脾氣虛、肝郁脾虛及胃實熱證患者阿魏酸藥代動力學特征比較

1、脾氣虛、肝郁脾虛及胃實熱證患者阿魏酸藥代動力學特征比較         07-09-12 10:37:00     編輯：studa20             作者：任平，黃熙，李雙慶，許樹耘，萬美華，周亞雄，周毅武，唐文富【關鍵詞】  脾虛證    摘要  目的：應用藥代動力學（pharmacokinet

2、ics, PK）方法研究中醫(yī)證本質，探討脾氣虛、肝郁脾虛及胃實熱證患者體內阿魏酸（ferulic acid, FA）的PK特征。方法：選擇21例健康自愿者、20例肝郁脾虛證患者、22例脾氣虛證患者和19例胃實熱證患者，予以口服自擬加味逍遙散后，采用高效液相色譜法觀察血清FA的PK參數(shù)。結果：與健康自愿者比較，脾虛證患者的吸收速度常數(shù)和消除速度常數(shù)均下降，表觀一級吸收速率常數(shù)升高；肝郁脾虛證患者的吸收速度常數(shù)、消除速度常數(shù)和表觀一級吸收速率常數(shù)均下降；胃實熱證患者的消除速度常數(shù)和表觀一級吸收速率常數(shù)均升高；差異有統(tǒng)計學意義。結論：脾氣虛證患者PK特征表現(xiàn)為吸收速度加快，分布和排泄減慢；肝郁脾虛證

3、患者PK特征表現(xiàn)為吸收、分布和排泄均減慢；胃實熱證患者PK特征表現(xiàn)為吸收和排泄加快。提示三種中醫(yī)證型患者的PK特征存在差異。關鍵詞  脾虛證; 肝郁脾虛證; 胃實熱證; 阿魏酸; 藥代動力學Pharmacokinetic characteristics of ferulic acid in patients with different syndromes of deficiency of spleen qi, stagnation of liver qi and spleen deficiency, and excess of stomach heatABSTRACT 

4、Objective: To investigate the nature of syndrome of traditional Chinese medicine by means of pharmacokinetic (PK) method. Methods: Twentyone healthy volunteers, 20 patients with syndrome of stagnation of liver qi and spleen deficiency, 22 patients with syndrome of deficiency of spleen qi and 19 pati

5、ents with syndrome of excess of stomach heat were included and administered to take Jiawei Xiaoyaosan Recipe (JWXYSR). The serum PK parameters of ferulic acid (FA) were examined by high performance liquid chromatography (HPLC) method. Results: The absorption rate constant () and the elimination rate

6、 constant () were both decreased while the apparent firstorder absorption constant (Ka) was enhanced significantly in the patients with syndrome of deficiency of spleen qi; the , and Ka were all reduced in the patients with syndrome of stagnation of liver qi and spleen deficiency; the and Ka were in

7、creased in the patients with syndrome of excess of stomach heat, as compared with the corresponding PK parameters in the healthy volunteers (P0.01). Conclusion: The PK analysis of FA in the patients with syndrome of deficiency of spleen qi shows that the absorption rate is accelerated, and both the

8、distribution and elimination rates are slowed down. The absorption, distribution and elimination rates of AF are all slowed down in the patients with syndrome of stagnation of liverqi and spleen deficiency, while the absorption and elimination rates of AF are both accelerated in the patients with sy

9、ndrome of excess of stomach heat. There are obvious differences in the PK characteristics among these three syndromes.KEY WORDS  syndrome of deficiency of spleen qi; syndrome of stagnation of liver qi and spleen deficiency; syndrome of excess of stomach heat; ferulic acid; pharmacokinetics1986年

10、田中茂1發(fā)現(xiàn)不同中醫(yī)證型患者其大黃酸的血藥濃度存在一定差異。1999年在黃熙“證治藥代動力學（pharmacokinetics, PK）”假說2的基礎上，我們提出了“脾主藥動學”假說“脾”之運化主管藥物在體內的吸收、分布、代謝和排泄，即藥物的PK過程3。近幾年來，我們在這方面進行了系列研究，初步發(fā)現(xiàn)脾虛證大鼠模型其川芎嗪、阿魏酸、甘草甜素和甘草次酸的PK特征均表現(xiàn)為吸收快、消除慢，導致曲線下面積明顯增加49。在此基礎上，我們比較了脾氣虛、肝郁脾虛及胃實熱證患者在服用自擬加味逍遙散方后血清中阿魏酸（ferulic acid, FA）的PK特征，試圖在臨床上驗證“脾主藥動學”假說。1 

11、材料與方法1.1  主要儀器  美國Waters公司液相色譜系統(tǒng)，包括：600泵、7725手動進樣器、996二級管陣列檢測器、Millennium 32色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。1.2  藥品與試劑  自擬加味逍遙散方由當歸25 g、芍藥25 g、柴胡25 g、茯苓25 g、白術15 g、薄荷15 g、牡丹皮25 g、梔子25 g、厚樸30 g、葛根25 g等13味中藥組成。藥材均購自陜西省藥材公司，經(jīng)西北大學植物解剖學研究室胡正海教授鑒定為正品。該方在原逍遙散功效的基礎上，加強行氣、降氣之功，經(jīng)10余年的臨床應用觀察，發(fā)現(xiàn)其對肝郁脾虛證功能性消化不良患者的療效

12、頗佳10。加味逍遙散水煎液的制備：按生藥5 g/kg標準，將稱取的藥材置于砂鍋內，加入6倍體積的水浸泡30 min。在電爐上用武火（3 200 W）煎沸后以文火（1 200 W）慢煎60 min。用不銹鋼篩過濾后取出藥液，再加4倍的水進行第2次煎煮。將兩次濾得的藥液混合后濃縮至400 ml，濃度相當于含生藥0.825 g/ml，冷卻后置于高溫消毒的玻璃瓶中，置于4 冰箱內冷藏。用時充分搖勻，溫服。阿魏酸，購自中國藥品生物制品檢定所，批號7739203，經(jīng)高效液相色譜（highperformance liquid chromatography, HPLC）檢測為單一色譜峰（歸一化法測定純度均為9

13、9.3%）。1.3  受試者納入及排除標準  健康志愿者來自四川大學華西醫(yī)院和第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院的學生及工作人員，共21名，其中男11名，女10名；平均年齡（40.2±6.9）歲。另選擇西京醫(yī)院2003年3月2004年11月的住院患者61例，其中男28例，女33例；平均年齡（43.7±7.7）歲；參照文獻11，中醫(yī)辨證為肝郁脾虛證20例，脾氣虛證22例、胃實熱證19例；西醫(yī)診斷為慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸球炎、十二指腸潰瘍、冠心病、高血壓及動脈粥樣硬化等。排除標準：排除體重減輕、胃腸道出血性疾病、反流性胃炎、腸激惹綜合征、機械性腸梗阻、有胃腸手術史、心

14、肺功能不全、心律失常、惡性疾病，以及肝、腎、造血系統(tǒng)等原發(fā)性疾病及其他嚴重的系統(tǒng)性疾病。健康人空白混合血清由西京醫(yī)院輸血中心提供。1.4  試驗方法  試驗方案經(jīng)兩所醫(yī)院倫理委員會批準通過，試驗前所有受試者均簽署知情同意書。1.4.1  藥效學研究  為隨機開放臨床研究。受試者洗脫期為3 d，停用一切影響胃動力及分泌功能的藥物（抗膽堿能藥物、解痙藥、止吐藥、止痛藥、H2受體拮抗劑等）；同時確認患者未服用避孕藥、抗抑郁藥及安眠藥，未飲用酒精類飲料、茶和咖啡。治療期間，患者單純服用加味逍遙散水煎液150 ml，2次/d，共10 d。1.4.2  口

15、服加味逍遙散水煎液后血清中阿魏酸測定的色譜條件  固定相：Kromasil C18柱（250×4.6 mm, 5 m, No. C18B 011220）；流動相：甲醇水冰醋酸（體積比）4059.60.4，pH 3.8；流速1.0 ml/min；檢測波長322 nm；內標：對羥基苯甲醛。FA保留時間（10.28±0.16）min，對羥基苯甲醛保留時間（7.33±0.13）min。1.4.3  阿魏酸標準溶液的配制  精確稱取阿魏酸標準品3.91 mg，置于50 ml棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度線得母液1（78.2 g/ml），再稀釋2

16、0倍得母液2（3.91 g/ml）。將配制好的標準溶液密封后置于4 冰箱內避光備用。1.4.4  給藥與采血  受試者禁食15 h后，于次日晨89時按2 ml/kg 1次口服加味逍遙散水煎液。分別于給藥前及給藥后5、10、15、30、60、90、120 min共8個時間點采取靜脈血各1.5 ml，置于塑料離心管中，20 冰箱內凍存?zhèn)溆谩?.4.5  血清樣品預處理  取待測血清1 ml置于5 ml塑料高速離心管中，加入對羥基苯甲醛10 l（劑量為239.4 ng），用電動混勻器混勻45 s，加入3.5 ml乙腈后再次電動混勻5 min，10 000 r/

17、min離心10 min，取上清液移至5 ml塑料試管中，57 水浴，氮氣流下吹干，用100 l流動相復溶，10 000 r/min離心10 min，取上清50 l進樣。1.4.6  制作標準曲線  取健康人空白混合血清各1 ml置于5 ml塑料高速離心管中，加入不同體積的阿魏酸標準液，使所含阿魏酸劑量分別為7.82、19.55、39.13、78.25、97.75、117.30、156.42、195.54 ng，分別加入10 l對羥基苯甲醛充分混勻，加入一定體積的乙腈使每管總體積均為4 560 l。按上述血清樣品預處理方法進行處理，HPLC測樣，共測定8組。以測定液中阿魏酸與

18、內標峰面積之比（Y）對測定液中阿魏酸的量（X）作線性回歸，得到標準曲線方程及相關系數(shù)r。確定最低檢測限，計算最低檢測限濃度。1.4.7  藥代動力學參數(shù)計算  采用中國藥理學會數(shù)學藥理專業(yè)委員會開發(fā)的3P97軟件，將測得的血藥濃度進行PK擬合。以擬和優(yōu)度和赤池信息判據(jù)判定曲線擬和程度，F(xiàn)檢驗選擇房室模型。2  結果2.1  FA分離情況  FA峰與內標峰、血清內源性物質及加味逍遙散吸收入血的其他成分峰均能很好地實現(xiàn)基線分離，無雜峰干擾；與FA標準品在相同條件下進行對照，保留時間均為10.5 min；對其紫外吸收峰予以定性分析，樣品的最大紫外掃描波長在321.3 nm處，與FA標準品一致。見圖1、2。圖1  不同血清樣品中阿魏酸的高效液相色譜圖（略）Figure 1  H