溶液顏色檢查法二部檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、1. 目的：建立溶液顏色檢查法(二部)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，并按規(guī)程進(jìn)行檢驗(yàn)，保證檢驗(yàn)操作規(guī)范化。2. 依據(jù)： 2.1. 中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部。3. 范圍：適用于所有用溶液顏色檢查法(二部)測(cè)定的供試品。4. 責(zé)任：檢驗(yàn)員、質(zhì)量控制科主任、質(zhì)量管理部經(jīng)理對(duì)本規(guī)程負(fù)責(zé)。5. 正文：5.1. 簡(jiǎn)述。5.1.1. 藥物溶液的顏色及其與規(guī)定顏色的差異能在一定程度上反映藥物的純度。本法系藥物溶液的顏色與規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)比色液相比較，或在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，以檢查其顏色。5.1.2. 品種項(xiàng)下規(guī)定的“無(wú)色或幾乎無(wú)色”，其“無(wú)色”系指供試品溶液的顏色與所用溶劑相同，“幾乎無(wú)色”系指淺于用水稀釋一倍

2、后的相應(yīng)色調(diào)1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液。5.2. 第一法。. 除另有規(guī)定外，取各品種項(xiàng)下規(guī)定量的供試品，加水溶解，置于25ml的納氏比色管中，加水稀釋至10ml。另取規(guī)定色調(diào)和色號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)比色液10ml，置于另一25ml納氏比色管中，兩管同置白色背景上，自上向下透視，或同置白色背景前，平視觀察；供試品管呈現(xiàn)的顏色與對(duì)照管比較，不得更深。如供試品管呈現(xiàn)的顏色與對(duì)照管的顏色深淺非常接近或色調(diào)不盡一致，使目視觀察無(wú)法辨別二者的深淺時(shí)，應(yīng)改用第三法（色差計(jì)法）測(cè)定 ，并將其測(cè)定結(jié)果作為判定依據(jù)。5.2.2. 比色用重鉻酸鉀液：精密稱(chēng)取在120干燥至恒重基準(zhǔn)鉻酸鉀0.4000g，置500ml量瓶中，加適量水溶解并稀釋

3、至刻度，搖勻，即得。每1ml溶液中含0.800mg的K2Cr2O7。5.2.3. 比色用硫酸銅液：取硫酸銅約32.5g,加適量的鹽酸溶液(140)使溶解成500ml，精密量取10ml，置碘量瓶中，加水50ml、醋酸4ml與碘化鉀2g，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失。每1ml的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于24.97mg的CuSO4·5H2O。根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，在剩余的原溶液中加適量的鹽酸溶液(140)，使每1ml溶液中含62.4mg的CuSO4·5H2O，即得。5.2.4. 比色用氯化鈷液：取氯化鈷

4、約32.5g，加適量的鹽酸溶液(140)使溶解成500ml，精密量取2ml，置錐形瓶中，加水200ml，搖勻，加氨試液至溶液由淺紅色轉(zhuǎn)變至綠色后，加醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH6.0)10ml，加熱至60，再加二甲酚橙指示液5滴，用乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液顯黃色。每1ml的乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于11.90mg的CoCl2·6H2O。根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果,在剩余的原溶液中加適量的鹽酸溶液(140)，使每1ml溶液中含59.5mgCoCl2·6H2O，即得。5.2.5. 各種色調(diào)標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備：按表1精密量取比色用氯化鈷液、比

5、色用重鉻酸鉀液、比色用硫酸銅液與水，搖勻，即得。表1：各種色調(diào)標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制色 調(diào) 比色用氯化鈷液/ml 比色用重鉻酸鉀液/ ml 比色用硫酸銅液/ ml 水/ml 黃綠色 12 228 72 688黃 色 40 233 0 727橙黃色 106 190 40 664橙紅色 120 200 0 680棕紅色 225 125 200 4505.2.6. 各種色調(diào)色號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液的制備：按表2精密量取各色調(diào)標(biāo)準(zhǔn)貯備液與水，搖勻，即得。表2：各種色調(diào)色號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液的配制色 號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10貯備液/ml 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4.5 6.0 7.5

6、 10.0加水量/ ml 9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 5.5 4.0 2.5 05.3. 第二法：除另有規(guī)定外，取各品種項(xiàng)下規(guī)定量的供試品,加水溶解使成10ml, 必要時(shí)濾過(guò)，濾液照分光光度法于規(guī)定波長(zhǎng)處測(cè)定，吸光度不得超過(guò)規(guī)定值。5.4. 第三法（色差計(jì)法）。. 本法是通過(guò)色差計(jì)直接測(cè)定溶液的透射三刺激值，對(duì)其顏色進(jìn)行定量表述和分析的方法。當(dāng)目視比色法較難判定供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液之間的差異時(shí)，應(yīng)考慮采用本法進(jìn)行測(cè)定與判斷。. 供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液之間的顏色差異，可以通過(guò)分別比較它們與水之間的色差值來(lái)得到，也可以通過(guò)直接比較它們之間的色差值來(lái)得到。. 現(xiàn)代顏色視覺(jué)理論認(rèn)為，在人

7、眼視網(wǎng)膜上有三種感色的錐體細(xì)胞，分別對(duì)紅、綠、藍(lán)三種顏色敏感。顏色視覺(jué)過(guò)程可分為兩個(gè)階段：第一階段，視網(wǎng)膜上三種獨(dú)立的錐體感色物質(zhì)，有選擇地吸收光譜不同波長(zhǎng)的輻射，同時(shí)每一物質(zhì)又可單獨(dú)產(chǎn)生白和黑的反應(yīng)，即在強(qiáng)光作用下產(chǎn)生白的反應(yīng)，無(wú)外界刺激時(shí)產(chǎn)生黑的反應(yīng)；第二階段，在神經(jīng)興奮由錐體感受器向視覺(jué)中樞的傳導(dǎo)過(guò)程中，這三種反應(yīng)又重新組合，最后形成三對(duì)對(duì)立性的神經(jīng)反應(yīng)，即紅或綠、黃或藍(lán)、白或黑的反應(yīng)。最終在大腦皮層的視覺(jué)中樞產(chǎn)生各種顏色感覺(jué)。. 自然界中的每種顏色都可以用選定的、能刺激人眼中三種受體細(xì)胞的紅、綠、藍(lán)三原色，按適當(dāng)比例混合而成。由此引入一個(gè)新的概念三刺激值，即在給定的三色系統(tǒng)中與待測(cè)色達(dá)

8、到色匹配所需要的三個(gè)原刺激量，分別以X、Y、Z表示。通過(guò)對(duì)眾多具有正常色覺(jué)的人體（稱(chēng)為標(biāo)準(zhǔn)觀察者，即標(biāo)準(zhǔn)眼）進(jìn)行廣泛的顏色比較試驗(yàn)，測(cè)定了每一種可見(jiàn)波長(zhǎng)(400760nm)的光引起每種錐體刺激的相對(duì)數(shù)量的色匹配函數(shù)，這些色匹配函數(shù)分別用()、()、()來(lái)表示。把這些色匹配函數(shù)組合起來(lái),描繪成曲線,就叫做CIE色度標(biāo)準(zhǔn)觀察者的光譜三刺激值曲線（見(jiàn)圖1）。圖1. 色匹配函數(shù)和三刺激值間的關(guān)系以下列方程表示：X=KS()P() ()d()Y=KS()P() ()d()Z=KS()P() ()d()式中 K為歸化系數(shù)；S()為光源的相對(duì)光譜功率分布；P()為物質(zhì)色的光譜反射比或透射比；()、()、()

9、為標(biāo)準(zhǔn)觀察者的色匹配函數(shù)；d()為波長(zhǎng)間隔，一般采用10nm或5nm。. 當(dāng)某種顏色的三刺激值確定之后，則可用其計(jì)算出該顏色在一個(gè)理想的三維顏色空間中的坐標(biāo)，由此推導(dǎo)出許多組的顏色方程（稱(chēng)為表色系統(tǒng)）來(lái)定義這一空間。如：CIE1931-XYZ表色系統(tǒng)，CIE1964補(bǔ)充標(biāo)準(zhǔn)色度系統(tǒng)，CIE1976L*a*b*色空間(CIELab均勻色空間)，Hunter表色系統(tǒng)等。. 為便于理解和比對(duì)，人們通常采用CIELab均勻色空間來(lái)表示顏色及色差。該色空間由直角坐標(biāo)L*a*b*構(gòu)成。在三維色坐標(biāo)系的任一點(diǎn)都代表一種顏色，其與參比點(diǎn)之間的幾何距離代表兩種顏色之間的色差(見(jiàn)圖2和圖3)。相等的距離代表相同的

10、色差值。用儀器對(duì)供試品溶液與其規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)比色液的顏色進(jìn)行比較時(shí)，需比較的參數(shù)就是空白對(duì)照液的顏色和供試溶液或其標(biāo)準(zhǔn)比色液顏色在均勻色空間中的差值。圖2和圖3. 在CIELab均勻色空間中,三維色坐標(biāo)L*、a*、b*與三刺激值X、Y、Z和色差之間的關(guān)系如下：明度指數(shù)L*=116×(Y/Yn)1/316色品指數(shù)a*=500×(X/Xn)1/3(Y/Yn)1/3色品指數(shù)b*=200×(Y/Yn)1/3(Z/Zn)1/3色差E*=以上公式僅適用于X/Xn、Y/Yn、Z/Zn0.008 856時(shí)。式中 X、Y、Z為待測(cè)樣品的三刺激值；Xn、Yn、Zn為完全漫反射體的三刺激值

11、；E*為供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)比色液的色差；L*為供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)比色液的明度指數(shù)之差，其中L*為正，表示供試品溶液比標(biāo)準(zhǔn)色液顏色亮（鮮艷）；a*、b*為供試品溶液色與標(biāo)準(zhǔn)比色液色的色品指數(shù)之差，其中a*、b*為正，表示供試品比標(biāo)準(zhǔn)比色液顏色更深（飽和）。. 色差計(jì)的工作原理簡(jiǎn)單地說(shuō)即是模擬人眼的視覺(jué)系統(tǒng)，利用儀器內(nèi)部的模擬積分光學(xué)系統(tǒng)，把光譜光度數(shù)據(jù)的三刺激值進(jìn)行積分而得到顏色的數(shù)學(xué)表達(dá)式，從而計(jì)算出L*、a*、b*值及對(duì)比色的色差。在儀器使用的標(biāo)準(zhǔn)光源與日常觀察供試品所使用光源光譜功率分布一致（比如晝光），其光電響應(yīng)接收條件與標(biāo)準(zhǔn)觀察者的色覺(jué)特性一致（比如10°視場(chǎng)）的條件下，用儀器方

12、法測(cè)定顏色，不但能夠精確、定量地測(cè)定顏色和色差，而且比目測(cè)法更為科學(xué)客觀，且不隨時(shí)間、地點(diǎn)、人員變化而發(fā)生變化。5.4.9.1. 對(duì)儀器的一般要求。5.4.9.1.1. 使用的測(cè)色儀器一般為光電積分型色差計(jì)，照明觀察條件為o/d條件或d/o條件，D65光源照明，10°視場(chǎng)，可直接測(cè)出三刺激值X、Y、Z，并能直接計(jì)算給出L*、a*、b*和E*及供試品溶液的色調(diào)色號(hào)。5.4.9.1.2. 因溶液的顏色隨著被測(cè)定溶液的液層厚度而變，所以除另有規(guī)定外，測(cè)量透色時(shí)，應(yīng)使用1cm厚度液槽。5.4.9.1.3. 為保證測(cè)量的可靠性，應(yīng)定期對(duì)儀器進(jìn)行全面的檢定。在每次測(cè)量時(shí)，要用無(wú)彩色物質(zhì)如水或空氣對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，并規(guī)定它在所有波長(zhǎng)下的透射率均為1.000。5.4.9.1.4. 室溫時(shí)，在D65為光源、10°視場(chǎng)條件下，水或空氣的三刺激值分別為：X=94.81；Y=100.00；Z=107.32。5.4.9.2. 測(cè)定法。5.4.9.2.1. 除另有規(guī)定外，用水對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，