第四章基因在大腸桿菌酵母中的高效的表達(dá)

1、第四章第四章 基因在大腸桿菌、酵基因在大腸桿菌、酵 母中的高效的表達(dá)母中的高效的表達(dá)第一節(jié)第一節(jié) 第二節(jié)第二節(jié) 基因在大腸桿菌中的高效表達(dá)基因在大腸桿菌中的高效表達(dá)第三節(jié)第三節(jié) 基因在酵母中的表達(dá)基因在酵母中的表達(dá)前言前言l基因表達(dá)是指結(jié)構(gòu)基因在生物體中的轉(zhuǎn)錄、翻譯以基因表達(dá)是指結(jié)構(gòu)基因在生物體中的轉(zhuǎn)錄、翻譯以及所有加工過程。及所有加工過程。l基因工程主要目標(biāo)之一是生產(chǎn)常規(guī)方法難以生產(chǎn)的基因工程主要目標(biāo)之一是生產(chǎn)常規(guī)方法難以生產(chǎn)的大量蛋白質(zhì)產(chǎn)物大量蛋白質(zhì)產(chǎn)物即實(shí)現(xiàn)基因的高效表達(dá)。即實(shí)現(xiàn)基因的高效表達(dá)。l基因高效表達(dá)研究是指外源基因在某種細(xì)胞中的表基因高效表達(dá)研究是指外源基因在某種細(xì)胞中的表達(dá)活

2、動，即剪切下外源基因片段，拼接到另一個(gè)基因達(dá)活動，即剪切下外源基因片段，拼接到另一個(gè)基因表達(dá)體系中，使其能獲得原生物活性又可高產(chǎn)的表達(dá)表達(dá)體系中，使其能獲得原生物活性又可高產(chǎn)的表達(dá)產(chǎn)物。產(chǎn)物。l最佳的基因表達(dá)體系：最佳的基因表達(dá)體系：目的基因的表達(dá)產(chǎn)量高目的基因的表達(dá)產(chǎn)量高;表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定;生物活性高生物活性高;表達(dá)產(chǎn)物容易分離純化。表達(dá)產(chǎn)物容易分離純化。第一節(jié)基因的表達(dá)系統(tǒng)與表達(dá)策略第一節(jié)基因的表達(dá)系統(tǒng)與表達(dá)策略一、適合目的基因表達(dá)的宿主細(xì)胞的要求一、適合目的基因表達(dá)的宿主細(xì)胞的要求: : 1 1、容易獲得較高濃度的細(xì)胞；、容易獲得較高濃度的細(xì)胞； 2 2、能利用易得廉價(jià)原料；、能

3、利用易得廉價(jià)原料； 3 3、不致病、不產(chǎn)生內(nèi)毒素；、不致病、不產(chǎn)生內(nèi)毒素； 4 4、發(fā)熱量低、需氧低、適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵溫度和細(xì)胞形態(tài)；、發(fā)熱量低、需氧低、適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵溫度和細(xì)胞形態(tài)； 5 5、容易進(jìn)行代謝調(diào)控；、容易進(jìn)行代謝調(diào)控； 6 6、容易進(jìn)行、容易進(jìn)行DNADNA重組技術(shù)操作；重組技術(shù)操作； 7 7、產(chǎn)物的產(chǎn)量、產(chǎn)率高，、產(chǎn)物的產(chǎn)量、產(chǎn)率高， 8 8、產(chǎn)物容易提取純化。、產(chǎn)物容易提取純化。二、宿主細(xì)胞分為兩大類：二、宿主細(xì)胞分為兩大類：1 1、原核細(xì)胞：常用有大腸桿菌、枯草芽胞桿菌、原核細(xì)胞：常用有大腸桿菌、枯草芽胞桿菌、 鏈霉菌等；鏈霉菌等；2 2、真核細(xì)胞：常用有酵母、絲狀真菌、哺乳動物、真

4、核細(xì)胞：常用有酵母、絲狀真菌、哺乳動物細(xì)胞等。細(xì)胞等。大腸桿菌大腸桿菌目前仍是基因工程研究中采用最多的原目前仍是基因工程研究中采用最多的原核表達(dá)體系。核表達(dá)體系。優(yōu)越性：優(yōu)越性：對對大腸桿菌的基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等背景大腸桿菌的基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等背景知識和基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)理已有了深刻了解。知識和基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)理已有了深刻了解。有各類菌株和載體系列。有各類菌株和載體系列。目前以實(shí)現(xiàn)多種基因的高效表達(dá)。表達(dá)基因產(chǎn)目前以實(shí)現(xiàn)多種基因的高效表達(dá)。表達(dá)基因產(chǎn)物形式多樣物形式多樣: :細(xì)胞內(nèi)不溶性表達(dá)細(xì)胞內(nèi)不溶性表達(dá)( (包含體包含體) )、細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞內(nèi)可溶性表達(dá)、細(xì)胞周質(zhì)表達(dá)等。可溶性表達(dá)、

5、細(xì)胞周質(zhì)表達(dá)等。易培養(yǎng)，成本低易培養(yǎng)，成本低。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：大腸桿菌中的表達(dá)不存在信號肽，產(chǎn)品大腸桿菌中的表達(dá)不存在信號肽，產(chǎn)品多為胞內(nèi)產(chǎn)物，提取困難。多為胞內(nèi)產(chǎn)物，提取困難。因分泌能力不足，真核因分泌能力不足，真核蛋白質(zhì)常形成不蛋白質(zhì)常形成不溶性的包含體，表達(dá)產(chǎn)物需經(jīng)變性復(fù)性溶性的包含體，表達(dá)產(chǎn)物需經(jīng)變性復(fù)性才恢復(fù)活性。才恢復(fù)活性。蛋白質(zhì)不能糖基化。產(chǎn)物蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)不能糖基化。產(chǎn)物蛋白質(zhì)N N端多余端多余一個(gè)蛋氨酸殘基。一個(gè)蛋氨酸殘基。其內(nèi)毒素很難除去。其內(nèi)毒素很難除去。酵母酵母 酵母菌是研究基因表達(dá)最有酵母菌是研究基因表達(dá)最有效的單細(xì)胞真核微生物。其基因組效的單細(xì)胞真核微生物。其基因組小，世

6、代時(shí)間短，有單倍體雙倍體小，世代時(shí)間短，有單倍體雙倍體兩種形式，繁殖迅速，無毒性。能兩種形式，繁殖迅速，無毒性。能外分泌，產(chǎn)物可糖基化。已有不少外分泌，產(chǎn)物可糖基化。已有不少真核基因成功表達(dá)。真核基因成功表達(dá)?；虮磉_(dá)的基本過程基因表達(dá)的基本過程基因表達(dá)的基本過程基因表達(dá)的基本過程 基因的表達(dá)主要涉及到兩個(gè)過程：轉(zhuǎn)錄和翻譯?；虻谋磉_(dá)主要涉及到兩個(gè)過程：轉(zhuǎn)錄和翻譯。 首先，目的基因通過轉(zhuǎn)錄首先，目的基因通過轉(zhuǎn)錄(transcription)形成形成mRNA（信使（信使RNA, messenger RNA )； 然后，然后， tRNA （轉(zhuǎn)運(yùn)（轉(zhuǎn)運(yùn)RNA, transfer RNA）將）將各種氨

7、基酸運(yùn)送到核糖各種氨基酸運(yùn)送到核糖體并按照體并按照mRNA的密碼的密碼子順序?qū)⒏鞣N氨基酸連子順序?qū)⒏鞣N氨基酸連接成特定的氨基酸序列接成特定的氨基酸序列(translation) 最終得到基最終得到基因 的 表 達(dá) 產(chǎn) 物 （ 蛋 白因 的 表 達(dá) 產(chǎn) 物 （ 蛋 白質(zhì)）。質(zhì)）。Transcription(轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄): making an RNA copy of a DNA sequence . RNA polymerase opens the part of the DNA to be transcribed. Only one strand of DNA (the template stra

8、nd, antisense strand) is transcribed. 轉(zhuǎn)錄的具體過程轉(zhuǎn)錄的具體過程 啟動子（啟動子（promoter）：在基因序列中，標(biāo)志：在基因序列中，標(biāo)志著轉(zhuǎn)錄起始的可被著轉(zhuǎn)錄起始的可被RNA聚合酶識別的位點(diǎn)聚合酶識別的位點(diǎn)(DNA區(qū)段區(qū)段)，一般位于基因的上游。，一般位于基因的上游。 終止子（終止子（terminator）：位于基因的編碼序：位于基因的編碼序列之外（一般在下游）的一段標(biāo)志著轉(zhuǎn)錄停止的列之外（一般在下游）的一段標(biāo)志著轉(zhuǎn)錄停止的RNA聚合酶識別位點(diǎn)。聚合酶識別位點(diǎn)。有效轉(zhuǎn)錄的基本條件有效轉(zhuǎn)錄的基本條件正確翻譯的基本條件正確翻譯的基本條件1 1、具備起始密

9、碼子、具備起始密碼子2 2、具備終止密碼子、具備終止密碼子3 3、具有正確的閱讀框、具有正確的閱讀框基基因因表表達(dá)達(dá)的的基基本本過過程程根據(jù)表達(dá)蛋白用途選擇基因的表達(dá)策略根據(jù)表達(dá)蛋白用途選擇基因的表達(dá)策略一、生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究一、生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究二、表達(dá)蛋白質(zhì)用作抗原二、表達(dá)蛋白質(zhì)用作抗原三、結(jié)構(gòu)研究三、結(jié)構(gòu)研究真核基因表達(dá)的特點(diǎn)真核基因表達(dá)的特點(diǎn)1. 一條成熟的一條成熟的mRNA只能翻譯成一條多肽，不存在象只能翻譯成一條多肽，不存在象原核生物那樣的多基因操縱子模式；原核生物那樣的多基因操縱子模式；2. 基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)很大，而且往往遠(yuǎn)離啟動子達(dá)幾百基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)很大，而且往往遠(yuǎn)離

10、啟動子達(dá)幾百個(gè)甚至上千個(gè)堿基，它們并不直接影響個(gè)甚至上千個(gè)堿基，它們并不直接影響RNA聚合酶聚合酶與啟動子區(qū)的結(jié)合，而是通過改變基因與啟動子區(qū)的結(jié)合，而是通過改變基因5上游區(qū)上游區(qū)DNA的構(gòu)型來影響的構(gòu)型來影響RNA聚合酶與啟動子區(qū)的結(jié)合；聚合酶與啟動子區(qū)的結(jié)合；3. mRNA合成后穿過核膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中后才進(jìn)行翻譯合成后穿過核膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中后才進(jìn)行翻譯工作，而且通常都有復(fù)雜的成熟和剪接過程；工作，而且通常都有復(fù)雜的成熟和剪接過程；4. 基因的啟動子區(qū)和原核基因差異很大，而且有增強(qiáng)基因的啟動子區(qū)和原核基因差異很大，而且有增強(qiáng)子序列存在。子序列存在。原核體系中表達(dá)真核基因的困難原核體系中表達(dá)真核基

11、因的困難1. 細(xì)菌的細(xì)菌的RNA聚合酶不識別真核基因的啟動子；聚合酶不識別真核基因的啟動子；2. 真核基因轉(zhuǎn)錄的真核基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在原核細(xì)胞中不能結(jié)合在原核細(xì)胞中不能結(jié)合到核糖體上；到核糖體上；3. 真核基因一般含有內(nèi)含子，而原核細(xì)胞沒有象真核基因一般含有內(nèi)含子，而原核細(xì)胞沒有象真核細(xì)胞那樣的轉(zhuǎn)錄后加工系統(tǒng)，所以真核細(xì)胞那樣的轉(zhuǎn)錄后加工系統(tǒng)，所以mRNA中的內(nèi)含子部分不能被切除，不能形成成熟的中的內(nèi)含子部分不能被切除，不能形成成熟的RNA，也就不能表達(dá)出有功能的真核蛋白；，也就不能表達(dá)出有功能的真核蛋白；4. 表達(dá)的真核蛋白在原核細(xì)胞中很不穩(wěn)定，容易表達(dá)的真核蛋白在原核細(xì)胞中很不穩(wěn)定，容易

12、被細(xì)菌蛋白酶降解破壞。被細(xì)菌蛋白酶降解破壞。將真核基因克隆到一個(gè)強(qiáng)大的原核啟動子和將真核基因克隆到一個(gè)強(qiáng)大的原核啟動子和SDSD序列序列的下游，使得真核基因處于原核調(diào)控體系中。的下游，使得真核基因處于原核調(diào)控體系中。采用真核基因的采用真核基因的cDNAcDNA序列作為構(gòu)建表達(dá)載體的目的序列作為構(gòu)建表達(dá)載體的目的基因，這樣就解決了原核細(xì)胞沒有基因，這樣就解決了原核細(xì)胞沒有RNARNA剪接功能的剪接功能的問題。問題。構(gòu)建載體時(shí)，將真核基因插在幾個(gè)原核密碼子的后構(gòu)建載體時(shí)，將真核基因插在幾個(gè)原核密碼子的后面，翻譯后就得到了原核多肽和真核多肽的融合面，翻譯后就得到了原核多肽和真核多肽的融合蛋白，這樣就

13、可以避免被原核蛋白酶的識別和降蛋白，這樣就可以避免被原核蛋白酶的識別和降解，最后可以將融合多肽切除。解，最后可以將融合多肽切除。構(gòu)建表達(dá)載體的策略構(gòu)建表達(dá)載體的策略第二節(jié)第二節(jié) 克隆基因在大腸桿菌中的表達(dá)克隆基因在大腸桿菌中的表達(dá) R3510SD編碼序列編碼序列OriTcrTT啟動子啟動子起始密碼子起始密碼子AUG、GUG、UUG終止密碼子終止密碼子UAAU、UGA、UAGl大腸桿菌表達(dá)載體的成份大腸桿菌表達(dá)載體的成份 大腸桿菌基因表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)載體一般是質(zhì)粒表達(dá)載體，大腸桿菌基因表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)載體一般是質(zhì)粒表達(dá)載體，含有大腸桿菌內(nèi)源質(zhì)粒復(fù)制起始位點(diǎn)和有關(guān)序列組成的能在大含有大腸桿菌內(nèi)源質(zhì)粒復(fù)

14、制起始位點(diǎn)和有關(guān)序列組成的能在大腸桿菌中有效復(fù)制的復(fù)制子。腸桿菌中有效復(fù)制的復(fù)制子。大腸桿菌表達(dá)載體的成份大腸桿菌表達(dá)載體的成份啟動子啟動子 要求是：要求是：強(qiáng)啟動子強(qiáng)啟動子是誘導(dǎo)性的，如熱誘導(dǎo)和是誘導(dǎo)性的，如熱誘導(dǎo)和化學(xué)誘導(dǎo)?；瘜W(xué)誘導(dǎo)。轉(zhuǎn)錄終止子轉(zhuǎn)錄終止子 使轉(zhuǎn)錄終止，增強(qiáng)使轉(zhuǎn)錄終止，增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性，提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，提高蛋白質(zhì)產(chǎn)物的表達(dá)水平。產(chǎn)物的表達(dá)水平。 尤其是將兩個(gè)終止子串聯(lián)，轉(zhuǎn)錄終止功能更強(qiáng)。尤其是將兩個(gè)終止子串聯(lián)，轉(zhuǎn)錄終止功能更強(qiáng)。核糖體結(jié)合位點(diǎn)核糖體結(jié)合位點(diǎn) 在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)下游的一段在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)下游的一段DNA序列（序列（SD，5AGGAGG3）(4)篩選標(biāo)記基因篩選

15、標(biāo)記基因 (5)密碼子的選擇密碼子的選擇常見的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)常見的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)T7表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)系統(tǒng)T7噬菌噬菌RNA聚合酶能選擇性的激活聚合酶能選擇性的激活T7噬菌體啟噬菌體啟動子的轉(zhuǎn)錄，其動子的轉(zhuǎn)錄，其mRNA合成速率相當(dāng)于大腸桿菌合成速率相當(dāng)于大腸桿菌RNA聚合聚合酶的酶的5倍。倍。Lac表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)系統(tǒng)是是-半乳糖苷酶編碼基因半乳糖苷酶編碼基因LacZ的轉(zhuǎn)錄的調(diào)控的轉(zhuǎn)錄的調(diào)控序列，該啟動子可以被序列，該啟動子可以被IPTG誘導(dǎo)，所以在培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)，所以在培養(yǎng)基中加入該安慰誘導(dǎo)物就可以誘導(dǎo)目的基因的表達(dá)。該安慰誘導(dǎo)物就可以誘導(dǎo)目的基因的表達(dá)。Tac表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)系統(tǒng)是一種由是一種由

16、Lac和和Trp啟動子雜合而成的啟動子，啟動子雜合而成的啟動子，其強(qiáng)度得到了很大的提高，也可被其強(qiáng)度得到了很大的提高，也可被IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。誘導(dǎo)表達(dá)。PL表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)系統(tǒng)是負(fù)責(zé)是負(fù)責(zé)DNA分子轉(zhuǎn)錄的啟動子之一，是一種分子轉(zhuǎn)錄的啟動子之一，是一種極強(qiáng)的啟動子。極強(qiáng)的啟動子。影響克隆基因表達(dá)效率的因素影響克隆基因表達(dá)效率的因素 一般而言，所用啟動子的強(qiáng)度、一般而言，所用啟動子的強(qiáng)度、DNA的轉(zhuǎn)錄起始序列、的轉(zhuǎn)錄起始序列、密碼子的選擇、密碼子的選擇、mRNA的二級結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)錄的終止、基因的拷貝的二級結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)錄的終止、基因的拷貝數(shù)等都會在一定程度上影響到轉(zhuǎn)基因的表達(dá)。數(shù)等都會在一定程度上影響到轉(zhuǎn)基因的

17、表達(dá)。a. 啟動子的結(jié)構(gòu)對表達(dá)效率的影響啟動子的結(jié)構(gòu)對表達(dá)效率的影響 大多數(shù)大腸桿菌啟動子都含有兩種保守區(qū)大多數(shù)大腸桿菌啟動子都含有兩種保守區(qū),即即-10區(qū)區(qū)(位位于轉(zhuǎn)錄其始位點(diǎn)上游于轉(zhuǎn)錄其始位點(diǎn)上游5-10bp，故稱為，故稱為-10區(qū)，序列為區(qū)，序列為5-TATAAT)和和-35區(qū)區(qū)(位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游25bp處，一般有處，一般有10bp組成，組成， 5- TTGACA故稱為故稱為-35區(qū)，區(qū)，)。當(dāng)然，實(shí)際的。當(dāng)然，實(shí)際的啟動子中很少具備與上述序列完全一致的區(qū)域，但是研究啟動子中很少具備與上述序列完全一致的區(qū)域，但是研究表明，啟動子的這兩個(gè)區(qū)域與上述保守序列的相似程度

18、越表明，啟動子的這兩個(gè)區(qū)域與上述保守序列的相似程度越高，該啟動子的表達(dá)能力也就越強(qiáng)。另外，這兩個(gè)保守區(qū)高，該啟動子的表達(dá)能力也就越強(qiáng)。另外，這兩個(gè)保守區(qū)間的距離也是影響啟動子強(qiáng)度的重要因素，即這個(gè)間距越間的距離也是影響啟動子強(qiáng)度的重要因素，即這個(gè)間距越是接近于是接近于17bp，啟動子的活性就越強(qiáng)。，啟動子的活性就越強(qiáng)。b. 翻譯起始序列對表達(dá)效率的影響翻譯起始序列對表達(dá)效率的影響 mRNA的有效翻譯依賴于核糖體和其的穩(wěn)定結(jié)的有效翻譯依賴于核糖體和其的穩(wěn)定結(jié)合，大腸桿菌的合，大腸桿菌的mRNA序列中，核糖體的結(jié)合位點(diǎn)是序列中，核糖體的結(jié)合位點(diǎn)是起始密碼子起始密碼子AUG和其上游的和其上游的SD序

19、列。所謂序列。所謂SD序列序列就就是由是由Shine-Dalgarno首先提出的一種位于位于起始密首先提出的一種位于位于起始密碼子上游的一段保守序列，為細(xì)菌核糖體有效結(jié)合和碼子上游的一段保守序列，為細(xì)菌核糖體有效結(jié)合和翻譯起始所必需。一般翻譯起始所必需。一般SD序列的長度約為序列的長度約為3-9bp，位，位于起始密碼子上游于起始密碼子上游3-11堿基的位置，它與堿基的位置，它與16S核糖體核糖體RNA的的3端互補(bǔ)，控制了翻譯的起始。端互補(bǔ)，控制了翻譯的起始。-AGGAGGUXXXAUG- -AGGAGGUXXXAUG- mRNAAUUCCUCCACUAG-AUUCCUCCACUAG-16S r

20、RNA3 末端末端c. 啟動子與克隆基因間的距離對基因表達(dá)的影響啟動子與克隆基因間的距離對基因表達(dá)的影響 研究表明啟動子和目的基因間的距離對基因的研究表明啟動子和目的基因間的距離對基因的表達(dá)效率影響很大，所以在構(gòu)建新的表達(dá)載體時(shí)要考表達(dá)效率影響很大，所以在構(gòu)建新的表達(dá)載體時(shí)要考慮到這一因素的影響。另外，在克隆基因的末端要就慮到這一因素的影響。另外，在克隆基因的末端要就近插入有效的終止子序列，否則會導(dǎo)致細(xì)胞能量的大近插入有效的終止子序列，否則會導(dǎo)致細(xì)胞能量的大量消耗，或是形成不應(yīng)有的二級結(jié)構(gòu)，最終影響的目量消耗，或是形成不應(yīng)有的二級結(jié)構(gòu)，最終影響的目的基因的表達(dá)效率。的基因的表達(dá)效率。Promo

21、terSDAUGGeneTerminatorUAAmRNA蛋白質(zhì)的融合表達(dá)蛋白質(zhì)的融合表達(dá)l融合表達(dá)一般是將基因引入某表達(dá)載體編融合表達(dá)一般是將基因引入某表達(dá)載體編碼的高表達(dá)蛋白（擔(dān)體蛋白）序列的碼的高表達(dá)蛋白（擔(dān)體蛋白）序列的3末端。末端。表達(dá)出來的融合蛋白的表達(dá)出來的融合蛋白的N末端含有由擔(dān)體序末端含有由擔(dān)體序列編碼的片段。列編碼的片段。l融合蛋白可以直接用作抗體，但通常是將融合蛋白可以直接用作抗體，但通常是將N端的擔(dān)體蛋白部分從端的擔(dān)體蛋白部分從C端的目的蛋白中裂解端的目的蛋白中裂解出來，有利于對目的蛋白進(jìn)行生化研究及功出來，有利于對目的蛋白進(jìn)行生化研究及功能分析。方法主要有：化學(xué)裂解法和酶解法。能分析。方法主要有：化學(xué)裂解法和酶解法。蛋白質(zhì)的分泌型表達(dá) 將目的蛋白的基因置于原核蛋白信號肽序列的下游有可能實(shí)現(xiàn)分泌表達(dá)。 實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)分泌表達(dá)有許多有利之處：1.在穿膜過程中信號肽被信號肽酶切除。生產(chǎn)的蛋白質(zhì)和天然蛋白質(zhì)是一致的。2.周質(zhì)中蛋白酶活性低，分泌的蛋白穩(wěn)定。3.周質(zhì)中細(xì)菌的蛋白很少，使得重組蛋白易純化。4.周質(zhì)中提供了一個(gè)氧化環(huán)境，更有利于二硫鍵的正確形成。 因此，對于許多難以純化的蛋白質(zhì)可以通過分泌表達(dá)來實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)。蛋白質(zhì)的包含體形式表達(dá) 重組蛋白在大腸桿菌中高表達(dá)時(shí)，絕大多數(shù)是以包含體形式存在的。 包含體就是表達(dá)的蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)聚集