分析方法驗(yàn)證與確認(rèn)管理規(guī)程

1、3 3 定義檢驗(yàn)方法驗(yàn)證：證明采用的方法適用于相應(yīng)檢測要求。檢驗(yàn)方法確認(rèn)：證明使用法定方法在目前實(shí)驗(yàn)室條件下是否能獲得可靠結(jié)果，是否適 用于相應(yīng)的檢測工作。在本質(zhì)上和驗(yàn)證一樣，但不一定是驗(yàn)證項(xiàng)目的全部。藥典方法：經(jīng)過國家藥監(jiān)部門批準(zhǔn)的藥典收載的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)方法 法定方法：法定方法包括藥典方法、國標(biāo)方法等。準(zhǔn)確度：是指用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率表示 精密度：是指在規(guī)定的測試條件下同一個(gè)均勻供試品經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的 接近程度。重復(fù)性：在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性。 中間精密度：在同一個(gè)試驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)

2、備測定結(jié)果之間的 精密度稱為中間精密度。重現(xiàn)性：在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測定結(jié)果之間的精密度稱為重現(xiàn)性。 專屬性：是指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能 正確測定出被測物質(zhì)的特性。檢測限：是指供試品中被測物能被檢出的最低量。 定量限：是指供試品中被測物能被定量測定的最低量。 線性：是指在設(shè)計(jì)范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接成正比關(guān)系的程度。 范圍：是指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的高低濃度或量的區(qū)間 耐用性：是指在測定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度。4 4 職責(zé)標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證崗提升現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)工作時(shí)，對(duì)研究后確定的標(biāo)準(zhǔn)草案進(jìn)行檢驗(yàn)方法

3、驗(yàn)證工作，以確保 檢驗(yàn)方法的適用性、科學(xué)性。對(duì)技術(shù)部移交的新品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案進(jìn)行確認(rèn)，以確保檢驗(yàn)方法適用性、科學(xué)性。 對(duì)技術(shù)部移交的新品應(yīng)研究建立設(shè)備清潔驗(yàn)證殘留物檢驗(yàn)方法，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。 理化檢驗(yàn)崗對(duì)首次采用的藥典或國標(biāo)檢驗(yàn)方法，進(jìn)行檢驗(yàn)方法確認(rèn)工作，以證明檢驗(yàn)方法的適用 性，確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證崗研究后確定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案中變更后的檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)。微生物崗 凡有國家檢測機(jī)構(gòu)對(duì)成品或中間體微生物限度檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)過的，則該方法可直 接用于檢驗(yàn)，否則需要按照藥典附錄要求進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。建立產(chǎn)品的微生物限度檢查時(shí)，應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證和控制菌 檢查方法的驗(yàn)證，

4、以確認(rèn)所采用的方法適合于細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)和控制菌的測定。5 5 規(guī)程內(nèi)容檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的基本原則 用于檢驗(yàn)的分析方法符合下列情形之一但不限于以下情況的， 應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行 驗(yàn)證：新建的檢驗(yàn)方法， 包括新建的產(chǎn)品檢驗(yàn)方法和設(shè)備清潔驗(yàn)證殘留物檢驗(yàn)方法等。檢驗(yàn)方法需變更的。采用中華人民共和國藥典及其他法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的檢驗(yàn)方法。 法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法。將法定方法用于測定新藥，或?qū)⒛骋黄贩N的法定測定方法用于另一品種。.6.6 檢驗(yàn)用設(shè)備主要部分改變。藥物生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更。檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響到檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，方法應(yīng)重新驗(yàn)證。 需要驗(yàn)證的分析項(xiàng)目有： 理化檢驗(yàn)方法：鑒別試驗(yàn)、雜

5、質(zhì)定量檢查或限度檢查、原料藥或制劑中有效成分含量 測定，以及制劑中其他成分（如防腐劑等）的測定。藥品溶出度、釋放度等檢查中，其 溶出量等的測試方法也應(yīng)做必要的驗(yàn)證。微生物檢驗(yàn)方法：細(xì)菌、霉菌和酵母菌的定量檢查，控制菌的定性檢查。檢驗(yàn)方法驗(yàn)證內(nèi)容有：理化檢驗(yàn)方法：準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）專屬性、檢測 限、定量限、線性、范圍和耐用性。視具體方法擬定方案。 5.25.2 項(xiàng)下列出的分析項(xiàng)目和 相應(yīng)的驗(yàn)證內(nèi)容可供參考。微生物限度檢驗(yàn)方法： 微生物限度檢驗(yàn)方法： 細(xì)菌、 霉菌和酵母菌數(shù)的計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證（菌液回收率） ，控制菌的專屬性的驗(yàn)證。檢驗(yàn)方法應(yīng)有詳細(xì)說明，并提供足夠的信息，能

6、使經(jīng)過正確培訓(xùn)的檢驗(yàn)人員可靠的進(jìn) 行檢驗(yàn)。理化檢驗(yàn)方法要說明的內(nèi)容至少應(yīng)包括檢測條件（如色譜檢測器）、所需試劑、對(duì)照品、結(jié)果計(jì)算的公式和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。5 5微生物檢驗(yàn)方法要說明的內(nèi)容至少應(yīng)包括使用的菌種、菌液含量、所需培養(yǎng)基、培 養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、計(jì)數(shù)方法、結(jié)果計(jì)算的公式。檢驗(yàn)方法驗(yàn)證應(yīng)該依據(jù)驗(yàn)證方案執(zhí)行。 方案應(yīng)該包括所有項(xiàng)目的檢測方法和接受標(biāo)準(zhǔn)。 驗(yàn)證結(jié)果應(yīng)如實(shí)填寫，準(zhǔn)確完整記錄在驗(yàn)證報(bào)告中。5.65.6 理化檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的分析項(xiàng)目項(xiàng)目內(nèi)容鑒別限量檢杳含量測定及溶出量測定定量限度準(zhǔn)確性一+ +一+ +重復(fù)性一+ +一+ +中間精密度一+ +一+ +重現(xiàn)性+ + + + +專屬性+ + +

7、 + +檢測限一一+ +一定量限一+ +一一線性一+ +一+ +范圍一+ +一+ +耐用性+ + + + +注：已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需要驗(yàn)證中間精密度。2重現(xiàn)性只有在該分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)做。3如有一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充。以上表中列舉了在不同類型的分析方法驗(yàn)證中被認(rèn)為是最重要的項(xiàng)目，“一”表示通常不需要驗(yàn)證的項(xiàng)目，“ + +”表示通常需要驗(yàn)證的項(xiàng)目，如遇特殊情況，仍應(yīng)根據(jù)具體 分析對(duì)象和情況而定。檢驗(yàn)方法確認(rèn)的基本原則法定方法中的鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)定量檢查或限度檢查、原料藥或制劑中有效成分含量測定需要酌情考慮進(jìn)行方法確認(rèn)，其余方法不需要進(jìn)行確認(rèn)。從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的

8、檢驗(yàn)方法轉(zhuǎn)移，可采用對(duì)照試驗(yàn)法，即取同一批樣品, 按此法在兩實(shí)驗(yàn)室分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將結(jié)果進(jìn)行比較。檢驗(yàn)方法確認(rèn)內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）專屬性、 定量限。視具體方法擬定方案。 5.85.8 項(xiàng)下列出的分析項(xiàng)目和相應(yīng)的確認(rèn)內(nèi)容可供參考 檢驗(yàn)方法確認(rèn)應(yīng)依據(jù)確認(rèn)方案執(zhí)行。方案應(yīng)該包括所有項(xiàng)目的檢測方法和接受標(biāo)準(zhǔn)。 確認(rèn)結(jié)果應(yīng)如實(shí)填寫，準(zhǔn)確完整記錄在確認(rèn)報(bào)告中。理化檢驗(yàn)方法確認(rèn)的分析項(xiàng)目原料藥理化檢驗(yàn)方法確認(rèn)的項(xiàng)目項(xiàng)目內(nèi)容鑒別有關(guān)物質(zhì)檢杳含量測定滴定法HPLCHPLC準(zhǔn)確度一一一一精密度一視情況而定視情況而定視情況而定專屬性視情況而定+ +一視情況而定 1 1檢測限一一一一

9、定量限一+ +一一制劑理化檢驗(yàn)方法確認(rèn)的項(xiàng)目項(xiàng)目內(nèi)容鑒別檢杳（不溶性微粒檢杳、 含量均勻度、溶出度檢 查）雜質(zhì)（有關(guān)物質(zhì)、殘留溶劑）含量測定準(zhǔn)確度一視情況而定視情況而定視情況而定精密度一+ + + +專屬性+ + + + +檢測限一一一一定量限一視情況而定+ +一注：以上表中列舉了在不同類型的檢驗(yàn)方法確認(rèn)中被認(rèn)為是最重要的項(xiàng)目，“一”表示通常不需要確認(rèn)的項(xiàng)目；“ + +”表示通常需要確認(rèn)的項(xiàng)目；如遇特殊情況，仍應(yīng)根據(jù)具體 分析對(duì)象和情況而定。5.95.9 理化檢驗(yàn)方法驗(yàn)證各分析項(xiàng)目的內(nèi)容描述準(zhǔn)確度：用于定量測定的分析方法均需做準(zhǔn)確度驗(yàn)證。準(zhǔn)確度一般用回收率表示，應(yīng)在規(guī)定 的范圍內(nèi)測試。.1.1

10、 可用已知純度的做加樣回收測定，即于已知被測成分含量的供試品中再加入一定量 的已知純度的被測成分對(duì)照品，依法測定。用實(shí)際值與供試品中含有量之差，除以加入 對(duì)照品量計(jì)算回收率。CA回收率%100%B公式中：A A 表示供試品所含被測成分量，一般是采用重復(fù)性結(jié)果的均值。B B 表示加入對(duì)照品量C C表示實(shí)測值.2.2 數(shù)據(jù)要求：a a） 在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6 6 個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，加入的的量 與所取供試品含量之比控制在 1 1： 1 1 左右；b b） 或設(shè)計(jì) 3 3 不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備 3 3 份供試品溶液進(jìn)行測定，用 9 9 個(gè)測 定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，一般中間濃度加入

11、量與所取供試品含量之比控制在1 1： 1 1 左右。.3.3 記錄結(jié)果：應(yīng)報(bào)告供試品取樣量、供試品中含有量、對(duì)照品加入量、測定結(jié)果和回收率（% %計(jì)算值，以及回收率（% %的相對(duì)平均偏差（RSD%RSD%。精密度：.1.1 精密度包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性。一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 來表示。.2.2 重復(fù)性：在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用 6 6 個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或者設(shè) 計(jì) 3 3 不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備 3 3 份供試品溶液進(jìn)行測定，用 9 9 個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評(píng) 價(jià)。.3.3 中間精密度：是同一實(shí)驗(yàn)室的變化（通常是不同日期，不同分析人員、不同的設(shè)備 等），測定結(jié)

12、果之間的精密度。如果進(jìn)行重現(xiàn)性評(píng)價(jià)，中間精密度就不需要了。.4.4 重現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室、不同分析人員檢驗(yàn)相同產(chǎn)品的結(jié)果應(yīng)平行，樣品批數(shù)至少是 3 3批。專屬性：.1.1 應(yīng)該在鑒別試驗(yàn)，限度檢查、含量測定等方法均應(yīng)考察其專屬性。.2.2 鑒別試驗(yàn)：以不含被測成分的供試品（除去含待測成分藥材或不含待測成分的模擬方）,不得干擾測定，以說明方法的專屬性。應(yīng)附加相應(yīng)的代表性圖像或圖譜。.3.3 含量測定和限量檢查： 以不含被測成分的供試品 （除去含待測成分藥材或不含待測 成分的模擬方） ，不得干擾測定，以說明方法的專屬性。色譜法、光譜法等應(yīng)附代表性 圖譜，并表明相關(guān)成分在圖中的位置，色譜中的分離度應(yīng)符

13、合要求。必要時(shí)可采用二極 管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進(jìn)行峰純度檢查。檢測限：確定檢測限的常用方法如下：.1.1 直觀法：用一系列已知濃度的供試品進(jìn)行分析，試驗(yàn)出能被可靠的檢測的最低濃度 或量。.2.2 信噪比法：僅適用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度供試品的信號(hào)與 空白樣品測出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比 為 3 3： 1 1 或 2 2： 1 1 時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率：檢測限度 DL色3-S其中 S S:校正曲線的斜率，S S 值是被分析物的校正曲線的斜率。c:響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差，6值可根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)差：通過分析

14、1111 份空白樣品的分析，測出分析背景響應(yīng)值的大小，然后計(jì)算這些響應(yīng) 值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。.3.3 數(shù)據(jù)要求：應(yīng)附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結(jié)果。定量限：確定檢測限的常用方法如下：.1.1 信噪比法：僅適用于能顯示基線噪音的分析方法。一般以信噪比為1010： 1 1 時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限。QL 1根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率：定量限度S。S:S:校正曲線的斜率:響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差S S 值是被分析物的校正曲線的斜率。值可根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)差：通過分析 1111 份空白樣品的分析，測出分析背景響 應(yīng)值的大小，然后計(jì)算這些響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。.2.2 數(shù)據(jù)要求：應(yīng)附測試圖譜，說明測試過程和定量限結(jié)

15、果。線性：.1.1 可用一貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試品的方法進(jìn)行測定， 至少制備 6 6 個(gè)濃度的供試品。.2.2 以測得的相應(yīng)信號(hào)作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法 進(jìn)行線性回歸。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。范圍： 應(yīng)依據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果及要求確定。無特殊要求 時(shí)，通常采用以下標(biāo)準(zhǔn)。.1.1 原料藥和制劑的含量測定，范圍應(yīng)為測試濃度的80%-120%80%-120%.2.2 制劑含量均勻度檢查，范圍應(yīng)為測試濃度 70%70%-130%130%根據(jù)劑型特點(diǎn)，如氣霧劑和噴 霧劑，范圍可適當(dāng)放寬。.3.3 溶出

16、度應(yīng)為測試或釋放度的溶出量測定，范圍應(yīng)為限度的20%20%；如果規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的 20%20%至上限的 +20%+20%。.4.4 如果含量測定與雜質(zhì)檢查同時(shí)測定，用面積歸一化法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的 20%20%至含量限度（或上限）的 +20%+20%。.5.5 雜質(zhì)測定，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)測，擬定出規(guī)定的限度的+20%+20%。.6.6 對(duì)于有毒的、具特殊功效或藥理作用的成分，其范圍應(yīng)大于限定含量的區(qū)間。耐用性： 試驗(yàn)說明小的變動(dòng)能否通過設(shè)計(jì)的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，以確保方法有效。如果測試條 件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明。.1.1 液相色譜法中變動(dòng)因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品

17、提取次數(shù)、時(shí)間，流動(dòng)相的組成比例或 pHpH 值，不同廠牌或批號(hào)的同類型色譜柱，柱溫，流速及檢測波長等。.2.2 氣相色譜法變動(dòng)因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時(shí)間，不同廠牌或批 號(hào)的同類型色譜柱，柱溫，固定相，不同類型的擔(dān)體，柱溫，進(jìn)樣口和檢測器溫度等。.3.3 薄層色譜的變動(dòng)因素有：不同廠牌的薄層板，點(diǎn)樣方式及薄層展開時(shí)溫度及相對(duì)濕 度等。5.105.10 微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的內(nèi)容 計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證：細(xì)菌、霉菌和酵母菌的定量檢測各試驗(yàn)組制備方法：.1.1 試驗(yàn)組：a a）平皿法計(jì)數(shù)時(shí)，取試驗(yàn)可能用的最低稀釋級(jí)供試液 1ml1ml 和 5050100cfu100cfu 試驗(yàn)菌, 按平皿

18、法測定其菌數(shù)。b b）薄膜過濾法計(jì)數(shù)時(shí)，取規(guī)定量試驗(yàn)可能用的最低稀釋級(jí)供試液，過濾，沖洗， 在最后一次的沖洗液中加入 5050100cfu100cfu 試驗(yàn)菌，過濾，按薄膜過濾法測定其菌數(shù)。 .2.2 菌液組：測定所加的試驗(yàn)菌數(shù)，菌液含量在 5050100cfu100cfu。.3.3 供試品對(duì)照組：取規(guī)定量供試液，按菌落計(jì)數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)，供試品對(duì) 照組含菌量不能超過 1010 cfu/mlcfu/ml。.4.4 稀釋劑對(duì)照組：若供試液制備需要分散、乳化、中和、離心或薄膜過濾等特殊處理 時(shí)，應(yīng)增加稀釋劑對(duì)照組，以考察供試液制備過程中微生物受影響的程度。試驗(yàn)時(shí)，可 用相應(yīng)的稀釋液替代供試

19、品，加入試驗(yàn)菌，使最終菌濃度為每 1ml1ml 供試液含 5050100cfu100cfu， 按試驗(yàn)組的供試液制備方法和菌落計(jì)數(shù)方法測定其菌數(shù)。計(jì)數(shù)方法檢測：計(jì)數(shù)方法包括平皿法、薄膜過濾法、培養(yǎng)基稀釋法及中和法。驗(yàn)證試 驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3 3 次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。結(jié)果判斷：在 3 3 次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對(duì)照組的菌回收率（稀釋劑對(duì)照組的平 均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）應(yīng)均不低于70%70%若試驗(yàn)組的菌回收率（試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)的值占菌液組的平均菌落數(shù)的百分 率）均不低于70%70%照該供試液制備方法和計(jì)數(shù)法測定供試品的細(xì)

20、菌、霉菌及酵母菌數(shù),驗(yàn)證通過；若任一次試驗(yàn)中試驗(yàn)組的菌回收率低于 70%70%應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉 淀法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新 進(jìn)行方法驗(yàn)證。報(bào)告：供試品制備方法、菌液組平均菌落數(shù)、供試品中菌液加入量、試驗(yàn)組的平均菌 落數(shù)、供試品對(duì)照組平均菌落數(shù)、測定結(jié)果和菌液回收率（% %計(jì)。5.115.11 控制菌檢查方法的驗(yàn)證：依各品種項(xiàng)下微生物限度標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應(yīng)驗(yàn)證的菌株。驗(yàn)證大腸菌 群檢查法時(shí)，應(yīng)采用大腸埃希菌作為驗(yàn)證菌株。驗(yàn)證方法：.1.1 取規(guī)定量供試液及 1010100cfu100cfu 試驗(yàn)菌加入增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查法進(jìn)行 下一步生化反應(yīng)等檢查。菌液回收率= =試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)供試品對(duì)照組平均菌落數(shù)菌液組平均菌落數(shù)100%.2.2 當(dāng)采用薄膜過濾法時(shí)，取規(guī)定量供試液，過濾，沖洗，試驗(yàn)菌應(yīng)加在最后一次沖洗 液中，過濾后，注入增菌培養(yǎng)基或取出濾膜接入增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查法進(jìn) 行下一步生化反應(yīng)等檢查。.3.3 驗(yàn)證中設(shè)陰性對(duì)照和陽性對(duì)照。結(jié)