緩沖溶液的配置

1、二、緩沖液免疫細(xì)胞化學(xué)中應(yīng)用的緩沖液種類較多，即使是同種緩沖液，其濃度、pH、離子強(qiáng)度等也常不同。在此介紹幾種最常用緩沖液的配制。1、0.2mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffer，PB）試劑： NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O。配制方法：配制時(shí)，常先配制0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，兩者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液（PB），根據(jù)需要可配制不同濃度的PB和PBS。（1）0.2mol/L的NaH2PO4；稱取NaH2PO4·2H2O 31.2 g 或NaH2PO

2、4·H2O 27.6g加重蒸水至1000ml溶解。（2）0.2mol/L的Na2HPO4：稱取Na2HPO4·12H2O 71.632g（或Na2HPO4·7H2O 53.6g或Na2HPO4·2H2O 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。（3）0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的Na2HPO4·12H2O，充分混合即為0.2mol/L的PB（pH約為7.47.5）。若pH偏高或偏低，可通過改變二者的比例來加以調(diào)整，室溫保存即可。2、0.01mol/L磷酸鹽緩沖

3、生理鹽水（Phosphate Buffered Saline, PBS）試劑：0.2 mol/L PB    50ml   NaCl 8.59g（約0.15mol/L）   重蒸水 至1000ml配制方法：稱取NaCl8.59g及0.2mol/L的PB50ml，加入1000ml的容量瓶中，最后加重蒸水至1000ml，充分搖勻即可。若擬配制0.02mol/L的PBS，則PB量加倍即可，依此類推。PB和PBS是免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)中最為常用的緩沖液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗組織標(biāo)本、稀釋血清等，其pH應(yīng)在7.257.3

4、5之間，否則需要調(diào)整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情況下，0.2mol/L PB的pH值稍高些，稀釋成0.01mol/L的PBS時(shí)，?？蛇_(dá)到要求的pH值，若需調(diào)整pH，通常也是調(diào)PB的pH。3、KarassonSchwlt's磷酸鹽緩沖液試劑：  NaH2PO4·H2O            3.31g     Na2HPO4·7H2O    &

5、#160;      33.77g     重蒸水 至1000ml配制方法：同前。該緩沖液主要用于配制Zamboni's固定液。4、0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl緩沖液。試劑：Tris(三羥甲基氨基甲烷)60.57g   1 N HCl約420ml   重蒸水 至1000ml配制方法：先以少量重蒸水（300500ml）溶解Tris，加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH將pH調(diào)至7.6，最后加重蒸水至1000ml。此液為儲備液，于4冰

6、箱中保存。免疫細(xì)胞化學(xué)中常用的Tris-HCl緩沖液濃度為0.05mol/L，用時(shí)取儲備液稀釋10倍即可。該液主要用于配制Tris緩沖生理鹽水（TBS）、DAB顯色液。5、Tris緩沖生理鹽水（Tris Buffered Saline，TBS）試劑：0.5mol/L Tris-HCl緩沖液100ml   NaCl3.59g（0.15mol/L）  重蒸水至1000ml配制：先以重蒸水少許溶解NaCl，再加Tris-HCl緩沖液，最后加重蒸水至1000ml，充分搖勻使Tris終濃度為0.05mol/L。TBS主要用于漂洗標(biāo)本，常用于免疫酶技術(shù)中。6、Tris-TBS

7、（TBS）試劑：Triton X-100         10ml（1%）或3ml（0.3%）  0.5mol/L Tris緩沖液（pH7.6）1000ml（50ml）或（0.2mol/L的PB）    NaCl8.59g    重蒸水至1000ml配制方法：先以重蒸水少許溶解NaCl后，加入Triton X-100及Tris緩沖液或（PB），最后加重蒸水至1000ml，充分搖勻。該液常用濃度為1%及0.3%，前者主要用于漂洗標(biāo)本，后者主要用于稀

8、釋血清。7、0.1mol/L（pH7.4）二甲胂酸緩沖液試劑：0.2mol/L二甲胂酸鈉500ml    0.1N HCl28ml   蒸餾水至1000ml配制方法：先稱取二甲胂酸鈉（MW：214）42.8g，加蒸餾水至1000ml，使0.2mol/L的二甲胂酸鈉溶液；再取HCl1.7ml加蒸餾水至1000ml，配成0.1N，最后取0.2mol/L二甲胂酸鈉溶液500ml及0.1N HCl28ml混合，加蒸餾水至1000ml，即為0.1mol/L的二甲胂酸鈉緩沖液。HEPES buffer緩沖溶液的配制方法    

9、   HEPES分子量為238.31，化學(xué)名：4-羥乙基哌嗪乙磺酸，分子式: C8H18N2O4S。HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。對細(xì)胞無毒性作用。它是一種氫離子緩沖劑，能較長時(shí)間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mmol/L。關(guān)于HEPES 緩沖溶液的配制，不同的文獻(xiàn)資料有不同的說法。根據(jù)用途，一種是單純的HEPESNaOH，另一種是HEPES鹽。各種配制方法總結(jié)如下：一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸餾水中，加0.51M 的NaOH水溶液調(diào)節(jié)至少所需pH（HEPES的有效pH 范圍是6.88.2），然后用蒸餾水定容至500ml，于4攝氏度保存。二、加少量鹽的HEPES Buffer配方（500ml）HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調(diào)節(jié)pH值，最后定容。 三