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文檔簡介
1、型高效液相色譜儀測定川芎含量檢驗方法驗證方案 文件編號 S-YF-013(01)起 草 人 崔英南 日期 2012年08月26日審 核 人 日期 2012年08月31日批 準 人 李立新 日期 2012年08月31日生效日期 2012年09月01日 驗證項目申請單 文件編號:SMP.QA-YG-001-01再確認項目用高效液相色譜儀測定川芎含量檢驗方法驗證 目的對已進行設(shè)計、選型、安裝、運行及系統(tǒng)適應(yīng)性測試設(shè)備確認的高效液相色譜儀,通過選用生產(chǎn)品種(藥典)川芎進行含量測定,驗證其檢驗方法準確度、精密度、專屬性、線性、范圍、耐用性的正確性,證實該設(shè)備設(shè)計、選型是否符合藥品質(zhì)量標準中含量測定的要求
2、,使檢驗指標具有可控性、科學(xué)性、準確性,使設(shè)備達到設(shè)計要求及規(guī)定的技術(shù)指標,把好質(zhì)量關(guān),使合格產(chǎn)品能按GMP要求進行放行。小組成員組 長: 組 員: 要求完成時間2012年09月09日提出部門:質(zhì)量保證部批準部門:再確認委員會簽字 年 月 日簽字 年 月 日備注驗證項目計劃書 文件編號: SMP.QA-YG-001-02驗證題目用高效液相色譜儀測定川芎含量檢驗方法驗證目的概要對已進行設(shè)計、選型、安裝、運行及系統(tǒng)適應(yīng)性測試設(shè)備確認的高效液相色譜儀,通過選用生產(chǎn)品種(藥典)川芎進行含量測定,驗證其檢驗方法準確度、精密度、專屬性、線性、范圍、耐用性的正確性,證實該設(shè)備設(shè)計、選型是否符合藥品質(zhì)量標準中
3、含量測定的要求,使檢驗指標具有可控性、科學(xué)性、準確性,使設(shè)備達到設(shè)計要求及規(guī)定的技術(shù)指標,把好質(zhì)量關(guān),使合格產(chǎn)品能按GMP要求進行放行。再確認小組成員組 長: 組 員: 驗證方法用高效液相色譜儀測定含量檢驗期待結(jié)果用已確認的設(shè)備對生產(chǎn)品種進行含量測定,驗證檢驗方法的準確度、精密性等符合生產(chǎn)、質(zhì)量、GMP的規(guī)定,符合該設(shè)備的設(shè)計、選型能夠滿足檢驗要求,所采用的方法達到相應(yīng)的檢測要求,達到測得指標的科學(xué)、準確性,已滿足控制產(chǎn)品質(zhì)量的需要。驗證方式同步驗證超過允許值的對應(yīng)措施1. 待系統(tǒng)穩(wěn)定后,重新檢測。2. 必要時,對有關(guān)設(shè)備重新處理和調(diào)整后,再測試,分析檢測結(jié)果以確定不合格原因。3. 若屬于設(shè)備
4、運行方面的原因,必要時報再確認委員會,調(diào)整設(shè)備運行參數(shù)。驗證實施時間2012年09月01日小組負責(zé)人 2012年08月31日起草責(zé)任者起草時間 2012年08月26日 審核責(zé)任者審核時間2012年08月31日批準責(zé)任者批準時間2012年08月31日驗證方案審批表吉 SMP.QA-YG-001-03再確認方案名稱用高效液相色譜儀測定川芎含量檢驗方法驗證再確認方案編號S-YF-013(01)起草人崔英南 2012年08月26日審核人所在部門簽字審核意見日 期質(zhì)量管理部 年 月 日生產(chǎn)技術(shù)部 年 月 日設(shè)備動力部 年 月 日飲片車間 年 月 日供銷部 年 月 日化驗室 年 月 日 年 月 日 年 月
5、 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日批 準 人日 期 年 月 日批準意見同意執(zhí)行日期 年 月 日目 錄1再確認目的2再確認范圍3再確認責(zé)任4內(nèi)容4.1 概述4.2再確認內(nèi)容再確認小組 預(yù)確認 安裝確認 運行確認 性能確認 結(jié)果分析與評價4.2.7 再確認周期文件名稱用高效液相色譜儀測定川芎含量檢驗方法驗證文件編號S-YF-013-(01)起 草 人崔英南起草日期2012年08月26日審 核 人審核日期 年 月 日批 準 人批準日期 年 月 日執(zhí)行日期 年 月 日頒發(fā)部門質(zhì)量管理部版 本 號01分發(fā)號分發(fā)部門質(zhì)管化驗生產(chǎn)車間辦公財務(wù)供銷設(shè)備分發(fā)數(shù)量21110011目的
6、確認經(jīng)設(shè)備確認高效液相,按藥典檢驗方法測定生產(chǎn)品種含量,驗證其檢驗結(jié)果科學(xué)性、準確性、精密性等,滿足檢驗結(jié)果正確性需要,有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。提供必要的文件以證實本設(shè)備的操作與所預(yù)期的完全一致。根據(jù)本方案的驗證,確認按檢驗操作規(guī)程操作,能有效的保持本設(shè)備于確認狀態(tài)下,能穩(wěn)定地、恒定地達成其所預(yù)期的功能。范圍質(zhì)量標準、檢驗操作規(guī)程文件的匯集。驗證設(shè)備用于含量測定檢驗方法的準確性在標準范圍內(nèi)驗證設(shè)備用于含量測定檢驗方法的精密度可靠性驗證設(shè)備用于含量測定檢驗方法,在設(shè)計的范圍內(nèi),測試結(jié)果與供試品中被測物嘗試直接呈正比關(guān)系的程度。驗證設(shè)備用于含量測定檢驗方法具有專屬性。驗證設(shè)備用于含量測定檢驗方法在達到一
7、定精密度、準確度和線性時,其測定值高低限在可控范圍內(nèi)。驗證設(shè)備用于含量測定檢驗方法的耐用性。責(zé)任質(zhì)量管理部負責(zé)驗證方案的起草,申請審批,驗證過程的監(jiān)督、資料的存檔,再確認方案的執(zhí)行及再確認結(jié)果的評估?;炇邑撠?zé)實驗的操作,原始記錄、報告的填寫。驗證小組負責(zé)驗證報告的審核。內(nèi)容1 概述:本設(shè)備由P3000高壓輸液泵和UV3000可變波長紫外/可見分光檢測器組成。P3000高壓輸液泵是以CPLD技術(shù)為核心,由單片機控制的高精密輸液泵系統(tǒng)。它基于全數(shù)字的頻率發(fā)生系統(tǒng)、先進的馬達驅(qū)動系統(tǒng)及友好的人機顯示頁面似的該設(shè)備的操作及控制很方便。先進的泵頭及單項閥設(shè)計思路,融匯了當(dāng)今世界上最先進的經(jīng)驗,使得用戶
8、在各種使用條件下都可以保證輸液的精度及重復(fù)性指標。UV3000紫外/可見波長檢測器是完整的高效液相色譜儀的一個重要的組成部分。該檢測器的設(shè)計以當(dāng)今最先進的技術(shù)為先導(dǎo),通過數(shù)字化的數(shù)據(jù)處理和控制,其基線噪聲和漂移降低到一個新的極限。由于采用了數(shù)字量輸出功能,該檢測器可以與計算機直接通過串行口相連而不需要任何數(shù)據(jù)采集單元。該設(shè)備已經(jīng)設(shè)計、安裝、運行、性能確認,并經(jīng)過計量校驗,在有效期范圍內(nèi)。通過該設(shè)備用于生產(chǎn)品種川芎中阿魏酸的含量測定,驗證該設(shè)備的準確性、精密性、專屬性、線性、范圍、及耐用性是否符合要求。2驗證內(nèi)容2.1驗證小組:由廠驗證領(lǐng)導(dǎo)小組安排,成立P3000/U3000高效液相色譜儀驗證小
9、組。組長: 張杰組員: 小組職務(wù)姓名所在部門職務(wù)組員設(shè)備動力部設(shè)備管理員組員化驗室主任組員質(zhì)量管理部質(zhì)量監(jiān)督員組員化驗室化驗員2.2 預(yù)確認設(shè)備基本情況.1設(shè)備制造商及零件供應(yīng)商資料設(shè)備名稱:高效液相色譜儀編 號:021型 號:制 造 商:地 址:電 話:傳 真:聯(lián) 絡(luò) 人: 2.2.2設(shè)備的檔案資料文件名稱存放地點高效液相色譜儀質(zhì)量管理部一份產(chǎn)品保修單質(zhì)量管理部一份使用證明書質(zhì)量管理部一份合格證質(zhì)量管理部一份設(shè)備開箱驗收單質(zhì)量管理部一份設(shè)備安裝調(diào)試驗收單質(zhì)量管理部一份色譜工作站質(zhì)量管理部一份綜合性評價結(jié)果上述設(shè)備檔案材料符合GMP和生產(chǎn)工藝要求。檢查人檢查日期 年 月 日復(fù)核人復(fù)核日期年 月
10、 日2.3該設(shè)備是否滿足GMP及現(xiàn)行生產(chǎn)工藝要求的確認2.3.1檢查并確認設(shè)備組成的單體結(jié)構(gòu)應(yīng)完整,并且各單體結(jié)構(gòu)外觀應(yīng)無缺陷性損壞。設(shè)備單體結(jié)構(gòu)名稱有無缺陷損壞可變波長紫外/可見分光檢測器無缺陷損壞高壓輸液泵無缺陷損壞綜合性評價結(jié)果設(shè)備組成的單體結(jié)構(gòu)完整,并且各單體結(jié)構(gòu)外觀無缺陷性損壞。檢查人檢查日期年 月 日復(fù)核人復(fù)核日期年 月 日2.3.2檢查設(shè)備所有材質(zhì)制造應(yīng)符合生產(chǎn)工藝要求單體設(shè)備名稱要求材質(zhì)實際材質(zhì)可變波長紫外/可見分光檢測器不與藥物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)不銹鋼高壓輸液泵不與藥物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)不銹鋼綜合性評價結(jié)果設(shè)備所有材質(zhì)制造不與藥物發(fā)生化學(xué)反應(yīng),符合藥品檢驗要求。檢查人檢查日期年 月 日復(fù)
11、核人復(fù)核日期年 月 日2.4 設(shè)備確認該設(shè)備已經(jīng)設(shè)備的設(shè)計、安裝、運行、性能再確認,同時該設(shè)備經(jīng)計量校驗確認,并在有效期范圍內(nèi)。2.5 人員、環(huán)境、試藥的確認化驗員已經(jīng)均經(jīng)過培訓(xùn),熟悉方法及使用的儀器,環(huán)境濕度為56%,溫度為20均在合理范圍內(nèi)。對照品從國家生物檢定研究院購置,批號為 有效期為其它試劑為色譜純,水為純化水均符合試驗要求。3 含量測定3.1準確度驗證準確度系指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度,一般用回收率(%)表示,準確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測試。3.1.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-1%醋酸溶液(30:70)為流動相;檢測波長為32
12、1nm。理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于4000。流速:1.0ml/min;色譜柱規(guī)格:4.6×250mm;粒度:5m;進樣量:10l。對照品溶液的制備 取阿魏酸對照品適量,精密稱定,置棕色量瓶中,加70%甲醇制成每1ml含20g的溶液,即得。供試品溶液的制備 取本品粉末(過四號篩)約0. 5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,稱定重量,加熱回流30分鐘,放冷,再稱定重量,用70%甲醇補足減失的重量,搖勻,靜置,取上清液,濾過,取續(xù)濾液,即得。測定法 可用上述已知純度的對照品做加樣回收測定,即于已知被測成分對照品,在規(guī)定范圍內(nèi),取同一濃度的供試品進行測定。分
13、別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10l,注入液相色譜儀,測定。同一濃度,用6個測定結(jié)果進行評價,應(yīng)報告已知加入量的回收率(%),或測定結(jié)果平均值與真實值之差及其相對標準偏差(RSD%)。用實測值與供試品中含有量之差,除以加入對照品量計算回收率。公式:回收率%=(C-A)/B*100%式中A為供試品所含被測成分量;B為加入對照量;C為實測值。實測值公式:平均值X=Xi/n平均偏差=Xi-X/n平均相對偏差=平均偏差/平均值附圖:樣品與對照品峰面積見圖譜。加樣回收率考察取本品粉末6份,精密稱定,按照供試品方法制備,得到供試品溶液各50ml,各加入10ml對照品溶液,搖勻,得到待測溶液,濾過,進樣
14、,計算峰面積,得到數(shù)據(jù)如下表:注意:在加樣回收試驗中須注意對照品的加入量與供試品中被測成分含有量之和必須在標準曲線性范圍之內(nèi);加入的對照品的量要適當(dāng),過小則引起較大的相對誤差,過大則干擾成分相對減少,真實性差。表1 含量測定川芎加樣回收率試驗表序號樣品稱量(g)樣品阿魏酸的含量(mg)對照品加入量(mg)實測值(mg)回收率(%)回收率的平均值()RSD(%)10.50140.55150.20.7534100.95100.080.891320.52260.67940.20.878699.6030.51730.62080.20.819399.2540.52660.63190.20.8348101
15、.4550.53250.69230.20.889799.7060.51480.61780.20.816999.55檢測人: 檢測日期:結(jié)果評價:檢查人: 復(fù)核人: 日期: 年 月 日3.2精密度驗證精密度系指在規(guī)定的測試條件下,同一個均勻供試品,經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差,標準偏差或相對標準偏差表示。同一濃度,用6個測定結(jié)果進行評價。精密度包含重復(fù)性,中間精密度和重現(xiàn)性,其中重現(xiàn)性是在不同化驗室不同時間進行實驗,查看實驗結(jié)果有沒有重現(xiàn)性,本公司只一個實驗室此項略。3.2.1重復(fù)性(設(shè)操作人員A)在相同操作條件下,由同一個分析人員在較短的間隔時間內(nèi)測定所得結(jié)果的精密度
16、稱為重復(fù)性;3.2.1.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-1%醋酸溶液(30:70)為流動相;檢測波長為321nm。理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于4000。流速:1.0ml/min;色譜柱規(guī)格:4.6×250mm;粒度:5m;進樣量:10l。對照品溶液的制備 取阿魏酸對照品適量,精密稱定,置棕色量瓶中,加70%甲醇制成每1ml含20g的溶液,即得。供試品溶液的制備 取本品粉末(過四號篩)約0. 5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,稱定重量,加熱回流30分鐘,放冷,再稱定重量,用70%甲醇補足減失的重量,搖勻,靜置,取上清
17、液,濾過,取續(xù)濾液,即得。3.2.1.4含量測定3.2.1.5計算 式中f為對照品的濃度除以對照品峰面積得到的值的平均值;AT為對照品峰面積;單位v*sec ;n為供試品的稀釋倍數(shù);WT為供試品的稱量;單位g。3.2.1.5將計算的結(jié)果填入下表表2 含量測定阿魏酸重復(fù)性試驗表序號樣品稱量(g)含量(g/g)含量的平均值(g/g)RSD(%)10.50140.100.121670.619120.52260.1330.51730.1240.52660.1250.53250.1360.51480.12檢測人: 檢測日期:結(jié)果評價:檢查人: 復(fù)核人: 日期: 年 月 日3.2.2中間精密度(換一時間,
18、換一操作人員,設(shè)操作人員為B)在同一個實驗室,不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果之間的精密度稱為中間精密度;同一濃度,用6個測定結(jié)果進行評價。3.2.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-1%醋酸溶液(30:70)為流動相;檢測波長為321nm。理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于4000。流速:1.0ml/min;色譜柱規(guī)格:4.6×250mm;粒度:5m;進樣量:10l。3.2.2.2對照品溶液的制備 取阿魏酸對照品適量,精密稱定,置棕色量瓶中,加70%甲醇制成每1ml含20g的溶液,即得。3.2.2.3供試品溶液的制備 取本品粉末(過四號篩)約
19、0. 5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,稱定重量,加熱回流30分鐘,放冷,再稱定重量,用70%甲醇補足減失的重量,搖勻,靜置,取上清液,濾過,取續(xù)濾液,即得。3.2.2.4含量測定3.2.2.5計算公式:式中f為對照品的濃度除以對照品峰面積得到的值的平均值;AT為對照品峰面積;單位v*sec ;n為供試品的稀釋倍數(shù);WT為供試品的稱量;單位g。表3: 含量測定阿魏酸甲中間精密度試驗表序號樣品稱量(g)含量(g/g)含量的平均值(g/g)RSD(%)操作員A10.50140.11980.12000.007420.50140.120330.50140.119640.
20、50140.121150.50140.118660.50140.12070.12510.0255操作員B10.51730.120620.51730.125930.51730.123740.51730.130150.51730.123860.51730.1263檢測人: 檢測日期:結(jié)果評價:檢查人: 復(fù)核人: 日期: 年 月 日3.3線性及線性范圍線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi),測試結(jié)果與供試品中被測物嘗試直接呈正比關(guān)系的程度。應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系??捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋,或分別精密稱樣,制備一系列供試品的方法進行測定,至少制備5個濃度的供應(yīng)品,以測得的響應(yīng)信號作為被測物嘗試的函數(shù)作圖,觀察是否
21、呈線性,再用最小二乘法進行線性回歸。必要時,響應(yīng)信號可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換,再進行線性回歸計算。數(shù)據(jù)要求:應(yīng)列出回歸方程,相關(guān)系數(shù)和線性圖。范圍系指能達到一定精密度、準確度和線性、測試方法適用的高低限嘗試或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準確度、精密度結(jié)果及要求確定。3.3.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-1%醋酸溶液(30:70)為流動相;檢測波長為321nm。理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于4000。流速:1.0ml/min;色譜柱規(guī)格:4.6×250mm;粒度:5m;進樣量:10l。對照品溶液的制備 取阿魏酸對照品適量,精密稱定,置棕色量瓶
22、中,加70%甲醇制成每1ml含20g的溶液,即得。供試品溶液的制備 取本品粉末(過四號篩)約0. 5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,稱定重量,加熱回流30分鐘,放冷,再稱定重量,用70%甲醇補足減失的重量,搖勻,靜置,取上清液,濾過,取續(xù)濾液,即得。3.3.4含量測定3.3.5計算公式:式中f為對照品的濃度除以對照品峰面積得到的值的平均值;AT為對照品峰面積;單位v*sec ;n為供試品的稀釋倍數(shù);WT為供試品的稱量;單位g。表4 川芎阿魏酸不同濃度的峰面積濃度(mg/ml)0.0050.010.030.050.07峰面積(v*sec)回歸方程y=2943320
23、0x相關(guān)系數(shù)R2=0.9999檢測人: 檢測日期:結(jié)果評價:檢查人: 復(fù)核人: 日期: 年 月 日3.4耐用性耐用性系指在測定條件有小的變動時,測定結(jié)果不受影響的承受程度,為使方法用于常規(guī)檢驗提供依據(jù)。開始研究分析方法時,就應(yīng)考慮其耐用性。液相色譜法中典型的變動因素有:不同廠牌或批號的色譜柱、固定相,不同類型的擔(dān)體,柱溫,進樣口和檢測器溫度等。經(jīng)試驗,應(yīng)說明小的變動能否通過設(shè)計的系統(tǒng)適用性試驗,以確保方法有效。本試驗以流動相的組成比例、同一規(guī)格的色譜柱為變動因素,得出測定結(jié)果不受影響的程度,為使方法用于常規(guī)檢驗提供依據(jù)。3.4.1對照品溶液的制備 取阿魏酸對照品適量,精密稱定,置棕色量瓶中,加
24、70%甲醇制成每1ml含20g的溶液,即得。3.4.2供試品溶液的制備 取本品粉末(過四號篩)約0. 5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,稱定重量,加熱回流30分鐘,放冷,再稱定重量,用70%甲醇補足減失的重量,搖勻,靜置,取上清液,濾過,取續(xù)濾液,即得。3.4.3色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;1、以甲醇-1%醋酸溶液(30:70)為流動相;檢測波長為321nm。理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于4000。流速:1.0ml/min;色譜柱規(guī)格:4.6×250mm;粒度:5m;進樣量:10l。2、以甲醇-1%醋酸溶液(35:65)為
25、流動相;檢測波長為321nm。色譜柱規(guī)格:4.6×250mm;粒度:5m;進樣量:10l。3.4.4測定將數(shù)據(jù)整理,填入下表。表4 含量測定耐用性試驗表保留時間分離度理論板數(shù)色譜條件1色譜條件2檢測人: 檢測日期:結(jié)果評價:檢查人: 復(fù)核人: 日期: 年 月 日3.5專屬性專屬性是指在其他成分可能存在下,采用的方法能正確測定出被測 的特性,以不含被測成分的供試品(除去含待測成分藥材或不含待測成分的模擬復(fù)方)試驗說明方法的專屬性。色譜法,光譜法等應(yīng)附代表性圖譜,并標明相關(guān)成分在圖中的位置,色譜法中的分離度應(yīng)符合要求。必要時可采用二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測,進行峰純度檢查。3.5.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-1%醋酸溶液(30:70)為流動相;檢測波長為321nm。理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于4000。流速:1.0ml/min;色譜柱規(guī)
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