人畜化膿性感染

8、部位常成為食品污染的污染源。一染患者、人畜化膿性感染部位常成為食品污染的污染源。一般來說，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品：般來說，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品：1、食品加工或銷售人員口腔、鼻腔、手、面部有化膿性炎、食品加工或銷售人員口腔、鼻腔、手、面部有化膿性炎癥時(shí)造成食品的污染；癥時(shí)造成食品的污染； 2、食品在加工前就已帶菌、奶?；蓟撔匀橄傺谆蛐笄?、食品在加工前就已帶菌、奶?；蓟撔匀橄傺谆蛐笄菥植炕摃r(shí)，其奶和肉尸某些部位污染；局部化膿時(shí)，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包裝不善而使食品受到污染。、熟食制品因包裝不善而使食品受到污染。流行病學(xué)流行病學(xué)Page 10 溶血

9、性鏈球菌?？梢鹌つw、皮下組織的溶血性鏈球菌?？梢鹌つw、皮下組織的化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)性流行以及新生兒敗血癥、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、性流行以及新生兒敗血癥、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、猩紅熱、腎小球腎炎。猩紅熱、腎小球腎炎。溶血性鏈球菌的致病性與其產(chǎn)生的毒素及其侵溶血性鏈球菌的致病性與其產(chǎn)生的毒素及其侵襲性酶有關(guān)，主要有以下幾種：襲性酶有關(guān)，主要有以下幾種：1、鏈球菌溶血素鏈球菌溶血素：溶血素有：溶血素有O和和S兩種，兩種，O為含有為含有-SH的蛋白質(zhì)，具有抗原性，的蛋白質(zhì)，具有抗原性，S為小分為小分子多肽，分子量較小，故無抗原性。子多肽，分子量較小

10、，故無抗原性。2、致熱外毒素致熱外毒素：曾稱紅疹毒素或猩紅熱：曾稱紅疹毒素或猩紅熱毒素，是人類猩紅熱的主要毒性物質(zhì)，會(huì)引起毒素，是人類猩紅熱的主要毒性物質(zhì)，會(huì)引起局部或全身紅疹、發(fā)熱、疼痛、惡心、嘔吐、局部或全身紅疹、發(fā)熱、疼痛、惡心、嘔吐、周身不適。周身不適。致致病病性性 Page 113、透明質(zhì)酸酶透明質(zhì)酸酶：又稱擴(kuò)散因子，能分解：又稱擴(kuò)散因子，能分解細(xì)胞間質(zhì)的透明質(zhì)酸，故能增加細(xì)菌的侵細(xì)胞間質(zhì)的透明質(zhì)酸，故能增加細(xì)菌的侵襲力，使病菌易在組織中擴(kuò)散。襲力，使病菌易在組織中擴(kuò)散。4、鏈激酶鏈激酶：又稱鏈球菌纖維蛋白溶酶，：又稱鏈球菌纖維蛋白溶酶，能使血液中纖維蛋白酶原變成纖維蛋白酶，能使血液

11、中纖維蛋白酶原變成纖維蛋白酶，具有增強(qiáng)細(xì)菌在組織中的擴(kuò)散作用，該酶具有增強(qiáng)細(xì)菌在組織中的擴(kuò)散作用，該酶耐熱，耐熱，10050分鐘仍可保持活性。分鐘仍可保持活性。5、鏈道酶鏈道酶：又稱鏈球菌：又稱鏈球菌DNA酶，能使膿酶，能使膿液稀薄，促進(jìn)病菌擴(kuò)散。液稀薄，促進(jìn)病菌擴(kuò)散。6、殺白細(xì)胞素殺白細(xì)胞素：能使白細(xì)胞失去動(dòng)力，：能使白細(xì)胞失去動(dòng)力，變成球形，最后膨脹破裂。變成球形，最后膨脹破裂。Page 12抵抗力抵抗力 該菌該菌抵抗力一般不強(qiáng)抵抗力一般不強(qiáng)，6030min即即被殺死，對(duì)常用被殺死，對(duì)常用消毒劑敏感消毒劑敏感，在干燥，在干燥塵埃中生存數(shù)月。乙型鏈球菌對(duì)青霉塵埃中生存數(shù)月。乙型鏈球菌對(duì)青霉素

12、、紅霉素、氯霉素、四環(huán)素、磺胺素、紅霉素、氯霉素、四環(huán)素、磺胺均敏感。均敏感。青霉素青霉素是鏈球菌感染的首選是鏈球菌感染的首選藥物，很少有耐藥性。藥物，很少有耐藥性。 Page 13Page 14設(shè)備和材料設(shè)備和材料1冰箱：冰箱：O4。2恒溫培養(yǎng)箱：恒溫培養(yǎng)箱：36士士1。3恒溫恒溫水浴水浴鍋：鍋：36土土1。4顯微鏡：顯微鏡：10*l00*。5均質(zhì)器均質(zhì)器或滅菌乳缽。或滅菌乳缽。6離心機(jī)離心機(jī)：4000r/min。7架盤藥物天平：架盤藥物天平：0g5009，精確至，精確至0.5g。8滅菌滅菌試管試管：10mm*100mm、l6mm*160mm。9滅菌滅菌吸管吸管：1mL（具（具0.01mL刻

13、度）、刻度）、5mL、10mL（具（具1mL刻度）?？潭龋?0滅菌錐形瓶：滅菌錐形瓶：100mL。11滅菌培養(yǎng)皿：直徑滅菌培養(yǎng)皿：直徑90mm。12滅菌棉簽、鑷子等。滅菌棉簽、鑷子等。Page 15培養(yǎng)基和試劑培養(yǎng)基和試劑1葡萄糖肉浸液肉湯：按葡萄糖肉浸液肉湯：按GB/T4789.28一一2003中中4.1規(guī)定。在肉浸液肉湯內(nèi)加人規(guī)定。在肉浸液肉湯內(nèi)加人1葡萄糖。葡萄糖。2肉浸液肉湯：按肉浸液肉湯：按GB/T4789.28一一2003中中4.1規(guī)定。規(guī)定。3匹克氏肉湯：按匹克氏肉湯：按GB/T4789.28一一2003中中4.62規(guī)定。規(guī)定。4血血瓊脂瓊脂平板：按平板：按GB/T4789.2

14、8一一2003中中4.6規(guī)定。規(guī)定。5人血漿。人血漿。6 0.25%氯化鈣。氯化鈣。7 0.85滅菌生理鹽水。滅菌生理鹽水。8桿菌膚藥敏紙片（含桿菌膚藥敏紙片（含0.04單位）。單位）。Page 16Page 17Page 18匹克氏肉湯匹克氏肉湯 含含1%胰蛋白胨的牛心浸液胰蛋白胨的牛心浸液200mL 1：25000結(jié)晶紫鹽水溶液結(jié)晶紫鹽水溶液10mL 1：800三氮化鈉溶液三氮化鈉溶液10mL 脫纖維兔血脫纖維兔血(或羊血或羊血)10mL 制法制法 ：將上述已滅菌的各種成分，用無菌將上述已滅菌的各種成分，用無菌手續(xù)依次混合，分裝于無菌試管內(nèi)，每手續(xù)依次混合，分裝于無菌試管內(nèi)，每管約管約2m

15、L，保存于冰箱內(nèi)備用，保存于冰箱內(nèi)備用 Page 19血平板：菌落為灰白色，半透明或不透明，血平板：菌落為灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直徑約表面光滑，有乳光，直徑約0.50.75mm，為圓形突起的細(xì)小菌落，乙型溶血性鏈球?yàn)閳A形突起的細(xì)小菌落，乙型溶血性鏈球菌周圍有菌周圍有24mm界限分明、無色透明的界限分明、無色透明的溶血圈。溶血圈。 Page 20制法：取制法：取營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂（PH76），加熱使），加熱使其溶解待冷至其溶解待冷至45-50，以滅菌操作于每，以滅菌操作于每100毫升營養(yǎng)瓊脂加滅菌脫纖維羊血或兔毫升營養(yǎng)瓊脂加滅菌脫纖維羊血或兔血血5-10毫升毫升,輕輕搖勻，立即

16、傾注于平板或輕輕搖勻，立即傾注于平板或分裝試管，制成斜面?zhèn)溆?。分裝試管，制成斜面?zhèn)溆谩?配方：配方：pH7.4-7.6豆粉瓊脂豆粉瓊脂 100ml 脫纖維羊血脫纖維羊血 510ml 血瓊脂平板（血瓊脂平板（BA）亦可用其它營養(yǎng)豐富的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制血瓊脂。亦可用其它營養(yǎng)豐富的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制血瓊脂。Page 211、樣品處理樣品處理：?。喝?5g固體（或固體（或25mL液體）液體）檢樣加入檢樣加入225mL滅菌生理鹽水，制成混懸液。滅菌生理鹽水，制成混懸液。2、吸取、吸取5mL混懸液接種至混懸液接種至50mL葡萄糖肉浸葡萄糖肉浸液肉湯，或直接劃線于血平板（如檢樣污染液肉湯，或直接劃線于血平板（如檢

17、樣污染嚴(yán)重，可同時(shí)接種嚴(yán)重，可同時(shí)接種5mL至匹克氏肉湯），至匹克氏肉湯），36培養(yǎng)培養(yǎng)24h，接種血平板，接種血平板，36培養(yǎng)培養(yǎng)24h,挑起乙型溶血圓形突起的細(xì)小菌落，在血平挑起乙型溶血圓形突起的細(xì)小菌落，在血平板上分純，觀察在液體和固體中的培養(yǎng)特征、板上分純，觀察在液體和固體中的培養(yǎng)特征、溶血情況及革蘭氏染色、形態(tài)，并進(jìn)行鏈激溶血情況及革蘭氏染色、形態(tài)，并進(jìn)行鏈激酶試驗(yàn)和桿菌肽敏感試驗(yàn)。酶試驗(yàn)和桿菌肽敏感試驗(yàn)。（一）檢驗(yàn)（一）檢驗(yàn) Page 22葡萄糖肉浸液肉湯葡萄糖肉浸液肉湯原原 理：理： 蛋白胨、牛肉浸出粉提供氮源、蛋白胨、牛肉浸出粉提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；氯化鈉維持維生素和生長(zhǎng)

18、因子；氯化鈉維持均衡的滲透壓；磷酸氫二鉀為緩均衡的滲透壓；磷酸氫二鉀為緩沖劑；葡萄糖提供碳源沖劑；葡萄糖提供碳源。配方（每升）：配方（每升）： 牛肉牛肉(提取浸出提取浸出粉粉)500g氯化鈉氯化鈉 5g蛋白胨蛋白胨 10g磷酸氫二鉀磷酸氫二鉀 2g葡萄糖葡萄糖10g 最終最終pH 7.50.2 將絞碎之去筋膜無油脂牛肉將絞碎之去筋膜無油脂牛肉500g加蒸餾水加蒸餾水1000mL，混合，混合后放冰箱過夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小時(shí)，使肉后放冰箱過夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小時(shí)，使肉渣完全凝結(jié)成塊，用絨布過濾，并擠壓收集全部濾液，加渣完全凝結(jié)成塊，用絨布過濾，并擠壓收集全部濾液，加水補(bǔ)足原

19、量。加入蛋白胨、氯化鈉和磷酸鹽，溶解后校正水補(bǔ)足原量。加入蛋白胨、氯化鈉和磷酸鹽，溶解后校正pH7.47.6煮沸并過濾，分裝燒瓶，煮沸并過濾，分裝燒瓶，121高壓滅菌高壓滅菌30min。 Page 234、桿菌肽敏感試驗(yàn)桿菌肽敏感試驗(yàn)：取典型菌落的菌液涂布：取典型菌落的菌液涂布于血平板上，用滅菌鑷子夾取每片含有于血平板上，用滅菌鑷子夾取每片含有0.04單單位的桿菌肽紙片置于上述平板上，位的桿菌肽紙片置于上述平板上，36培養(yǎng)培養(yǎng)18-24h，如有抑菌圈出現(xiàn)即為陽性。用已知，如有抑菌圈出現(xiàn)即為陽性。用已知的陽性菌株做對(duì)照。的陽性菌株做對(duì)照。Page 243、鏈激酶試驗(yàn)鏈激酶試驗(yàn)：吸取草酸鉀血漿：吸取草酸鉀血漿0.2mL，加加0.8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌球菌18-24h36肉浸液肉湯培養(yǎng)物肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL及及0.25%氯化鈣氯化鈣0.25mL，混勻，置于，混勻，置于36水浴水浴10min,血漿混合物自行凝固，觀察凝血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時(shí)間，完全溶解為陽性，塊重新完全溶解的時(shí)間，完全溶解為陽性，如