溶血性鏈球菌

1、Page 1Page 2 溶血性鏈球菌又稱沙培林溶血性鏈球菌又稱沙培林對對熱熱和和化學(xué)清毒劑化學(xué)清毒劑均敏感均敏感, ,常常引起扁桃體、咽部、中耳等引起扁桃體、咽部、中耳等感染。亦為腎盂腎炎、產(chǎn)褥感染。亦為腎盂腎炎、產(chǎn)褥熱、猩紅熱的病原體。熱、猩紅熱的病原體。Page 3一、生物學(xué)特性一、生物學(xué)特性 二、流行病學(xué)二、流行病學(xué) 三、致病性三、致病性 五、檢驗和控制五、檢驗和控制 四、抵抗力四、抵抗力Page 41、形態(tài)與染色、形態(tài)與染色 鏈球菌呈鏈球菌呈球形球形或或橢圓形橢圓形，直徑，直徑0.6-1.0m，呈，呈鏈鏈狀排列，長短不一狀排列，長短不一，從，從4-8個至個至20-30個菌細(xì)胞組成個菌

2、細(xì)胞組成不等，鏈的長短與細(xì)菌的種類及生長環(huán)境有關(guān)。不等，鏈的長短與細(xì)菌的種類及生長環(huán)境有關(guān)。在在液體培養(yǎng)基中易呈長鏈液體培養(yǎng)基中易呈長鏈，固體培養(yǎng)基中常呈短鏈固體培養(yǎng)基中常呈短鏈，由于鏈球菌能產(chǎn)生由于鏈球菌能產(chǎn)生脫鏈酶脫鏈酶，所以正常情況下鏈球菌，所以正常情況下鏈球菌的鏈的鏈不能無限制的延長不能無限制的延長。多數(shù)菌株在多數(shù)菌株在血清肉湯中血清肉湯中培養(yǎng)培養(yǎng)2-4h易形成透明質(zhì)酸的莢膜，繼易形成透明質(zhì)酸的莢膜，繼續(xù)培養(yǎng)后消失。該菌不形成續(xù)培養(yǎng)后消失。該菌不形成芽芽胞，無鞭毛，易被普通的堿性胞，無鞭毛，易被普通的堿性染料著色，革蘭氏陽性染料著色，革蘭氏陽性，老齡，老齡培養(yǎng)或被中性粒細(xì)胞吞噬后，培養(yǎng)

3、或被中性粒細(xì)胞吞噬后，轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。Page 52、培養(yǎng)特征、培養(yǎng)特征需氧需氧或或兼性厭氧菌兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高營養(yǎng)要求較高，普通培普通培養(yǎng)基上生長不良，養(yǎng)基上生長不良，需補充血清、血液、腹水，大需補充血清、血液、腹水，大多數(shù)菌株需核黃素、維生素多數(shù)菌株需核黃素、維生素B6、煙酸等生長因子。、煙酸等生長因子。最適生長溫度為最適生長溫度為37，在，在20-42能生長能生長，最適，最適pH為為7.4-7.6。在血清肉湯中易成長鏈，管底呈絮狀或顆粒狀沉在血清肉湯中易成長鏈，管底呈絮狀或顆粒狀沉淀生長。淀生長。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、邊在血平板上形成灰白色、半透明

4、、表面光滑、邊緣整齊、直徑緣整齊、直徑0.5-0.75mm的細(xì)小菌落，不同菌株的細(xì)小菌落，不同菌株溶血不一。溶血不一。Page 63、生化反應(yīng)、生化反應(yīng)分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，對乳糖、甘露醇、水楊苷、山梨對乳糖、甘露醇、水楊苷、山梨醇、棉子糖、蕈糖、七葉苷的分醇、棉子糖、蕈糖、七葉苷的分解能力因不同菌株而異。一般不解能力因不同菌株而異。一般不分解菊糖，不被膽汁溶解，觸酶分解菊糖，不被膽汁溶解，觸酶陰性。陰性。Page 74、抗原結(jié)構(gòu)、抗原結(jié)構(gòu)鏈球菌的抗原構(gòu)造較復(fù)雜，主要有三種：鏈球菌的抗原構(gòu)造較復(fù)雜，主要有三種：（1）核蛋白抗原核蛋白抗原 或稱或稱P抗原，無特異性，抗原

5、，無特異性，各種鏈球菌均相同。各種鏈球菌均相同。（2）多糖抗原多糖抗原或稱或稱C抗原，系群特異性抗抗原，系群特異性抗原，是細(xì)胞壁的多糖組分，可用稀鹽酸等提原，是細(xì)胞壁的多糖組分，可用稀鹽酸等提取。取。（3）蛋白質(zhì)抗原蛋白質(zhì)抗原 或稱表面抗原，具有型特或稱表面抗原，具有型特異性，位于異性，位于C抗原外層，其中可分為抗原外層，其中可分為M、T、R、S四種不同性質(zhì)的抗原成分，與致病性四種不同性質(zhì)的抗原成分，與致病性有關(guān)的是有關(guān)的是M抗原?？乖?。Page 85、分類、分類根據(jù)鏈球菌在血液培養(yǎng)基上生長繁殖后是否溶血根據(jù)鏈球菌在血液培養(yǎng)基上生長繁殖后是否溶血及其溶血性質(zhì)分為三類。及其溶血性質(zhì)分為三類。（1

6、）-溶血性鏈球菌溶血性鏈球菌：菌落周圍有：菌落周圍有1-2mm寬的寬的草綠草綠色溶血環(huán)色溶血環(huán)，也稱甲型溶血，這類鏈球菌多為，也稱甲型溶血，這類鏈球菌多為條件致病條件致病菌。菌。（2）-溶血性鏈球菌溶血性鏈球菌：菌落周圍形成一個：菌落周圍形成一個2-4mm寬、寬、界限分明、完全透明的界限分明、完全透明的無色溶血環(huán)無色溶血環(huán)，也稱乙型溶血，也稱乙型溶血，因而這類菌亦稱為溶血性鏈球菌，該菌的因而這類菌亦稱為溶血性鏈球菌，該菌的致病力強致病力強，常引起人類和動物的多種疾病。常引起人類和動物的多種疾病。 （3）-鏈球菌鏈球菌：不產(chǎn)生溶血素不產(chǎn)生溶血素，菌落周圍無溶血，菌落周圍無溶血環(huán)，也稱為丙型或不溶

7、血性鏈球菌，該菌環(huán)，也稱為丙型或不溶血性鏈球菌，該菌無致病性無致病性，常存在于乳類和糞便中，偶爾也引起感染常存在于乳類和糞便中，偶爾也引起感染 。Page 9溶血性鏈球菌在自然界中分布較廣，存在于水、空氣、塵埃、溶血性鏈球菌在自然界中分布較廣，存在于水、空氣、塵埃、糞便及健康人和動物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過直接接糞便及健康人和動物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過直接接觸、空氣飛沫傳播或通過皮膚、粘膜傷口感染，被污染的食觸、空氣飛沫傳播或通過皮膚、粘膜傷口感染，被污染的食品如品如奶、肉、蛋及其制品奶、肉、蛋及其制品也會對人類進行感染。上呼吸道感也會對人類進行感染。上呼吸道感染患者、人畜化膿性感染

8、部位常成為食品污染的污染源。一染患者、人畜化膿性感染部位常成為食品污染的污染源。一般來說，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品：般來說，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品：1、食品加工或銷售人員口腔、鼻腔、手、面部有化膿性炎、食品加工或銷售人員口腔、鼻腔、手、面部有化膿性炎癥時造成食品的污染；癥時造成食品的污染； 2、食品在加工前就已帶菌、奶牛患化膿性乳腺炎或畜禽、食品在加工前就已帶菌、奶?；蓟撔匀橄傺谆蛐笄菥植炕摃r，其奶和肉尸某些部位污染；局部化膿時，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包裝不善而使食品受到污染。、熟食制品因包裝不善而使食品受到污染。流行病學(xué)流行病學(xué)Page 10 溶血

9、性鏈球菌常可引起皮膚、皮下組織的溶血性鏈球菌?？梢鹌つw、皮下組織的化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)性流行以及新生兒敗血癥、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、性流行以及新生兒敗血癥、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、猩紅熱、腎小球腎炎。猩紅熱、腎小球腎炎。溶血性鏈球菌的致病性與其產(chǎn)生的毒素及其侵溶血性鏈球菌的致病性與其產(chǎn)生的毒素及其侵襲性酶有關(guān)，主要有以下幾種：襲性酶有關(guān)，主要有以下幾種：1、鏈球菌溶血素鏈球菌溶血素：溶血素有：溶血素有O和和S兩種，兩種，O為含有為含有-SH的蛋白質(zhì)，具有抗原性，的蛋白質(zhì)，具有抗原性，S為小分為小分子多肽，分子量較小，故無抗原性。子多肽，分子量較小

10、，故無抗原性。2、致熱外毒素致熱外毒素：曾稱紅疹毒素或猩紅熱：曾稱紅疹毒素或猩紅熱毒素，是人類猩紅熱的主要毒性物質(zhì)，會引起毒素，是人類猩紅熱的主要毒性物質(zhì)，會引起局部或全身紅疹、發(fā)熱、疼痛、惡心、嘔吐、局部或全身紅疹、發(fā)熱、疼痛、惡心、嘔吐、周身不適。周身不適。致致病病性性 Page 113、透明質(zhì)酸酶透明質(zhì)酸酶：又稱擴散因子，能分解：又稱擴散因子，能分解細(xì)胞間質(zhì)的透明質(zhì)酸，故能增加細(xì)菌的侵細(xì)胞間質(zhì)的透明質(zhì)酸，故能增加細(xì)菌的侵襲力，使病菌易在組織中擴散。襲力，使病菌易在組織中擴散。4、鏈激酶鏈激酶：又稱鏈球菌纖維蛋白溶酶，：又稱鏈球菌纖維蛋白溶酶，能使血液中纖維蛋白酶原變成纖維蛋白酶，能使血液

11、中纖維蛋白酶原變成纖維蛋白酶，具有增強細(xì)菌在組織中的擴散作用，該酶具有增強細(xì)菌在組織中的擴散作用，該酶耐熱，耐熱，10050分鐘仍可保持活性。分鐘仍可保持活性。5、鏈道酶鏈道酶：又稱鏈球菌：又稱鏈球菌DNA酶，能使膿酶，能使膿液稀薄，促進病菌擴散。液稀薄，促進病菌擴散。6、殺白細(xì)胞素殺白細(xì)胞素：能使白細(xì)胞失去動力，：能使白細(xì)胞失去動力，變成球形，最后膨脹破裂。變成球形，最后膨脹破裂。Page 12抵抗力抵抗力 該菌該菌抵抗力一般不強抵抗力一般不強，6030min即即被殺死，對常用被殺死，對常用消毒劑敏感消毒劑敏感，在干燥，在干燥塵埃中生存數(shù)月。乙型鏈球菌對青霉塵埃中生存數(shù)月。乙型鏈球菌對青霉素

12、、紅霉素、氯霉素、四環(huán)素、磺胺素、紅霉素、氯霉素、四環(huán)素、磺胺均敏感。均敏感。青霉素青霉素是鏈球菌感染的首選是鏈球菌感染的首選藥物，很少有耐藥性。藥物，很少有耐藥性。 Page 13Page 14設(shè)備和材料設(shè)備和材料1冰箱：冰箱：O4。2恒溫培養(yǎng)箱：恒溫培養(yǎng)箱：36士士1。3恒溫恒溫水浴水浴鍋：鍋：36土土1。4顯微鏡：顯微鏡：10*l00*。5均質(zhì)器均質(zhì)器或滅菌乳缽?；驕缇槔?。6離心機離心機：4000r/min。7架盤藥物天平：架盤藥物天平：0g5009，精確至，精確至0.5g。8滅菌滅菌試管試管：10mm*100mm、l6mm*160mm。9滅菌滅菌吸管吸管：1mL（具（具0.01mL刻

13、度）、刻度）、5mL、10mL（具（具1mL刻度）?？潭龋?0滅菌錐形瓶：滅菌錐形瓶：100mL。11滅菌培養(yǎng)皿：直徑滅菌培養(yǎng)皿：直徑90mm。12滅菌棉簽、鑷子等。滅菌棉簽、鑷子等。Page 15培養(yǎng)基和試劑培養(yǎng)基和試劑1葡萄糖肉浸液肉湯：按葡萄糖肉浸液肉湯：按GB/T4789.28一一2003中中4.1規(guī)定。在肉浸液肉湯內(nèi)加人規(guī)定。在肉浸液肉湯內(nèi)加人1葡萄糖。葡萄糖。2肉浸液肉湯：按肉浸液肉湯：按GB/T4789.28一一2003中中4.1規(guī)定。規(guī)定。3匹克氏肉湯：按匹克氏肉湯：按GB/T4789.28一一2003中中4.62規(guī)定。規(guī)定。4血血瓊脂瓊脂平板：按平板：按GB/T4789.2

14、8一一2003中中4.6規(guī)定。規(guī)定。5人血漿。人血漿。6 0.25%氯化鈣。氯化鈣。7 0.85滅菌生理鹽水。滅菌生理鹽水。8桿菌膚藥敏紙片（含桿菌膚藥敏紙片（含0.04單位）。單位）。Page 16Page 17Page 18匹克氏肉湯匹克氏肉湯 含含1%胰蛋白胨的牛心浸液胰蛋白胨的牛心浸液200mL 1：25000結(jié)晶紫鹽水溶液結(jié)晶紫鹽水溶液10mL 1：800三氮化鈉溶液三氮化鈉溶液10mL 脫纖維兔血脫纖維兔血(或羊血或羊血)10mL 制法制法 ：將上述已滅菌的各種成分，用無菌將上述已滅菌的各種成分，用無菌手續(xù)依次混合，分裝于無菌試管內(nèi)，每手續(xù)依次混合，分裝于無菌試管內(nèi)，每管約管約2m

15、L，保存于冰箱內(nèi)備用，保存于冰箱內(nèi)備用 Page 19血平板：菌落為灰白色，半透明或不透明，血平板：菌落為灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直徑約表面光滑，有乳光，直徑約0.50.75mm，為圓形突起的細(xì)小菌落，乙型溶血性鏈球為圓形突起的細(xì)小菌落，乙型溶血性鏈球菌周圍有菌周圍有24mm界限分明、無色透明的界限分明、無色透明的溶血圈。溶血圈。 Page 20制法：取制法：取營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂（PH76），加熱使），加熱使其溶解待冷至其溶解待冷至45-50，以滅菌操作于每，以滅菌操作于每100毫升營養(yǎng)瓊脂加滅菌脫纖維羊血或兔毫升營養(yǎng)瓊脂加滅菌脫纖維羊血或兔血血5-10毫升毫升,輕輕搖勻，立即

16、傾注于平板或輕輕搖勻，立即傾注于平板或分裝試管，制成斜面?zhèn)溆谩７盅b試管，制成斜面?zhèn)溆谩?配方：配方：pH7.4-7.6豆粉瓊脂豆粉瓊脂 100ml 脫纖維羊血脫纖維羊血 510ml 血瓊脂平板（血瓊脂平板（BA）亦可用其它營養(yǎng)豐富的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制血瓊脂。亦可用其它營養(yǎng)豐富的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制血瓊脂。Page 211、樣品處理樣品處理：?。喝?5g固體（或固體（或25mL液體）液體）檢樣加入檢樣加入225mL滅菌生理鹽水，制成混懸液。滅菌生理鹽水，制成混懸液。2、吸取、吸取5mL混懸液接種至混懸液接種至50mL葡萄糖肉浸葡萄糖肉浸液肉湯，或直接劃線于血平板（如檢樣污染液肉湯，或直接劃線于血平板（如檢

17、樣污染嚴(yán)重，可同時接種嚴(yán)重，可同時接種5mL至匹克氏肉湯），至匹克氏肉湯），36培養(yǎng)培養(yǎng)24h，接種血平板，接種血平板，36培養(yǎng)培養(yǎng)24h,挑起乙型溶血圓形突起的細(xì)小菌落，在血平挑起乙型溶血圓形突起的細(xì)小菌落，在血平板上分純，觀察在液體和固體中的培養(yǎng)特征、板上分純，觀察在液體和固體中的培養(yǎng)特征、溶血情況及革蘭氏染色、形態(tài)，并進行鏈激溶血情況及革蘭氏染色、形態(tài)，并進行鏈激酶試驗和桿菌肽敏感試驗。酶試驗和桿菌肽敏感試驗。（一）檢驗（一）檢驗 Page 22葡萄糖肉浸液肉湯葡萄糖肉浸液肉湯原原 理：理： 蛋白胨、牛肉浸出粉提供氮源、蛋白胨、牛肉浸出粉提供氮源、維生素和生長因子；氯化鈉維持維生素和生長

18、因子；氯化鈉維持均衡的滲透壓；磷酸氫二鉀為緩均衡的滲透壓；磷酸氫二鉀為緩沖劑；葡萄糖提供碳源沖劑；葡萄糖提供碳源。配方（每升）：配方（每升）： 牛肉牛肉(提取浸出提取浸出粉粉)500g氯化鈉氯化鈉 5g蛋白胨蛋白胨 10g磷酸氫二鉀磷酸氫二鉀 2g葡萄糖葡萄糖10g 最終最終pH 7.50.2 將絞碎之去筋膜無油脂牛肉將絞碎之去筋膜無油脂牛肉500g加蒸餾水加蒸餾水1000mL，混合，混合后放冰箱過夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小時，使肉后放冰箱過夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小時，使肉渣完全凝結(jié)成塊，用絨布過濾，并擠壓收集全部濾液，加渣完全凝結(jié)成塊，用絨布過濾，并擠壓收集全部濾液，加水補足原

19、量。加入蛋白胨、氯化鈉和磷酸鹽，溶解后校正水補足原量。加入蛋白胨、氯化鈉和磷酸鹽，溶解后校正pH7.47.6煮沸并過濾，分裝燒瓶，煮沸并過濾，分裝燒瓶，121高壓滅菌高壓滅菌30min。 Page 234、桿菌肽敏感試驗桿菌肽敏感試驗：取典型菌落的菌液涂布：取典型菌落的菌液涂布于血平板上，用滅菌鑷子夾取每片含有于血平板上，用滅菌鑷子夾取每片含有0.04單單位的桿菌肽紙片置于上述平板上，位的桿菌肽紙片置于上述平板上，36培養(yǎng)培養(yǎng)18-24h，如有抑菌圈出現(xiàn)即為陽性。用已知，如有抑菌圈出現(xiàn)即為陽性。用已知的陽性菌株做對照。的陽性菌株做對照。Page 243、鏈激酶試驗鏈激酶試驗：吸取草酸鉀血漿：吸取草酸鉀血漿0.2mL，加加0.8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌球菌18-24h36肉浸液肉湯培養(yǎng)物肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL及及0.25%氯化鈣氯化鈣0.25mL，混勻，置于，混勻，置于36水浴水浴10min,血漿混合物自行凝固，觀察凝血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時間，完全溶解為陽性，塊重新完全溶解的時間，完全溶解為陽性，如