cn抗血栓的側(cè)異腹胡蜂昆蟲(chóng)蜂毒多肽有效部位制備及用途

1、權(quán)利要求書(shū)CN 103655633 A1/1 頁(yè)1. 一種蜂毒多肽有效部位，其特征是 ：該有效部位是從膜翅目胡蜂總科側(cè)異腹胡蜂屬昆蟲(chóng)的粗蜂毒經(jīng)透析膜透析而得 ；其中透析膜的截留量為 25KDa。，其特征是 ：溶解收集到的胡2. 一種權(quán)利 1 所述的蜂毒多肽有效部位的蜂粗蜂毒，倒入透析管中，扎緊上口，將裝好的透析管放入餾水的燒杯中，搖床震蕩透析，攪拌，12-24 小時(shí)后取透出液干燥，脫鹽，再干燥即得 ；其中透析管是指截留量為25KDa 的透析袋，干燥是指冷凍干燥或減壓濃縮干燥，胡蜂粗蜂毒是指膜翅目胡蜂總科側(cè)異腹胡蜂屬昆蟲(chóng)體內(nèi)的蜂毒。3. 權(quán)利要求 1-2 任一所述的蜂毒多肽有效部位用于防治心腦疾

2、病的用途，其特征是 ：所述心腦疾病是指缺血性腦疾病、缺血性心疾病。4. 根據(jù)權(quán)利要求 3 的用途，其特征是所述心腦疾病是指心梗、心血栓、腦血栓、腦梗、急 / 慢性腦卒中、和 / 或腦梗塞損傷后遺癥 ；其中腦梗塞損傷后遺癥是指?jìng)?cè)偏癱、偏身感覺(jué)、偏盲、面舌癱、失語(yǔ)、全身癱瘓。5. 根據(jù)權(quán)利要求 3 的用途，其特征是 ：所述用途是通過(guò)制劑、醫(yī)療器械、日化用品形式得以體現(xiàn) ；所述制劑、醫(yī)療器械、日化的形式是水凝膠凝膠、涂膜劑、巴布劑、凍干粉、水劑、氣霧劑、栓劑、外用搽劑、軟膏劑。6. 一種具有防治心腦疾病功效的組合物，其特征是 ：該組合物含有治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求 1 的蜂毒多肽有效部位、藥用輔料、

3、藥用載體或敷料。22說(shuō)明書(shū)CN 103655633 A1/19 頁(yè)抗血栓的側(cè)異腹胡蜂昆蟲(chóng)蜂毒多肽有效部位的及用途技術(shù)領(lǐng)域0001本發(fā)明涉及技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種側(cè)異腹胡蜂屬昆蟲(chóng)中多肽用途。該有效部位是由側(cè)異腹胡蜂屬胡蜂的粗蜂毒以截留有效部位的及量為 25KDa 的透析膜透析，析出液經(jīng)冷凍干燥或者減壓濃縮干燥而得。本發(fā)明人經(jīng)一系列動(dòng)物體內(nèi)外藥理藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該多肽有效部位具有顯著防治腦血栓生成、恢復(fù)腦癱動(dòng)物活動(dòng)能力、減輕缺血性腦損傷的功效，可預(yù)期用于防治心腦疾病缺血性腦疾病和缺血性心疾病的品、醫(yī)療器械和日化用品。背景技術(shù)0002心腦疾病是世界上威脅人類(lèi)最嚴(yán)重的疾病之一，其和率已超過(guò)

4、腫瘤而躍居世界第一。目前，全球有高血壓患者 6 億人，高血壓患病率約 10。心臟病和中風(fēng)等心腦地區(qū)心疾病也是我國(guó)首位。北京市衛(wèi)生局披露，上世紀(jì) 80 年代后，北京病和腦中風(fēng)的都呈明顯上升的趨勢(shì)，到 2006 年，心腦疾病占到居民公布的資料顯示 ：率達(dá) 21.2%，心總的 44%，已經(jīng)成為北京居民的第一位。2005 年中國(guó)口的總率中心腦疾病率高居首位，城市居民腦率也達(dá) 21.2%，心臟病臟病率 17.9% ；而農(nóng)村居民腦率 11.8%。中國(guó)每年有將近 300 萬(wàn)人死于心疾病，每天有 7000 多人死于心疾病，大約每 12 秒鐘倒下 1位。近十幾年 35 55 歲男性心肌梗死增度最快。隨著生活水平

5、的提高和生活節(jié)奏的加快，心腦0003心腦疾病現(xiàn)已進(jìn)入窗口期，未來(lái)十年將爆發(fā)流行。疾病是兩大類(lèi)疾病的總稱(chēng)，它可分為心疾病和腦疾病。心疾病以冠心病為主，冠心病又稱(chēng)冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病，是由于供應(yīng)心肌血液的冠狀動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化，使動(dòng)脈變窄，心肌供血不足造成的 ；由于冠狀動(dòng)脈病變引起管腔狹窄或閉塞的臨床癥狀，在時(shí)間長(zhǎng)短、程度輕重上不盡相同，因此可表現(xiàn)為隱性心臟病、心絞痛、心肌梗塞、心肌硬化和心源性猝死等多種形式。腦病則是指腦破裂或血栓形成，引起的以腦部0004心腦性或缺血性損傷癥狀為主要臨床表現(xiàn)的一組疾病，俗稱(chēng)腦中風(fēng)。疾病已成為危害人們生命和健康的“第一”，具有“高、致殘率高率高、復(fù)發(fā)率高、并發(fā)癥多”

6、之“四高一多”的特點(diǎn)。臨床類(lèi)型上分為（1）完全性卒中 ：發(fā)病后神經(jīng)功能卒中 ：發(fā)病后神經(jīng)功能癥狀較重較完全小時(shí)內(nèi)（<6 小時(shí)）達(dá)到。（2）進(jìn)展性癥狀在 48 小時(shí)內(nèi)逐漸進(jìn)展或呈階梯式加重。（3）可逆性缺血性神經(jīng)功能0005腦RIND）：發(fā)病后神經(jīng)病具體而言，是指腦癥狀較輕，持續(xù) 24 小時(shí)以上，但可于 3恢復(fù)。性或缺破裂或血栓形成，引起的以腦部血性損傷癥狀為主要臨床表現(xiàn)的一組疾病，又稱(chēng)腦意外或腦卒中，俗稱(chēng)為腦中風(fēng)，是當(dāng)前三大致死疾病之一。臨床流行病學(xué)資料顯示，我國(guó)腦卒中發(fā)生率 150 萬(wàn)/ 年100 萬(wàn)除日占/ 年。據(jù)國(guó)外統(tǒng)計(jì)資料，腦病以缺血性為多見(jiàn)，腦梗塞占 59.2% 85%。而腦本

7、外，一般在 20% 以下。中國(guó) 1984 年農(nóng)村新發(fā)完全性卒中 280 例，蛛網(wǎng)膜下腔3.9%、腦占 44.6%、腦血栓占 46.4%、腦栓塞占 2.5%、難以分型者占 2.9%。由以上資料可33說(shuō)明書(shū)CN 103655633 A2/19 頁(yè)看出缺血性腦疾病中腦血栓發(fā)病幾率為最高。0006目前，在腦血栓的治療上，主要采用（1）超早期溶栓治療 ：目的是溶解血栓，迅速恢復(fù)梗死區(qū)血流灌注，減輕神經(jīng)元損傷 ；溶栓應(yīng)在起病 6 小時(shí)內(nèi)的治療時(shí)間窗內(nèi)進(jìn)行才有可能挽救缺血半暗帶。（2治療 ：目的在于防止血栓擴(kuò)展和新血栓形成 ；常用有肝素、低肝素及華等 ；治療期間應(yīng)監(jiān)測(cè)凝血時(shí)間和凝血酶原時(shí)間，還須備有維生素K

8、、硫酸魚(yú)精蛋白等拮抗劑，以便處理可能性的并發(fā)癥。（3）腦保護(hù)治療 ：可采用鈣離子通道阻滯劑、鎂離子、抗興奮性氨基酸遞質(zhì)基清除劑和亞低溫治療。（4）降纖治療 ：通過(guò)降解血中蛋白原，增強(qiáng)纖溶系統(tǒng)活性，抑制血栓形成有 ：降纖酶酶、安酶和蚓激酶等。（5）抗血小板治療 ：發(fā)病后 48 小時(shí)內(nèi)對(duì)無(wú)選擇的急性腦梗死給予阿司匹林 100 300 毫克 / 天，可降低率和復(fù)發(fā)率，但在進(jìn)行溶栓及治療時(shí)等也可應(yīng)不要同時(shí)應(yīng)用，以免增加的風(fēng)險(xiǎn) ；其他抗血小板劑如噻氯匹定、氯吡用。（6）其他胞營(yíng)養(yǎng)劑質(zhì)及受體類(lèi)。治療擴(kuò)張劑可導(dǎo)致腦內(nèi)盜血及加重腦水腫，宜慎用或不用 ；神經(jīng)細(xì)三類(lèi) ：影響能量代謝類(lèi)（急性期不宜使用）、影響氨基酸

9、及多肽類(lèi)、影響神經(jīng)遞0007隨著對(duì)環(huán)保要求的日益提高，以及研發(fā)出的化學(xué)制劑毒性和副作用越來(lái)越大，使得界、藥企、及患者不得不將眼光轉(zhuǎn)向廣譜、低毒、使用安全的“綠色治療”。不斷研發(fā)出新的植物和動(dòng)物天然綠色抗心腦行的一個(gè)既定政策。疾病生化新藥，是十幾億人口的人口大國(guó)必須執(zhí)0008由于缺血性腦疾病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，當(dāng)前對(duì)其治療也比較多，這些治療藥物中有植物藥、動(dòng)物藥和礦物藥。而動(dòng)物在治療腦疾病方面效果顯著，歷來(lái)備受醫(yī)學(xué)界關(guān)注，對(duì)于動(dòng)物治療腦疾病研究較多的有水蛭制劑、蛇毒制劑、地龍制劑等。0009動(dòng)物保護(hù)缺血性腦損傷多通過(guò)降低興奮性神經(jīng)遞質(zhì)和酸的毒性作用、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化和硝化反應(yīng)、減輕炎癥反應(yīng)和抑制細(xì)胞凋亡

10、等途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)，具有多靶點(diǎn)、多層次、多環(huán)節(jié)的腦保護(hù)作用。動(dòng)物毒素及其提取物對(duì)腦缺血的治療作用及其機(jī)制研究中，研究的較多的是（1）蛇毒 ：現(xiàn)今藥監(jiān)局批準(zhǔn)上市并在在治療腦疾病時(shí)使用的蛇毒制劑主要去纖酶、蛇島蝮蛇酶 (SVATE I)、蝮蛇酶 (SVATE)、江浙蝮蛇抗栓酶 (SVATEII)、蘄蛇酶、消栓靈、精制溶栓酶，以及由推向的克栓酶(DF-521)、俗稱(chēng)酶。（2）水蛭制劑 ：水蛭素是一種多肽，現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，水蛭素具有、抗血小板集聚微循環(huán)等藥理作用，大量臨床試驗(yàn)表明，水蛭素比肝素能更有效地預(yù)防深靜脈血栓形成。（3）地龍制劑 ：地龍的活性成分蚓激酶能抑制腦缺血后血栓形成、減輕腦組織損傷，提示

11、蚓激酶可作為腦疾病的防治。（4）全蝎 ：蝎毒纖溶活性肽對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抑制炎性細(xì)胞因子表達(dá)有關(guān)。（5）虻蟲(chóng) ：虻蟲(chóng)提取液具有弱多糖類(lèi)物質(zhì)能顯著著延長(zhǎng)血酶作用，爾瘤虻 Hybomitra erberi(Brauer) 虻蟲(chóng)中含有的、大鼠凝血時(shí)間，并能降低內(nèi)、外源凝血系統(tǒng)因子的活性，增加纖溶系統(tǒng)的活力，從而防治血栓的形成。（6）土鱉蟲(chóng) ：土鱉蟲(chóng)水提物 1 毫克 / 公斤靜注10 分鐘后，夾閉通致動(dòng)物缺氧，發(fā)現(xiàn)其可使兔耐缺氧功能明顯增強(qiáng)，土鱉蟲(chóng)水提取液能明顯延長(zhǎng)耐缺氧時(shí)間 ；增強(qiáng)腦組織中 SOD 的活性，降低 NOS 活性，增加 GSH 含量和降低 NO、MDA 的含量

12、。說(shuō)明土鱉蟲(chóng)提取液對(duì)腦缺血再灌注具有一定的保護(hù)作用 ；其機(jī)制可能與抗氧化和抑制基 NO 的生成有關(guān)。（7）蜘蛛 ：虎紋蜘蛛毒素 -I（HWTX-I）蛛網(wǎng)膜44說(shuō)明書(shū)CN 103655633 A3/19 頁(yè)下腔用藥對(duì)全腦缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用 ；其機(jī)制可能是通過(guò)抑制 Fas啟動(dòng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活而發(fā)揮作用。（8）蜈蚣 ：蜈蚣具有和溶血栓作用，機(jī)制可能與其毒液中的蛋白酶、溶血因子及其它血液系統(tǒng)活化因子等密切相關(guān) ；采用線栓法建立大腦中動(dòng)脈局灶性腦缺血再灌注大鼠模型，提示蜈蚣提取液能通過(guò)降低局灶性腦缺血再灌注大鼠血漿 vWF 和 TPO 的含量能，有效抑制血小板黏附和腦缺血再灌注造成的損傷內(nèi)

13、皮細(xì)胞損傷和血小板功，防止血栓形成，從而減輕腦缺血再灌注造成的損傷，可作為防治心腦病的防治。treatment of疾病的途徑。此外還有僵蠶、水牛角、麝香等動(dòng)物也可應(yīng)用于腦血栓疾，等 ；Animal drugs on桂膠cerebralischemia and its mechanism，CHAMC,2014。此外有溶栓成分。蝠的蝙蝠唾液、蜜蜂蜂毒肽也0010蜜蜂蜂毒 (beevenom)于蜜蜂毒囊內(nèi)的毒液，含碳、氫、硫、磷、鈣、氯、氮等元素，系透明液體，呈酸性反應(yīng)。蜜蜂蜂毒具有溶血和血作用，在治療劑量時(shí)，對(duì)極少引起溶血反應(yīng)，在較大劑量時(shí)，在體內(nèi)外都能使血液凝固時(shí)間明顯延長(zhǎng)，表明蜂毒具有活血化

14、瘀的治療作用。另外還具有降低血栓素的功效，在的作用。微循環(huán)的基礎(chǔ)上起緩解關(guān)節(jié)癥狀0011關(guān)于各類(lèi)蜂毒，國(guó)內(nèi)外均有研究。（1）國(guó)外研究狀況 ：1888 年奧地利內(nèi)科醫(yī)師Phillip Terc的一篇題為“關(guān)于蜂蜇和風(fēng)濕病的特殊關(guān)聯(lián)”的拉開(kāi)了現(xiàn)代蜂療尤其是蜂毒療法 (Bee venom therapy,BVT) 的研究序幕。美國(guó)佛蒙特州的養(yǎng)蜂人瑪耶茲·查(Charles Mraz) 經(jīng)過(guò)多次實(shí)際應(yīng)用，確信蜂毒具有緩解自身免疫性疾病如多發(fā)性硬化和風(fēng)濕性疾病的癥狀和抗炎的作用。1967 年Habermanm 首先從蜜蜂蜂毒中分離出由 26 個(gè)氨基酸組成的蜂毒素，并分析了氨基酸序列，證明其結(jié)構(gòu)

15、中無(wú)二硫鍵。1979 年Hirai 等首次從黃胡蜂 (Vespula lewisii) 毒液中分離出一種含有 l4 個(gè)氨基酸殘基的陽(yáng)離子多肽類(lèi)毒素，Mastopara（MP）是胡蜂毒液致毒、致死的主要因子之一。因其具有誘導(dǎo)鼠肥大細(xì)胞脫顆粒并組胺的功能，所以稱(chēng)之為“組胺因子”。1995 年 Reita 等在證實(shí)亞劑量膜復(fù)合物可降低補(bǔ)體對(duì)細(xì)胞的損傷基礎(chǔ)上，進(jìn)一步觀察了亞劑量蜂毒素對(duì)補(bǔ)體損傷細(xì)胞的影響。發(fā)現(xiàn)亞劑量蜂毒素可明顯降低補(bǔ)體對(duì)細(xì)胞的溶解率。1997 年 Shamsher 利用的蜂毒素觀察了對(duì)型磷脂酶 A2 的影響 ；結(jié)果表明，蜂毒素可抑制各種來(lái)源型磷脂酶 A2的活性，對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者滑液

16、中磷脂酶 A2 活性的抑制率可達(dá) 96。（2）國(guó)內(nèi)研究狀況 ：1987 年經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)全蜂毒及其各種組分對(duì)體內(nèi)或體外動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的藥理作用不同。1996 年余曉東等對(duì)意大利蜜蜂毒組分研究發(fā)現(xiàn)，蜂毒有誘導(dǎo)血小板的作用。1996年等研究發(fā)現(xiàn)蜂毒有活血化瘀的作用。2001 年等利用大腸桿菌研究并表達(dá)蜂毒素前體蛋白。2004 年等研究表明，蜂毒素可以干擾肝癌細(xì)胞細(xì)胞周期的正常移行，將細(xì)胞阻滯于 S 期，并且呈劑量依賴性，造成大量的 S 細(xì)胞的堆積。2005 年等發(fā)現(xiàn)蜂毒肽單獨(dú)使用對(duì) NK活性影響不大。嵌合蛋白 NK活性的增強(qiáng)作用最為顯著率顯，構(gòu)建了著高于正常對(duì)照組。2009 年等人工含腸激酶切割位點(diǎn)的蜂毒明

17、肽含蜂毒明肽的大腸桿菌融合表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)了蜂毒明肽與 GST的融合表達(dá)。2009 年李?lèi)?ài)劍發(fā)現(xiàn)蜂毒素在體外對(duì)人胃癌細(xì)胞 BGC 的增殖具有抑制作用。本發(fā)明人所在的大理學(xué)院藥用特種昆蟲(chóng)開(kāi)發(fā)地方工程研究中心了關(guān)于胡蜂蜂毒作為新的健康產(chǎn)業(yè)之昆蟲(chóng)的應(yīng)用前景 Heng Liu 等 ,Utilization of Polislidae wasp venom as55說(shuō)明書(shū)CN 103655633 A4/19 頁(yè)potential new insects drugs in the R&D wellness industry,International Journal of Biotechnology

18、 for Wellness Industry,2012,1:241-249。0012側(cè)異腹胡蜂屬（Parapolybia spp.）屬昆蟲(chóng)綱有翅亞綱膜翅目（Hymenoptera）細(xì)腰亞目（Apocrita）針尾部（Aculeata）胡蜂總科（Vespoidea）昆蟲(chóng)，云貴高原州廣泛分布，屬性胡蜂，結(jié)巢群居。云南省分布有十。由于很多獨(dú)特的該屬昆蟲(chóng)集中在云貴地區(qū)，國(guó)內(nèi)其他省份及國(guó)外對(duì)其研究及其活性均較少。本發(fā)明人所在的藥用特種昆蟲(chóng)開(kāi)發(fā)地方工程研究中心在對(duì)云貴高原的藥用昆蟲(chóng)抗心腦類(lèi)疾病的系列研究過(guò)，對(duì)該屬各種昆蟲(chóng)進(jìn)行了綜合全面的、種屬鑒定 ；并進(jìn)一步實(shí)施了各不同種側(cè)異腹胡蜂的蜂毒疾病的多種藥效學(xué)活

19、性，完成了、純化、得到不同的提取部位，比較了其抗心腦開(kāi)發(fā)前期前期研究工作。類(lèi)0013根據(jù)文獻(xiàn)，我國(guó)“蜂毒”的應(yīng)用多為復(fù)方，且對(duì)于蜜蜂蜂毒研究的較多。對(duì)于野生胡蜂的研究，尤其是特種側(cè)異胡蜂屬昆蟲(chóng)蜂毒中純化得到的有效部位治療心腦血管的相關(guān)尚未見(jiàn)到。已公開(kāi)的資料有 ：（1）精制類(lèi) ：2007 年公開(kāi)的“蜂毒的精制”（公開(kāi)號(hào) CN101088514A）；公開(kāi)了一種將粗蜂毒溶于乙醇中除去蜂膠等雜質(zhì)得到精制蜂毒。同年其后，二人又公開(kāi)了一種“蜂毒肽的分離提純CN101089017A），描述了將粗蜂毒用水浸洗、乙醇沉淀、氫氧化銨及正丁醇萃取”（公開(kāi)號(hào)沉淀等一系列操作，最終通過(guò)G-10 柱脫鹽、G-25 柱純化

20、和脫鹽凍干得到電泳級(jí)蜂毒肽melittin 的。2009 年對(duì)上述專(zhuān)利又申報(bào)了“蜂毒肽的提純”（公開(kāi)號(hào) CN101455287A），描述了的改進(jìn)，從而保留了蜂毒肽四聚體不被截留掉，工藝步驟減少，產(chǎn)率提高的小。1994 年的蜜蜂毒多肽公開(kāi)了一種用過(guò)濾、超濾、透析除掉大申報(bào)的“一種胡蜂抗菌肽及其和方。2009 年法和應(yīng)用”（號(hào) CN100547000C），描述了一種用凝膠過(guò)濾柱層析、離子交換柱層析和反相高壓液相色譜進(jìn)行分離純化得到量為 1387.7的單鏈多肽。（2）蜂毒肽的應(yīng)用方面 ：2005 年等公開(kāi)了一種“蜂毒肽及其應(yīng)用”（公開(kāi)號(hào) CN1704431A），描述了用樹(shù)脂合成 INLKAIAALA

21、KKLL-NH2 的小肽及其用于和治療膿毒癥的。2009 年申請(qǐng)了“胡蜂抗菌肽及其和應(yīng)用”（號(hào) CN100475840C），描述了分子量為 1316.6的 NH2-IDWKGIAAMAKI-COOH 的胡蜂抗菌肽，主要是通過(guò)離心、凝層析、離子交換柱層析、反相 HPLC 柱純化得到，并測(cè)試了其對(duì)細(xì)菌、真菌、腫瘤細(xì)胞的抑制作用。（3）生物工程及應(yīng)用方面 ：2001 年，美國(guó)泛太平洋制藥公司公開(kāi)了“蜂毒蛋白的有用特性和編碼這種蜂毒蛋白的”（公開(kāi)號(hào) CN1313895A），描述了從蜜蜂毒液中分離的新型蛋白、其抗體和編碼改蛋白的核酸，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和炎癥。2002 年方、施”號(hào)婉君、程家安公開(kāi)了“

22、墨胸胡蜂蜂毒溶血肽前體及其編碼的多肽和（公開(kāi)號(hào) CN1385526A）和“額斑黃胡蜂溶血肽前體及編碼的多肽和”（CN1385525A）。2005 年方、施婉君、程家安等又先后公開(kāi)了“大胡蜂鎮(zhèn)靜肽前體肽前體毒素與及其編碼的多肽和及編碼的多肽和”（號(hào) CN1194089C）和“中蜂大胡蜂溶血等公開(kāi)了“蜂”（號(hào) CN1233830C）。2006 年變構(gòu)胞介素 2 嵌合體蛋白”（公開(kāi)號(hào) CN1754960A），作為治療腫瘤的工程嘗試。2007 年公開(kāi)了“尿激酶型纖溶酶激活劑 a 鏈與蜂毒素的融合蛋白及其”（公開(kāi)號(hào) CN101337992A），描述了一種由尿激酶型纖溶酶原激活劑 a 鏈與蜂66說(shuō)明書(shū)CN

23、 103655633 A5/19 頁(yè)毒素結(jié)合形成的融合蛋白、其及該融合蛋白在腫瘤治療中的作用。2008 年生物藥業(yè)申報(bào)了“重組 ceeA-mil 雜合抗菌肽”（公開(kāi)號(hào) CN101323644A），根據(jù)天蠶素 A 和蜂毒素，用工程構(gòu)建酵母表達(dá)一種重組蛋白，測(cè)試了其抗菌活性，借此嘗試一種重組抗菌肽。2009 年，重慶大學(xué)胡等公開(kāi)了“蜂毒肽裂殖酵母工程菌及其等公開(kāi)了一種“中構(gòu)建和應(yīng)用”（號(hào) CN101591622B）。同年，浙江大學(xué)蜂王漿抗菌肽 AccRoyalisin及其編碼多肽與應(yīng)用”（公開(kāi)號(hào) CN101705231A），并測(cè)試了用發(fā)酵工程重組的Royalisin 產(chǎn)物抗真菌活性。2011 年華

24、南農(nóng)業(yè)大學(xué)等公開(kāi)了治療雞輸卵一種“一種重組蜂毒肽及其應(yīng)用”（公開(kāi)號(hào) CN102229664A），用該重組管疾病。同年，浙江大學(xué)葉恭銀等公開(kāi)了一種“蝶蛹金小蜂毒液絲氨酸蛋白酶抑制劑 Pp-PI多肽及應(yīng)用”（公開(kāi)號(hào) CN102260348）；意圖用于轉(zhuǎn)作物或改造植物共生菌。（4）制劑方面2001 年公開(kāi)了一種“納米胡蜂制劑及其”（公開(kāi)號(hào) CN1366926A），描寫(xiě)了以胡蜂蟲(chóng)體為原料，超微粉碎后，經(jīng)過(guò)系列處理，用超音速射流技術(shù)的納米胡蜂制劑。沈陽(yáng)藥科大學(xué)于 2003 年申報(bào)的“蜂毒的可生物降解微球注射劑及其制備”描述了對(duì)于蜜蜂毒的微球制劑劑型嘗試，但并無(wú)藥理實(shí)施例。2009 年等又申報(bào)了一種“用于

25、口服給藥的蜂毒肽復(fù)合物納米粒及其”（公開(kāi)號(hào) CN101406691A）；描述了用納米技術(shù)將蜜蜂毒制成蜂毒肽復(fù)合物納米粒，用于口服。以上制劑均無(wú)描述純化后的胡蜂毒有效部位，尤其是產(chǎn)于云南特殊種群的側(cè)異腹胡蜂屬昆蟲(chóng)蜂毒有效部位的透皮吸收制劑；更無(wú)其生理活性和對(duì)于心腦的藥效學(xué)的活性方面的相關(guān)報(bào)導(dǎo)。0014顯然，上述公開(kāi)的各項(xiàng)發(fā)明均未對(duì)隸屬于特殊種群的側(cè)異腹胡蜂屬昆蟲(chóng)種類(lèi)及其抗腦血栓方面的活性進(jìn)行研究。鑒于生物界由于地理、氣候環(huán)境不同造就出的豐富的生物多樣性對(duì)生理活性的影響，昆蟲(chóng)不同的種屬之間結(jié)構(gòu)差異千差萬(wàn)別，僅僅氨基酸的排列不同就導(dǎo)致生物活性的巨大差異。故而，專(zhuān)門(mén)西南地區(qū)生物多樣性最高的昆蟲(chóng)種類(lèi)最多

26、的云南省之異腹胡蜂科側(cè)異腹胡蜂屬昆蟲(chóng)毒素進(jìn)行系統(tǒng)和生物活性測(cè)定尚屬首次，然卻十分必要。對(duì)于維護(hù)生物安全性，率先云南胡蜂總科側(cè)異腹胡蜂屬藥用昆蟲(chóng)以前未研究過(guò)的防治心腦疾病活性的意義。0015側(cè)異腹胡蜂屬在我國(guó)云貴高原地區(qū)廣泛分布，云南省已定名的不足 10 種，是云南省優(yōu)勢(shì)。為明確云貴高原藥源廣泛分布的側(cè)異腹胡蜂屬昆蟲(chóng)毒素是否（1）具有治療缺血性心腦疾病活性及其用途，（2）側(cè)異腹胡蜂屬蜂毒多肽有效部位的 TTS 制劑治療缺血性心腦構(gòu)基礎(chǔ)，（3）從疾病的強(qiáng)度比較及由此指導(dǎo)進(jìn)一步弄清其中起主要藥理作用的物質(zhì)結(jié)藥理學(xué)基礎(chǔ)上闡明側(cè)異腹胡蜂屬昆蟲(chóng)毒素多種生物活性的作用機(jī)制，大理學(xué)院藥用特種昆蟲(chóng)開(kāi)發(fā)地方工程研

27、究中心的研發(fā)團(tuán)隊(duì)對(duì)分布于云南省境內(nèi)的民間習(xí)用側(cè)異腹胡蜂屬昆蟲(chóng)進(jìn)行了綜合和藥效學(xué)活性研究。給藥是通過(guò)皮膚給藥的法應(yīng)用于皮膚后，以恒定速度（或接吸收進(jìn)入體循環(huán)，產(chǎn)生全身或局部治therapeutic system，簡(jiǎn)稱(chēng)TTS) 或經(jīng)0016近恒定速度）穿過(guò)角質(zhì)層，擴(kuò)散通過(guò)皮膚，由毛細(xì)療作用，通常文獻(xiàn)上稱(chēng)為皮給藥系統(tǒng) (transdermal避免肝臟的首過(guò)效應(yīng)和治療系統(tǒng)(transdermaldrug delivery system，簡(jiǎn)稱(chēng) TDDS)。給藥的特點(diǎn) ：（1）可在胃腸道中的滅活的吸收不受胃腸道因素的影響，減少用藥的差異。（2）可維持恒定有效的血藥濃度或生理效應(yīng)，避免口服給藥引起的血藥濃度

28、峰谷現(xiàn)象，降低毒副反應(yīng)。（3）減少給藥次數(shù)，提高治療效能，延長(zhǎng)作用時(shí)間，避免多劑量77說(shuō)明書(shū)CN 103655633 A6/19 頁(yè)給藥，使大多數(shù)易于接受。（4）使用方便，患者可以用藥，也可以隨時(shí)撤銷(xiāo)用藥。制劑研發(fā)的熱點(diǎn)之一，并且發(fā)展迅0017正因?yàn)檫@些優(yōu)點(diǎn)，TTS 系統(tǒng)的研發(fā)是目前速，如硝酸甘油貼片自 80 年代問(wèn)世以來(lái)一直是世界上最暢銷(xiāo)的 50 種之一。TTS 系統(tǒng)是被國(guó)內(nèi)界普遍認(rèn)可的繼口服和注射之后的第三代制劑新劑型，是當(dāng)代制藥業(yè)理應(yīng)掌握的高新技術(shù)，在不僅是世界上發(fā)展最快的制劑學(xué)上具有里程碑的意義。作為第三代研究領(lǐng)域之一，而且在歐、美等發(fā)達(dá)新劑型，TTS 系統(tǒng)已經(jīng)產(chǎn)生了巨大的效益。自 1

29、981 年第一個(gè) TTS東莨菪堿貼片問(wèn)世以來(lái)，TTS 立即受到了廣大患者的歡迎。據(jù)超過(guò)其他戒煙，在 1992 年 Nicotin-TTS（尼古丁貼劑）的銷(xiāo)售額就達(dá)到 10 億，遠(yuǎn)遠(yuǎn)，被美國(guó)雜志評(píng)為當(dāng)年美國(guó)最受歡迎的十大之一 ；1999 年僅Voltaren 公司和 Lamisil 公司生產(chǎn)的 Estraderm（雌二醇貼劑）和 Nitroderm（油貼劑）的銷(xiāo)售額分別達(dá)到 3.8 億和 3.3 億。具有強(qiáng)效麻醉性鎮(zhèn)痛藥芬太尼貼片在 2002 年開(kāi)始銷(xiāo)售就達(dá)年銷(xiāo)售額15.9 億新型外用貼劑，開(kāi)發(fā)前景廣闊，潛在。TTS 是世界一種科技含量高、范圍廣、使用方便的效益巨大。主要有以下幾類(lèi) ：【0018

30、TTS中透皮給藥已選用的】酮等 ；【心酮、睪酮、炔藥】 硝苯諾酮、18- 甲基炔諾酮、雌二醇素、加壓素、雌孕激素+地平、尼群地平、氨氯地平、消心痛、硝酸甘油地平等 ；【神經(jīng)系統(tǒng)藥】 毒扁豆堿、二氫埃托啡、酮洛酸、芬太尼等 ；【消炎鎮(zhèn)痛藥】 消炎痛、酮洛芬、氟比洛芬、布洛芬、雙氯芬酸等 ；【平喘藥】 妥洛猛，日新月異，根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）收制劑，TTS 系統(tǒng)的產(chǎn)值將達(dá)到數(shù)百億他林等。目前，國(guó)際給藥市場(chǎng)發(fā)展迅，到 2025 年，將有 1/3 的現(xiàn)用藥將采用。因此，TDDS 給藥的研發(fā)受到廣泛關(guān)注，將在使用史上翻開(kāi)新的一頁(yè)。0019國(guó)內(nèi)貼劑市場(chǎng)中，傳統(tǒng)狗皮膏 ( 古老的給藥方式 ) 類(lèi)中藥貼片

31、占據(jù)了一大半以上的市場(chǎng)份額，而中藥和化學(xué)藥品透皮貼劑的市場(chǎng)份額則微不足道。目前國(guó)內(nèi)透皮制劑市場(chǎng)規(guī)模之所以比較小，主要是受?chē)?guó)內(nèi)制劑技術(shù)水平的限制。我國(guó) TTS 系統(tǒng)在研究和開(kāi)發(fā)方面與發(fā)達(dá)規(guī)模生產(chǎn)能力。相比還比較明顯的差距，特別是工業(yè)生產(chǎn)配套水平較低，尚未能形成藥用特種昆蟲(chóng)開(kāi)發(fā)地方工程研究中心承擔(dān)的動(dòng)物藥經(jīng)皮給藥科研平臺(tái)建設(shè)項(xiàng)目對(duì)此做了大量準(zhǔn)備。不僅購(gòu)置了世界先進(jìn)的膏涂布機(jī)等一批TTS是在0020儀器，還大力引進(jìn)了專(zhuān)攻透皮制劑的科研團(tuán)隊(duì)。本發(fā)明中的各類(lèi)蜂毒 TTS 制劑，即云南省創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)昆蟲(chóng)透皮制劑 GMP 車(chē)間的。但是提高防治腦血栓形成的主要是 ：溶栓、抗血小板的存活率和生活質(zhì)量仍是腦疾病治療的

32、難題。即便存活，也有其中約 50%可留有不同程度的后遺癥。因此，提高對(duì)該癥的認(rèn)識(shí)、探索有效的治療和，實(shí)屬當(dāng)務(wù)之急，也無(wú)疑具有重要的理論價(jià)值及臨床意義。本發(fā)明人團(tuán)隊(duì)從的溶栓作用活性對(duì)血小板功能的影響腦血栓形成四方面入手，在腦血栓動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，測(cè)試相應(yīng)的神經(jīng)生理學(xué)及生理生化指標(biāo)，探討。對(duì)該模型的影響，以期為腦疾病解決實(shí)質(zhì)上的0021在對(duì)云貴高原得到的胡蜂總科昆蟲(chóng)的研究中，我們發(fā)現(xiàn)側(cè)異腹胡蜂屬胡蜂的粗蜂毒有一定的血作用，繼而多次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小于 25KDa 的有效部位具有對(duì)抗局灶性腦缺血大鼠損傷的作用。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn) ：外用于、大鼠等動(dòng)物腦部和鼻部的原料效88說(shuō)明書(shū)CN 103655633 A7/1

33、9 頁(yè)果優(yōu)于其他口服、肌注、靜注等給藥途徑。因此，本發(fā)明人設(shè)計(jì)了以現(xiàn)代制劑技術(shù)出一系列透皮吸收制劑，并將各種該 TTS 制劑應(yīng)用于抗心腦疾病藥理及藥效實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn) ：胡蜂毒多肽有效部位透皮制劑有著無(wú)可替代的優(yōu)勢(shì)，其起效時(shí)間快、毒性低、作用強(qiáng)度大、使用劑量小。最重要的是，一旦發(fā)現(xiàn)施用對(duì)象有不適癥狀或毒性反應(yīng)后可以隨時(shí)停藥，保證了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和臨床使用之的安全性。0022本發(fā)明使用不同體內(nèi)外模型，測(cè)試了側(cè)異腹胡蜂屬粗蜂毒經(jīng)由透析膜出的側(cè)異腹胡蜂屬蜂毒多肽有效部位及其透皮吸收制劑（以水凝膠劑、涂膜劑為例）對(duì)血栓、腦梗、血小板、斷頭呼吸時(shí)間等模型的藥理活性。試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn) ：側(cè)異腹胡蜂屬蜂毒多肽有效部位及其

34、透皮吸收制劑具有顯著的抗血栓、抗腦梗、抗血小板、延長(zhǎng)斷頭呼吸時(shí)間、減少腦水腫等的功效。有部分 TTS制劑的藥效活性超過(guò)多種腦缺血性疾病的一線用藥和步深入開(kāi)發(fā)，從而類(lèi)暢銷(xiāo)藥?？梢宰鳛榉乐涡哪X本發(fā)明。疾病創(chuàng)新性天然進(jìn)一發(fā)0023本發(fā)明的目的是提供了一種從側(cè)異腹胡蜂屬胡蜂中提取的多肽有效部位及其制備，其特征是 ：該有效部位是從側(cè)異腹胡蜂屬胡蜂粗蜂毒中以 25KDa 的透析膜透析，析出液經(jīng)冷凍干燥或者減壓濃縮干燥而得，其中多肽含量占比不低于 50%。0024本發(fā)明的另一目的是提供了將側(cè)異腹胡蜂屬胡蜂多肽有效部位用于防治心腦疾病的用途，其特征是 ：所述心腦疾病是指缺血性腦疾病、缺血性心血管疾病 ；具體是

35、指心梗、心血栓、腦血栓、腦梗、急 / 慢性腦卒中，及由腦梗塞損傷帶來(lái)的后遺癥如側(cè)偏癱、偏身感覺(jué)、偏盲、面舌癱、失語(yǔ)、全身癱瘓等。該用途是通過(guò)藥物制劑、醫(yī)療器械、日化用品形式得以體現(xiàn) ；所述制劑、醫(yī)療器械、日化的形式是水凝膠0025征是 ：該凝膠、涂膜劑劑、凍干粉、水劑、氣霧劑、栓劑、外用搽劑、軟膏劑。本發(fā)明的再一目的是提供了一種具有防治心腦疾病活性的組合物，其特組合物含有治療有效量的從側(cè)異腹胡蜂屬胡蜂中提取的多肽有效部位、藥用輔料、藥用載體或敷料。0026本發(fā)明中的動(dòng)物原料蜂毒多肽采自膜翅目胡蜂總科（Vespoidea）異腹胡蜂科（Polybiidae）側(cè)異腹胡蜂屬（Parapolybia s

36、pp.）昆蟲(chóng)蟲(chóng)。0027本發(fā)明提供了一種側(cè)異腹胡蜂屬蜂毒經(jīng)透析膜出的有效部位，及以其原料藥為主藥進(jìn)行配制的水凝膠劑、涂膜劑等透皮吸收制劑，及其控釋或緩釋劑型或納米制劑 ；并且，本發(fā)明人首次將上述制劑應(yīng)用于抗血栓、抗腦梗、抗血小板、延長(zhǎng)斷頭呼吸時(shí)間、減少腦水腫的用途。0028本發(fā)明所述的經(jīng)透析膜出的多肽有效部位其原料藥或其可藥用鹽為主藥進(jìn)行配制的水凝膠劑、涂膜劑等透皮吸收制劑及其控釋或緩釋劑型或其納米制劑還可以與現(xiàn)已上市的治療心疾病類(lèi)病癥的如降纖溶栓劑，腦保護(hù)制劑如鈣離子通道阻滯劑、鎂離子、抗興奮性氨基酸遞質(zhì)基清除劑、抗血小板擴(kuò)、張劑、神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑等品種使用或交叉使用，例如與肝素、低酶、安酶、

37、去纖酶、蛇島蝮蛇肝素、華維生素K、硫酸魚(yú)精蛋白、降纖酶酶(SVATE I)、蝮蛇酶 (SVATE)、江浙蝮蛇酶 (SVATE II)、蘄蛇酶、消栓靈、精制溶栓酶、阿司匹林、99說(shuō)明書(shū)CN 103655633 A8/19 頁(yè)噻氯匹定、氯吡、水蛭素及水蛭制劑、蛇毒制劑、蚓激酶及地龍制劑、虎紋蜘蛛毒素 -I（HWTX-I）、蜜蜂蜂毒 (bee venom) 及 melittin 等蜂毒肽等組合，或與醒腦靜、尼莫地平、血塞通、急效救心丹、川芎嗪等組合得到具有治療心腦疾病功效的組合物或復(fù)方制劑，可預(yù)期成為治療心腦疾病的藥品品、日化用品和醫(yī)療器械。上述各類(lèi)膠識(shí)常規(guī)0029組合物或者藥品品、日化用品和醫(yī)療器

38、械可以采用多種制劑水凝凝膠劑、涂膜劑、軟膏劑等透皮吸收劑型采用現(xiàn)已公認(rèn)的藥劑學(xué)常而得的各種緩釋、控釋劑型或納米制劑。至今為止，以往文獻(xiàn)中并未發(fā)現(xiàn)有以與本發(fā)明提供的側(cè)異腹胡蜂屬昆蟲(chóng)蜂毒多肽有效部位相同的工藝和的文獻(xiàn)，本發(fā)明所述之用特定孔徑的透析膜純化富集側(cè)異腹胡蜂屬蜂毒多肽有效部位法具有意想不到的效果。并且，迄今為止，中外文獻(xiàn)并無(wú)針對(duì)云南到的側(cè)異腹胡蜂屬蜂毒多肽有效部位進(jìn)行缺血性腦疾病、缺血性心血管疾病活性研究的，更沒(méi)有將該蜂毒多肽有效部位制成 TTS（透皮吸收制劑）用于防治心腦疾病的。本發(fā)明性的將側(cè)異腹胡蜂屬蜂毒多肽有效部位 TTS 制劑預(yù)防和治療缺血性心腦疾病之全面研究尚屬首次。此外，側(cè)異腹

39、胡蜂屬蜂毒透析膜出的有效部位其原料藥及其透皮吸收制劑均具有顯著的抗血栓、抗腦梗、抗血小板、延長(zhǎng)斷頭呼吸時(shí)間、減少腦水腫的功效 ；亦均屬于意想不到的結(jié)果，因而可以預(yù)期進(jìn)一步開(kāi)發(fā)成為治療缺血性心腦疾病類(lèi)的或組合物。由此完成了本發(fā)明。量（MWCO）為 25 千0030本發(fā)明的有益之處在于 ：首次用截留25KDa）的透析膜腦出側(cè)異腹胡蜂屬昆蟲(chóng)蜂毒多肽有效部位，并首次發(fā)現(xiàn)了該有效部位在開(kāi)發(fā)防治心類(lèi)疾病的領(lǐng)域中的潛力 ；對(duì)于開(kāi)發(fā)治療缺血性腦疾病、缺血性心疾病心梗、心偏癱、偏身感覺(jué)血栓、腦血栓、腦梗、急 / 慢性腦卒中，及由腦梗塞損傷帶來(lái)的后遺癥如側(cè)、偏盲、面舌癱、失語(yǔ)、全身癱瘓等的創(chuàng)新提供了新的動(dòng)物之物質(zhì)

40、基礎(chǔ)。本發(fā)明又一特點(diǎn)是 ：根據(jù)側(cè)異腹胡蜂屬昆蟲(chóng)蜂毒多肽有效部位制成的透皮吸收制劑具有起效快、活性廣泛、安全性高的優(yōu)勢(shì)，使得該有效部位許多 TTS 制劑活性優(yōu)于心腦血管臨床一線用藥，具有相當(dāng)廣闊的市場(chǎng)前景。本發(fā)明再一特點(diǎn)是 ：該屬膜翅目昆蟲(chóng)生長(zhǎng)繁殖能力旺盛，在云貴高原廣泛分布，便于養(yǎng)殖，每頭蜂王每年可以孵育百上千只子代，有利于成為的和可持續(xù)開(kāi)發(fā)生物，同時(shí)也有利于貧困山區(qū)農(nóng)民養(yǎng)殖此類(lèi)藥源性動(dòng)物達(dá)到脫貧目的。具有潛在的巨大效益和效益。該原料來(lái)源于天然養(yǎng)殖的胡蜂步驟簡(jiǎn)便，綠色天然，成總科昆蟲(chóng)，其蜂毒來(lái)源數(shù)量、質(zhì)量可控 ；蜂毒多肽有效部位本低，污染小，利于大規(guī)模生產(chǎn)。具體實(shí)施方案0031為了更好地理解本

41、發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面分別以實(shí)施例和藥理實(shí)施例說(shuō)明使用以側(cè)異腹胡蜂屬蜂毒經(jīng)透析膜皮吸收制劑的出的多肽有效部位為主藥制成的水凝膠劑、涂膜劑等透，及其對(duì)膠原 - 腎上腺素合劑誘導(dǎo)體內(nèi)血栓形成的影響（治療喘息時(shí)間的影響）、抗血小給藥和預(yù)防給藥）、對(duì)腦缺氧的腦保護(hù)作用（對(duì)斷頭板作用等藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說(shuō)明該多肽有效部位的及其在防治心腦生化開(kāi)發(fā)領(lǐng)域中的新用途。0032若無(wú)特別說(shuō)明，本發(fā)明的百分比指的是重量百分比。必須說(shuō)明，本發(fā)明的實(shí)施例是1100說(shuō)明書(shū)CN 103655633 A9/19 頁(yè)用于說(shuō)明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。實(shí)施例 1 ：變側(cè)異腹

42、胡蜂蜂毒多肽有效部位及涂膜劑的003300340035開(kāi)發(fā)1.1 變側(cè)異腹胡蜂粗蜂毒的：變側(cè)異腹胡蜂采自云南省盈江縣境內(nèi)，蜂體標(biāo)本據(jù)云南省藥用特種昆蟲(chóng)varia Fabricius地方工程研究中心教授鑒定為 Parapolybia varia（變側(cè)異腹胡蜂）。胡蜂毒裝置 ：使用經(jīng)過(guò)本工程研究中心改裝的副蜂毒，木框，長(zhǎng) 80 公分，寬 50 公分 ；內(nèi)嵌 4 片長(zhǎng) 20 公分 / 寬 33 公分取毒；輸入電壓 11V，輸出自動(dòng)間歇脈動(dòng)電壓胡蜂毒：將采毒器置于蜂巢前，按照常規(guī)采毒規(guī)程，對(duì)該側(cè)異腹胡蜂蜂群職蜂采毒 30 分鐘。打開(kāi)取毒器電源開(kāi)關(guān)，敲擊地面及蜂巢口，吸引變側(cè)異腹胡蜂出來(lái)蜂毒。30 分鐘

43、后，關(guān)閉電源，掃掉不再排毒的變側(cè)異腹胡蜂，收集玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中變側(cè)異腹胡蜂粗蜂毒共計(jì) 176 毫克。十萬(wàn)分之一電子天平稱(chēng)重。合并數(shù)次收集得到的00361.2 透過(guò)透析膜進(jìn)行粗毒的純化 ：0037按照常規(guī)透析膜截留大，使用美國(guó)光譜醫(yī)學(xué)（spectrum）品牌的透析袋，。使用前處理及操作均按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。加即用型素酯膜，截留量為250006 毫升蒸餾水溶解變側(cè)異腹胡蜂蜂毒，然后倒入透析管中，扎緊上口。將裝好的透析管放入餾水的燒杯中，在 4溫度環(huán)境搖床震蕩透析過(guò)夜，并不斷攪拌。12 小時(shí)后取透出液冷凍干燥，G-10 柱脫鹽后，再凍干，即為下一步制劑使用之原料藥。依此法得到變側(cè)異腹胡蜂

44、蜂毒多肽有效部位 131 毫克。酚法檢查，該有效部位中多肽含量為 81.5%。00381.3 變側(cè)異腹胡蜂蜂毒多肽有效部位涂膜劑的：0039制涂膜劑：取甘油 0.25 克、0.1 克吐溫 -80 和變側(cè)異腹胡蜂蜂毒多肽有效部位溶解于 5 毫升蒸餾水中，微加熱震蕩使之溶解。然后與 20 毫升 2%CMC-Na 膠漿攪拌混勻，40保溫，待氣泡消除，便可適用于藥理實(shí)施例中的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。使用給膜劑終濃度為 0.75 毫克 /30 微升。時(shí)，配制成的涂實(shí)施例 2側(cè)異腹胡蜂蜂毒多肽有效部位及水凝膠劑的004000410042蟲(chóng)開(kāi)發(fā)2.1側(cè)異腹胡蜂粗毒的：側(cè)異腹胡蜂采自云南省滄源縣境內(nèi)，蜂體標(biāo)本據(jù)云南省藥用特

45、種昆地方工程研究中心教授鑒定為 Parapolybia indica Saussure。采集胡蜂毒裝置 ：使用經(jīng)過(guò)本工程研究中心改裝的副蜂毒，木框，長(zhǎng) 80 公分，寬 50公分 ；內(nèi)嵌 4 片長(zhǎng) 20 公分/ 寬 33 公分取毒；輸入電壓 10V，輸出自動(dòng)間歇脈動(dòng)電壓 ；采集胡蜂毒：將涂裝的采毒器置于蜂巢前，按照常規(guī)采毒規(guī)程，對(duì)該巢側(cè)異腹胡側(cè)異腹胡蜂蜂蜂群職蜂采毒 30 分鐘。打開(kāi)取毒器電源開(kāi)關(guān)，敲擊地面及蜂巢口，吸引出來(lái)蜂毒。30 分鐘后，關(guān)閉電源，掃掉不再排毒的側(cè)異腹胡蜂，收集板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中側(cè)異腹胡蜂粗蜂毒共計(jì) 221 毫克。十萬(wàn)分之一電子天平稱(chēng)重。合并數(shù)次收集得到的0043

46、2.2 透過(guò)透析膜進(jìn)行粗毒的純化 ：0044按照常規(guī)透析膜截留大，使用美國(guó)光譜醫(yī)學(xué)（spectrum）的透析袋，即用型素酯膜，MWCO 為 25KDa。使用前處理及操作均按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。加 7 毫升蒸餾水溶1111說(shuō)明書(shū)CN 103655633 A10/19 頁(yè)解側(cè)異腹胡蜂粗蜂毒，然后倒入透析管中，扎緊上口。將裝好的透析管放入餾水的燒杯中，在 4溫度環(huán)境搖床震蕩透析過(guò)夜，并不斷攪拌。16 時(shí)后取透出液冷凍干燥，G-10 柱脫鹽后，再凍干，即為下一步制劑使用之原料藥。得到側(cè)異腹胡蜂蜂毒多肽有效部位 167 毫克。酚法檢查，該有效部位中多肽含量為 77.4%。00452.3側(cè)異腹胡蜂蜂毒多肽有效部

47、位水凝膠劑的：0046制水凝膠劑：稱(chēng)取 150 克甘油，放入 500 毫升燒杯中，依次稱(chēng)取甘羥鋁和 EDTA各 1 克，先后溶解于甘油中，攪拌均勻，再加入 25 克 NP-700，混勻，得到 A 液 ；將姆 5.0克溶解 4 個(gè)小時(shí)，加雙蒸水 200 克，得到 B 液 ；將 A、B 混合得到C 液。取酒石酸 1.0 克，加雙蒸水 117.5 克混勻得到D 液。將D 液分次倒入C 中，并攪拌均勻，即得到水凝膠基質(zhì)。根據(jù)藥理實(shí)施例需要的水凝膠劑濃度凝膠劑中加入側(cè)異腹胡蜂蜂毒多肽有效部位，充分?jǐn)嚢杈鶆?。即可用于藥理?shí)施例中的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。使用在腦部或鼻部時(shí)，配制成的水凝膠劑終濃度為 0.75 毫克 /3

48、0 微升。0047實(shí)施例 3 ：庫(kù)側(cè)異腹胡蜂蜂毒多肽有效部位劑的00483.1 庫(kù)側(cè)異腹胡蜂粗毒的：0049庫(kù)側(cè)異腹胡蜂采自云南省勐海境內(nèi)，蜂體標(biāo)本據(jù)云南省藥用特種昆蟲(chóng)開(kāi)bioculata van der，木框，長(zhǎng) 80 公發(fā)地方工程研究中心教授鑒定為Parapolybia indicaVecht。采毒基本裝置使用經(jīng)過(guò)本工程研究中心改裝的副蜂毒分，寬 50 公分 ；內(nèi)嵌 4 片長(zhǎng) 20 公分/ 寬 33 公分取毒；輸入電壓 9V，輸出自動(dòng)間歇脈動(dòng)電壓 ；木框事先以紅色油漆涂成紅色 ；木框上預(yù)先涂抹 20 毫升濃度為 15 毫克 / 毫升的另外一窩庫(kù)側(cè)異腹胡蜂的蜂巢及蜂體提取物揮發(fā)性溶液（：將

49、100 克蜂巢及 80 只職蜂蜂體勻漿磨碎，加入 20 毫升蒸餾水，以乙醚萃取 2 次、每次 20 毫升 ；萃取液減壓蒸干溶劑后，以醋酸乙酯溶解，配制成 15 毫克 / 毫升的提取物揮發(fā)性溶液）庫(kù)側(cè)異腹胡蜂蜂毒前 20 分鐘涂抹最為有效。將該取毒器放置于鋪有大紅色布的地上，略微傾斜 15 度，形成對(duì)蜂巢蜂群的強(qiáng)烈刺激信號(hào)。然后打開(kāi)取毒器電源開(kāi)關(guān)，敲擊地面及蜂巢口，吸引庫(kù)側(cè)異腹胡蜂出來(lái)蜂毒。30 分鐘后，關(guān)閉電源，掃掉不再排毒的庫(kù)側(cè)異腹胡蜂，收集玻璃板上的蜂毒，裝入特制冷凍瓶中庫(kù)側(cè)異腹胡蜂粗蜂毒 181 毫克。十萬(wàn)分之一電子天平稱(chēng)重。合并數(shù)次釆毒，得到00503.2 透過(guò)透析膜進(jìn)行粗毒的純化 ：

50、0051按照常規(guī)透析膜截留大，使用美國(guó)光譜醫(yī)學(xué)（spectrum）的透析袋，即用型素酯膜，截留量為 25KDa。使用前處理及操作均按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。加 8 毫升蒸餾水溶解庫(kù)側(cè)異腹胡蜂蜂毒，然后倒入透析管中，扎緊上口。將裝好的透析管放入蒸餾水的燒杯中，在 4溫度環(huán)境搖床震蕩透析過(guò)夜，并不斷攪拌。17 小時(shí)后取透出液冷凍干燥，G-10 柱脫鹽后，再凍干，即為下一步制劑使用之原料藥。得到庫(kù)側(cè)異腹胡蜂有效部位133 毫克。酚法檢查，該有效部位中多肽含量為 80.8%。00523.3 庫(kù)側(cè)異腹胡蜂蜂毒多肽有效部位劑的：0053制劑：將姆 5 克溶解 4 個(gè)小時(shí)，加雙蒸水 200 克，得到 A 液 ；稱(chēng)取

51、150克甘油，放入 500 毫升燒杯中，依次稱(chēng)取甘羥鋁 1 克、EDTA 各 1 克，先后溶解于甘油中，攪拌均勻，再加入 25 克 NP-700，混勻，得到 B 液 ；將 A、B 混合得到 C 液。取酒石酸 1 克，加雙蒸水 117.5 克混均勻得到D 液。將D 液分次倒入C 中，并攪拌均勻，即得到基質(zhì) E。適量1122說(shuō)明書(shū)CN 103655633 A11/19 頁(yè)的基質(zhì)中加入 3.2 中出的庫(kù)側(cè)異腹胡蜂蜂毒多肽有效部位至藥理實(shí)施例需要量進(jìn)入基質(zhì)中，充分?jǐn)嚢杈鶆?。制成藥理?shí)驗(yàn)所需要的面積要求的終濃度（實(shí)驗(yàn)時(shí)保證1.0 厘米 ×1.0 厘米的劑含量為 0.75 毫克）。于藥用特種昆蟲(chóng)

52、開(kāi)發(fā)地方工程研究中心 GMP 中試車(chē)間用劑成 1.0 厘米 ×1.0 厘米大小塊狀貼于涂布成 5 厘米 ×7 厘米的劑。使用時(shí)剪腦部或鼻部，并用膠布固定好。0054藥理實(shí)施例 1 ：變側(cè)異腹胡蜂蜂毒多肽有效部位涂膜劑對(duì)膠原 - 腎上腺素合劑誘導(dǎo)體內(nèi)血栓形成的保護(hù)作用（預(yù)防給藥）00551.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?：0056通過(guò)觀察對(duì)膠原蛋白 - 腎上腺素誘導(dǎo)的血栓的保護(hù)作用，初步評(píng)價(jià)其抗血栓作用。靜注膠原 - 腎上腺素合劑混合誘導(dǎo)劑后，由于采用勻漿技術(shù)處理膠原蛋白誘導(dǎo)劑，使膠原蛋白易通過(guò)肺循環(huán)流至腦形成血栓，動(dòng)物會(huì)迅速出現(xiàn)半側(cè)肢體偏癱的癥狀一般發(fā)生在 5 分鐘內(nèi)，靜注藥液后，分別偏癱形成的時(shí)間均以 15 分鐘計(jì)算。存活的時(shí)間以及偏癱未恢復(fù)數(shù)，超