細(xì)胞膜的通透性和細(xì)胞的吞噬活動觀察

1、實驗三 細(xì)胞膜的通透性和細(xì)胞的吞噬活動觀察【 目的要求 】1、通過實驗觀察，加深對巨噬細(xì)胞吞噬能力、生物膜的選擇通透性等生理現(xiàn)象的理解。2、進(jìn)一步掌握臨時裝片技術(shù)和顯微鏡的使用方法?！?實驗原理 】將紅細(xì)胞置于低滲液中，因為細(xì)胞內(nèi)的溶質(zhì)濃度高于細(xì)胞外，所以液體很快進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使紅細(xì)胞脹破，血紅蛋白散出，即溶血。將紅細(xì)胞置于各種等滲溶液中，由于紅細(xì)胞膜對各種溶質(zhì)分子的通透性，有的分子能通過，有的不能通過。溶質(zhì)分子種類不同，透過的速度也有差異。當(dāng)溶質(zhì)分子進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)時，胞內(nèi)溶質(zhì)增加，導(dǎo)致水分?jǐn)z入，紅細(xì)胞膨脹到一定程度時，細(xì)胞膜破裂而出現(xiàn)溶血，溶血現(xiàn)象發(fā)生時濃密的紅細(xì)胞懸液（不透明）會變成紅色透明的

2、血紅蛋白溶液。高等動物體內(nèi)存在著具有防御功能的吞噬細(xì)胞系統(tǒng)，它由粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等白細(xì)胞構(gòu)成，是機體免疫系統(tǒng)的重要組成部分。在白細(xì)胞中，以單核細(xì)胞和粒細(xì)胞的吞噬活動較強，故它們常被稱為吞噬細(xì)胞，單核細(xì)胞在骨髓中形成后會進(jìn)入血液，通過毛細(xì)血管進(jìn)入肝、脾、淋巴結(jié)及結(jié)締組織中進(jìn)一步發(fā)育，分化為巨噬細(xì)胞（macrophage）。巨噬細(xì)胞是機體內(nèi)的一種重要的免疫細(xì)胞，具有非特異性的吞噬功能，當(dāng)機體受到細(xì)菌等病原體和其它異物侵入時，巨噬細(xì)胞將向病原體或異物游走（趨化性），當(dāng)接觸到病原體或異物時，伸出偽足將其包圍并進(jìn)行內(nèi)吞作用，將病原體或異物吞入細(xì)胞，形成吞噬泡，進(jìn)而初級溶酶體與吞噬泡發(fā)生融合，將異物消化分

3、解掉。本實驗將觀察到小鼠的巨噬細(xì)胞對進(jìn)入其體內(nèi)的雞紅細(xì)胞進(jìn)行吞噬的情況?！?器材與試劑 】1、器材：光學(xué)顯微鏡、2ml注射器、載玻片、刻度吸管、橡皮吸球、試管及試管架、手術(shù)剪、小鑷子、記號筆等。2、材料：小白鼠、1%雞紅細(xì)胞懸液、10%兔或人紅細(xì)胞懸液。3、試劑：6%淀粉肉湯（含臺盼藍(lán)）、生理鹽水、0.17mol/L氯化銨、0.17mol/L氯化鈉、0.17mol/L硫酸鈉、0.17mol/L硝酸鈉、0.17mol/L草酸銨、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、500u/ml肝素。4、試劑的配制：（1） 6%的淀粉肉湯：稱取牛肉膏0.3g、蛋白胨1.0g、

4、氯化鈉0.5g和臺盼藍(lán)（trypan blue）0.3g，分別加入到100ml蒸餾水中溶解，再加上可溶性淀粉6g，混勻后煮沸滅菌，置于4C保存，使用時溫浴溶解。（2） 0.17mol/L氯化鈉溶液：稱取4.967g氯化鈉溶于500ml蒸餾水中。（3） 0.32mol/L葡萄糖溶液：稱取28.83g葡萄糖溶于500ml蒸餾水中。（4） 0.32mol/L甘油溶液：量取11.7ml甘油(C3H5(OH)3 1.26g/ml) 加蒸餾水500ml混勻（5）。0.32mol/L乙醇溶液：量取9.33ml無水乙醇加蒸餾水至500ml混勻。（6） 500u/ml肝素：取安瓿裝肝素注射液一支（12500u）

5、，用注射器抽出2ml肝素加入到23ml生理鹽水中混勻，4C保存。（7） 1%雞紅細(xì)胞懸液：取雞血1ml（加肝素抗凝）加入到99ml生理鹽水中。（8） 10%兔紅細(xì)胞懸液：取10ml兔血（加肝素抗凝）加入到90 ml生理鹽水中混合均勻【 內(nèi)容與方法 】一、紅細(xì)胞膜通透性的觀察每組一套實驗器材，注意各種試劑的標(biāo)簽。試管要根據(jù)實驗所要裝的溶液種類來編號，移液管也要對應(yīng)編號，切勿混淆弄錯，交叉使用，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。1、輕輕搖勻裝有10%的人紅細(xì)胞懸液的小瓶，隔著瓶看不見后面紙上的字，說明該紅細(xì)胞懸液是不透明的。2、觀察人（或兔）紅細(xì)胞在低滲溶液中的溶血現(xiàn)象：將0號試管加入0.3 ml人紅細(xì)胞懸

6、液，在加入3 ml蒸餾水，輕輕搖勻，注意溶液顏色的變化，隔著試管看后面紙上的字，能否看清楚？說明什么問題？記好時間。3、觀察人（或兔）紅細(xì)胞對各種物質(zhì)的選擇通透性： 在1號試管中加入0.3ml人（或兔）紅細(xì)胞懸液，再加入3ml 0.17mol/L的氯化鈉，輕輕搖勻。觀察是否溶血。 分別將下列三種等滲液按上述方法進(jìn)行實驗，并記下溶血時間。0.3ml人（或兔）紅細(xì)胞懸液+3ml 0.32mol/L乙醇（2號試管）。0.3ml人（或兔）紅細(xì)胞懸液+3ml 0.32mol/L葡萄糖（3號試管）。0.3ml人（或兔）紅細(xì)胞懸液+3ml 0.32mol/L甘油（4號試管）。將實驗結(jié)果填入下表：編號溶血種類

7、是否溶血溶血時間結(jié)果分析0蒸餾水1NaCl溶液2乙醇3葡萄糖4甘油二、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活動觀察在實驗前兩天，每天每只小鼠腹腔注射6%淀粉肉湯1ml（含臺酚藍(lán)），實驗前先給每只小鼠腹腔注射1%雞紅細(xì)胞懸液1ml。25分鐘后再向腹腔注射0.5ml生理鹽水。3分鐘后用頸椎脫臼法處死小鼠。剪開腹腔，用注射器或吸管吸取腹腔液，滴一滴在載玻片中央，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察。在低倍鏡下找到許多圓形或不規(guī)則形狀的巨噬細(xì)胞，移至視野中央，換高倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)中有數(shù)量不等的藍(lán)色圓形小顆粒（吞入含臺酚藍(lán)淀粉肉湯所形成）；還可以見到少量黃色橢圓形有細(xì)胞核的雞紅細(xì)胞。在視野中可見到巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的不同階段。有的紅細(xì)胞緊貼在巨噬細(xì)胞表面；有的紅細(xì)胞已部分被吞入；有的巨噬細(xì)胞已吞入1個或多個紅細(xì)胞，形成了吞噬泡。圖3-1 細(xì)胞的吞噬活動1. 紅細(xì)胞與巨噬細(xì)胞接觸 2. 3. 正在被吞噬的紅細(xì)胞4已經(jīng)被吞噬的紅細(xì)胞，并形成吞噬體【