蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)

1、題目：蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膙掌握幾種使蛋白質(zhì)沉淀的方法；v掌握蛋白質(zhì)可逆沉淀與不可逆沉淀的區(qū)別；v理解蛋白質(zhì)變性和沉淀的關(guān)系。二、原理v蛋白質(zhì)是親水膠體，正常狀態(tài)下，蛋白質(zhì)分子表面具有水化膜和電荷層，能保持其膠體溶液的穩(wěn)定性，在一定因素 的影響下，蛋白質(zhì)會(huì)失去電荷和脫水沉淀。 v蛋白質(zhì)的變性與沉淀之間沒(méi)有必然聯(lián)系 蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)（一）蛋白質(zhì)的鹽析作用 （二）乙醇沉淀蛋白質(zhì) （三）重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì) （四）生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì) （一）蛋白質(zhì)的鹽析作用v加鹽類如硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等可以破壞蛋白 質(zhì)膠體周?chē)乃ぃ瑫r(shí)又中和了蛋白質(zhì)分子的電 荷，因此使蛋白質(zhì)產(chǎn)生沉淀，這種加鹽使蛋白質(zhì)沉

2、淀析出的現(xiàn)象稱鹽析。 v鹽溶現(xiàn)象為低鹽濃度可使蛋白質(zhì)的溶解度增加，實(shí) 驗(yàn)時(shí)要加足夠量的鹽。 v蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過(guò)程，用鹽析方法沉淀蛋 白質(zhì)時(shí)，較少引起蛋白質(zhì)變性，經(jīng)透析或用水稀釋 時(shí)又可溶解。（二）乙醇沉淀蛋白質(zhì)v有機(jī)溶劑如酒精、丙酮等可使蛋白質(zhì)產(chǎn)生沉淀，這 是由于這些有機(jī)溶劑和水有較強(qiáng)的作用，破壞了蛋 白質(zhì)分子周?chē)乃ぃ虼税l(fā)生沉淀作用。若及時(shí) 將蛋白質(zhì)沉淀與丙酮或乙醇分離，蛋白質(zhì)沉淀則可 重新溶解于水中。 （三）重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)v溶液pH在蛋白質(zhì)等電點(diǎn)以上時(shí)，重金屬鹽類(如 Pb2+、Cu2+、Hg2+及Ag+等)易與蛋白質(zhì)結(jié)合成不 溶性鹽而沉淀。 v重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)通常比

3、較完全，故常用重金 屬鹽除去液體中的蛋白質(zhì)。但應(yīng)注意，在使用某些 重金屬鹽(如硫酸銅或醋酸鉛)沉淀蛋白質(zhì)時(shí)，不可 過(guò)量，否則將引起沉淀再溶解。此時(shí)的溶解為生成 憎水膠體的緣故。 （四）生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)v生物堿是植物中具有顯著生理作用的類含氮的堿 性物質(zhì)。凡能使生物堿沉淀，或能與生物堿作用產(chǎn) 生顏色反應(yīng)的物質(zhì)，稱為生物堿試劑。如鞣酸、苦 味酸和磷鎢酸等。 v當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液pH值低于其等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)為陽(yáng)離 子，能與生物堿試劑的陰離子結(jié)合成性鹽而沉淀。 v溶液中的蛋白亦能被有機(jī)酸沉淀，其中以三氯醋酸 的作用最為靈敏而且特異。因此被用于蛋白質(zhì)的首 選沉淀劑，只能沉淀蛋白質(zhì)，不能沉淀其水解產(chǎn)物， 加熱可除去。 三、實(shí)驗(yàn)材料v實(shí)驗(yàn)材料： 雞卵清蛋白液，吸管（1mlx4，2mlx4，0.5mlx1， 5mlx2），試管（1.5x15cmx14），水浴鍋，滴管，電爐 v實(shí)驗(yàn)試劑： 苯酚（0.5%），硫酸