毛細管區(qū)帶電泳法測定黃連、黃柏炮制前后小檗堿的含量

1、毛細管區(qū)帶電泳法測定黃連、黃柏炮制前后小檗堿的含量    【摘要】  目的： 考察黃連、黃柏藥材炮制前后小檗堿的含量變化。方法： 采用熔融石英毛細管柱（50 m×72.5 cm，有效長度64.2 cm）作為分離通道，50 mmol/L Na2HPO4NaH2PO4 （pH=6.7）-甲醇（21）作為緩沖溶液，運行電壓30 kV，毛細管柱溫20 ，檢測波長275 nm。結果： 小檗堿的線性范圍為0.010&#

2、160;8  0.075 6 mg/L,r = 0.999 3，小檗堿在黃連和黃柏中的回收率分別為101.56%、RSD 2.0%和95.6%、RSD 1.32% 。結論： 毛細管區(qū)帶電泳法簡便、準確，重復性好，黃連、黃柏炮制后小檗堿的含量均有降低?！娟P鍵詞】  黃連 黃柏 小檗堿 電泳 毛細管Abstract Objective: To observe content cha

3、nges of berberine in Coptis chinensis Franc and Phellodenron chinense Schneid before and after processing. Method： A fused quartz capillary（50 m×72.5 cm，with effective length 

4、of 64.2 cm）  was used as abstraction tunnelThe running buffer was composed of 50mmol/L Na2HPO4NaH2PO4 （pH=6.7）-methanol（21）The applied voltage was 30kv and the capillary temperatur

5、e was 20The detection wavelength was 275nm. Results： The linear curve for berberine was obtained in the range of 0.010 8  0.075 6 mg/L,r=0.999 3. The recovery o

6、f berberine in Coptis chinensis Franch was 101.56% with RSD of 2.0% and in Phellodenron chinense Schneid was 95.6% with RSD 1.32%. Conclusions： The method is simple, 

7、;accurate and good in reproducibility. The berberine contents in Coptis chinensis Franc and Phellodenron chinense Schneid decrease after processing.Key words Coptis chinensis Franch；Phellode

8、nron chinense Schneid；electrophoresis, capillary中藥材炮制目的主要是改變藥性，降低副作用，擴大用藥范圍，而中藥材炮制工藝繁多，飲片生產(chǎn)工藝落后，產(chǎn)品的質(zhì)量標準體系不完善，現(xiàn)代藥理研究還不夠深入等缺點1。中藥材在炮制過程中往往需要加入某些輔料，炮制之后的藥材會因輔料中不揮發(fā)的附著物使重量增加。因此，在分析炮制前后藥材中化學成分時，這些附著物的重量應該被扣除后才能準確計算被測成分的含量變化。黃連和黃柏藥材中的藥效成分小檗堿含量的測定方法多采用高效液相色譜法2，3或薄層掃描法4，采用高效毛細管電泳法進行測定的報道較少。20

9、07年采用高效毛細管電泳法對黃連和黃柏炮制前后小檗堿含量進行了測定。1  儀器與試藥    HP3DCE高效毛細管電泳儀（Agilent公司）DAD檢測器，Agilent化學工作站，自動進樣器； AE-240雙量程分析電子天平（萬分之一和十萬分之一，梅特勒-托利多上海有限公司）。鹽酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉均為分析純、甲醇（分析純，色譜純）、水為重蒸餾水，鹽酸小檗堿對照品購自中國藥品生物制品檢定所（批號07139906）。藥材黃連、黃柏分別購自貴陽同濟堂藥店和貴陽鼎茂藥行，經(jīng)貴陽中醫(yī)學院藥學系生藥學教研室周漢華副教

10、授鑒定，黃連為毛茛科植物味連Coptis chinensis Franch.的干燥根莖，黃柏為蕓香科植物黃皮樹Phellodenron chinense Schneid.的干燥樹皮。2  方法與結果2.1  黃連和黃柏的炮制 酒黃連、姜黃連、萸黃連、鹽黃柏分別用生黃連和生黃柏，按2005版中華人民共和國藥典一部規(guī)定進行炮制5 。由于經(jīng)過炮制后的藥材重量將會增加（得率P>100%），因此，炮制品的數(shù)據(jù)均為扣除附著物后計算的結果。計算公式如下：炮制得率： P=W2W1×10

11、0%      W1 ：炮制前干燥至恒重的樣品重量；W2：炮制后干燥至恒重的樣品重量。黃連和黃柏藥材經(jīng)炮制后的得率：酒制黃連116.81%，吳茱萸制黃連109.69%，姜制黃連111.10%，鹽制黃柏101.6%。2.2  供試品溶液的制備 稱取干燥至恒重的各樣品粉末約0.1 g ，置索氏提取器中，加入1001的甲醇-鹽酸約70 ml，水浴加熱回流至提取液無色，收集提取液，以甲醇定容至100 ml，搖勻，即得供試品溶液。2.3  毛細管

12、電泳條件 采用空心石英毛細管柱（河北永年光導纖維廠）50 m ×72.5 cm，有效長度64.2 cm ；DAD檢測器檢測波長275 nm，50 mmol/L的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉(pH=6.7)-甲醇（21）的溶液作為緩沖溶液，工作電壓30 kV，壓力進樣3 kPa×10 s，電解質(zhì)封口1 kPa×5 s，柱溫20 。每次進樣前依次用濃度為0.1 mol/L的氫氧化鈉和緩沖溶液分別沖柱5 min。分離效

13、果見圖1。貴陽醫(yī)學院學報  33卷    4期高言明等  毛細管區(qū)帶電泳法測定黃連、黃柏炮制前后小檗堿的含量(min)2.4  標準曲線的制備 精密稱取2.70 mg鹽酸小檗堿對照品，用甲醇溶解于25 ml容量瓶中，并定容至刻度、搖勻，得濃度為0.108 g/L鹽酸小檗堿對照品溶液。分別精密吸取濃度為0.108 g/L的鹽酸小檗堿對照品0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 ml于7個5 ml容量瓶中，用甲醇定

14、容至刻度，搖勻后分別精密吸取0.5 ml于7個樣品小瓶中，按“2.3”項下進行電泳測定。以濃度C為橫坐標，峰面積A為縱坐標，線性回歸方程：A=556.327 C-0.517 6，r =0.999 3。鹽酸小檗堿線性范圍為0.010 8  0.075 6 g/L。2.5  精密度試驗 在9個樣品小瓶中分別精密加入同一濃度的對照品溶液0.5 ml，用新的樣品小瓶蓋蓋緊，按“2.3“項下分別進行測定，用峰面積計算精密度，9次測定結果RSD=1.72。2.6

15、60; 穩(wěn)定性試驗 分別取黃連、黃柏生品提取液各一份，分別在0、2、4、6、8 h測定小檗堿的峰面積，結果黃連、黃柏的RSD值分別為1.46%和1.91%。2.7  重復性試驗 精密稱取黃連和黃柏干燥生品粉末樣品各5份，每份約0.1 g，按“2.2”項下進行提取，按“2.3”項下進行電泳分離測定。結果黃連、黃柏樣品中鹽酸小檗堿的平均含量分別為6.22%，RSD = 0.98；2.40%，RSD=2.10。2.8  回收率試驗取鹽酸小檗堿平均含量分別為6.22%和2.40%的黃連和黃柏干

16、燥樣品粉末各5份，每份約0.05g，再加入一定量的小檗堿對照品溶液，按“2.2”項下進行提取，按“2.3”項下進行測定，結果見表1。表1  鹽酸小檗堿回收率測定結果（略）2.9  樣品中鹽酸小檗堿測定 稱取各干燥至恒重的樣品粉末約0.1 g，按“2.2”項下進行提取，按“2.3”項下進行測定，結果見表2。表2  樣品中鹽酸小檗堿含量測定結果（略）3  討論黃連和黃柏藥材經(jīng)炮制后，其中鹽酸小檗堿的含量都有一定程度下降，原因可能是在炮制過程中小檗堿因溫度增加而被分解。因此，如要減少小檗堿的損失，炮制

17、方法和溫度的控制是值得研究的問題6。   高效毛細管電泳采用外標法進行定量分析，通常精密度稍差。若采用內(nèi)標法，要找到恰當?shù)膬?nèi)標物往往難度較大。本研究在使用外標法的操作過程中進行了一定的改進，如用塑料樣品小瓶蓋只穿刺進樣一次后就不再使用，或精密量取樣品溶液于樣品小瓶中，使各樣品小瓶中的液體樣品體積一致；壓力進樣之后電泳之前，需用電泳介質(zhì)封口，經(jīng)上述3項改進后，精密度有了明顯改善7。【參考文獻】  1唐永紅，麻春恒，潘忠記.炮制鹽黃柏新工藝參數(shù)優(yōu)選的研究J.廣西醫(yī)藥，2006（9）:1426-1428.2喬喜芹.HPLC測定黃柏炮制品鹽酸小檗堿質(zhì)量分數(shù)J.哈爾濱商業(yè)大學學報，2006（5） ：18-20.3修彥風，徐德生，馮怡，等.不同用量的吳茱萸炮制黃連后