隱球菌臨床推廣ppt教案資料

1、一瑞生物一瑞生物隱球菌臨床推廣ppt一瑞生物一瑞生物q 隱球菌為圓形菌體，外周有莢膜，內(nèi)有反光孢子，但無菌絲。q 隱球菌屬已知有37個不同的種，但具致病性的多為新型隱球菌，其特點是菌體由一層很厚的多糖莢膜所包被。q 新型隱球菌主要包括新生變種、格特變種等簡 介一瑞生物一瑞生物流行病學(xué)p38個 ICUs of 27個意大利醫(yī)院p384 例真菌感染 (318例侵襲性念珠菌感染；63例霉菌感染；3例隱球菌感染)Tortorano AM et al. Mycoses. 2011, 55: 7379.一瑞生物一瑞生物q HIV感染者q 器官移植患者q 接受大劑量皮質(zhì)類固醇或單克隆抗體（如阿侖單抗、英夫利

2、昔單抗）和/或其他免疫抑制劑治療的患者q 其他無基礎(chǔ)疾病的患者John R. Perfect, etc. Clinical Infectious Diseases 2010; 50:291322 美國感染病學(xué)會的美國感染病學(xué)會的“隱球菌病治療臨床實踐指南（隱球菌病治療臨床實踐指南（2010 年更新）年更新）”中指出，隱球菌病的易感人群主要包括：中指出，隱球菌病的易感人群主要包括：宿主因素一瑞生物一瑞生物流行病學(xué)q 隨著AIDS患者的增多，各種機會性感染的發(fā)病率也隨之上升，新型隱球菌成為繼白色念珠菌之后最常見的機會性感染真菌，其在HIV中的感染率已達8.5%。q 隱球菌性腦膜炎發(fā)生率和死亡率在發(fā)

3、達國家達到10-30%， 在發(fā)展中國家可達到50-100%。q 早期隱球菌感染臨床表現(xiàn)缺乏特異性，腦脊液變化不典型，但是當(dāng)發(fā)展為隱球菌性腦膜炎時，死亡率可達到20%。早期、快速、準(zhǔn)確地診斷很有必要一瑞生物一瑞生物現(xiàn)有檢測手段v墨汁染色（菌體）v真菌培養(yǎng)（活菌）vELISA（莢膜多糖抗原）v乳膠凝集法（莢膜多糖抗原）v膠體金法 （莢膜多糖抗原）一瑞生物一瑞生物1. 印度墨汁染色：印度墨汁染色： 敏感性差，陽性檢出率很低2. 腦脊液或血液培養(yǎng)（金標(biāo)準(zhǔn)）：腦脊液或血液培養(yǎng)（金標(biāo)準(zhǔn)）： 陽性檢出率低，培養(yǎng)（2-10天）及鑒定時間長，易誤診3. 抗原檢測試驗：抗原檢測試驗： 腦脊液和血清樣本抗原檢測的敏

4、感性可達到97%和87%*，能實現(xiàn)早期快速診斷* Tyler Warkentien, MD. Int J STD AIDS. 2010 October ; 21(10): 679684.現(xiàn)有檢測手段一瑞生物一瑞生物隱球菌莢膜多糖抗原q 由3種不同的單糖聚合而成q 是引起病理變化的主要毒性因子q 在菌體生長和繁殖過程中，GXM不斷分泌到胞外q 通過發(fā)揮免疫抑制作用和免疫調(diào)理作用影響宿主免疫系統(tǒng) Oscar Zaragoza, etc.Adv Appl Microbiol. 2009, 68: 133216隱球菌莢膜多糖抗原隱球菌莢膜多糖抗原GXM (Glucuronoxylomannan, GX

5、M) ：莢膜多糖抗原是隱球菌特有的分泌物，可以作為隱球菌感染的診斷依據(jù)一瑞生物一瑞生物 隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一 產(chǎn)品介紹產(chǎn)品介紹二 臨床意義及適用科室臨床意義及適用科室三 相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)四一瑞生物一瑞生物隱球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）原理一瑞生物一瑞生物隱球菌抗原檢測試劑盒（膠體金免疫層析法）v試劑盒組成 隱球菌抗原檢測試紙條50條 樣本稀釋液 滴定液 陽性對照v穩(wěn)定性/儲存方法 2年有效期 室溫儲存一瑞生物一瑞生物特 點v無需樣本預(yù)處理v10分鐘得到結(jié)果v定性或半定量測定v結(jié)果客觀v血清，腦脊液，血漿一瑞生物一瑞生物樣本收集及制備v按照無菌操作收集腦脊液、血漿和血清樣

6、本。v樣本最多可以在 2-8放置 72 小時。v不反復(fù)凍融的情況下，樣本可以在-20以下保存更長時間。v樣本在運輸過程中應(yīng)保持在 2-8或者-20以下。一瑞生物一瑞生物定性檢測操作步驟v簡單簡單5步，步，10分鐘得到結(jié)果分鐘得到結(jié)果一瑞生物一瑞生物 注意：若對照條帶未出現(xiàn)，則說明該檢測無效，應(yīng)重新檢測。定性檢測結(jié)果 一瑞生物一瑞生物半定量檢測操作步驟v 1、以 1:5 作為初始稀釋濃度，依次 1:2 稀釋至 1:2560。 分別放置于10 個微離心管中并編號1-10。v 2、向 1 號試管中加入 4 滴樣本稀釋液。v 3、分別向標(biāo)號 2-10 的試管中加入 2 滴滴定液。v 4、將 40 L

7、樣本加入 1 號試管并混勻。v 5、從 1 號試管中吸取 80 L 樣本混合液轉(zhuǎn)移至 2 號試管并混勻，依次進行稀釋直至 10 號試管。v 6、10 號試管中吸取 80 L 樣本混合液并丟棄以保證試管內(nèi)最終體積為 80 L。v 7、將試紙條的白端分別沒入試管中。v 8、等待 10 分鐘，讀取并記錄實驗結(jié)果。一瑞生物一瑞生物半定量檢測操作步驟一瑞生物一瑞生物半定量檢測操作步驟-2一瑞生物一瑞生物半定量檢測(滴度)結(jié)果 對于半定量滴定檢測，患者的滴度應(yīng)報告為產(chǎn)生陽性結(jié)果的最高稀釋度。一瑞生物一瑞生物質(zhì)量控制v陽性對照：將陽性對照：將 1 滴樣本稀釋液加入試管中，再加滴樣本稀釋液加入試管中，再加入入

8、 1 滴隱球菌抗原陽性對照。滴隱球菌抗原陽性對照。v陰性對照為：將陰性對照為：將 2 滴樣本稀釋液加入試管中。滴樣本稀釋液加入試管中。v分別插入試紙條，分別插入試紙條，10 分鐘后讀取結(jié)果。分鐘后讀取結(jié)果。v依據(jù)本地、國家的法規(guī)及認證機構(gòu)的指導(dǎo)方針或要求，可能需要做額外的質(zhì)控檢測。一瑞生物一瑞生物膠體金法和培養(yǎng)/墨汁染色對比CrAg LFA package insert (IMMY)靈敏度靈敏度特異性特異性膠體金法試劑盒95.83%99.84%墨汁染色86.39%100.00%真菌培養(yǎng)60.72%100.00%一瑞生物一瑞生物膠體金法和ELISA/乳膠凝集法對比血清型靈敏度血清型靈敏度(ng

9、隱球菌抗原隱球菌抗原/ml)A (新型隱球菌)B (哥特隱球菌)C(哥特隱球菌)D (新型隱球菌)IMMY 膠體金法膠體金法1198IMMY 乳膠凝集法乳膠凝集法284738062ELISA28232,000770其他廠家乳膠凝集法其他廠家乳膠凝集法193794054TR Kozel, Clin. Vaccine Immunol. (2011) 18:1292TR Kozel, 8th International Conference on Cryptococcus and Cryptococcosis (2011)靈敏度遠遠高于其他方法一瑞生物一瑞生物隱球菌抗原分布時間感染感染血液血液腦脊液

10、腦脊液肺部肺部腦膜炎腦膜炎肺以外肺以外無癥狀無癥狀癥狀癥狀膠體金法膠體金法隱球菌抗原檢測隱球菌抗原檢測的其他方法的其他方法Adapted from Kozel and Bauman, Expert Opin. Med. Diagn. (2012) 6:245一瑞生物一瑞生物膠體金法和乳膠凝集法對比 膠體金法膠體金法乳膠凝集法乳膠凝集法檢測時間檢測時間10 分鐘分鐘長達長達60分鐘分鐘樣品預(yù)處理樣品預(yù)處理無需無需需要需要(蛋白酶處理血清蛋白酶處理血清)樣品類型樣品類型血清血清, 腦脊液腦脊液, 血漿血漿血清和腦脊液血清和腦脊液儲存儲存室溫室溫冷藏冷藏一瑞生物一瑞生物 隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀隱球菌病

11、感染診斷現(xiàn)狀一 產(chǎn)品介紹產(chǎn)品介紹二 適用科室及臨床意義適用科室及臨床意義三 相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)四一瑞生物一瑞生物適用科室及臨床意義新型隱球菌感染可發(fā)生于全身多個部位，最常見的感染主要發(fā)生在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肺部、皮膚等。一瑞生物一瑞生物v 中樞神經(jīng)系統(tǒng)隱球菌病-神經(jīng)內(nèi)科 隱球菌侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見，包括腦膜炎或亞急性腦膜炎、散播型腦膜炎等。 臨床癥狀：臨床癥狀：首發(fā)癥狀間歇性頭痛、惡心及嘔吐，伴低首發(fā)癥狀間歇性頭痛、惡心及嘔吐，伴低熱、周身不適、精神不振等非特異性癥狀。隨病情發(fā)展熱、周身不適、精神不振等非特異性癥狀。隨病情發(fā)展，頭痛漸加重轉(zhuǎn)為持續(xù)性、精神異常、躁動不安，嚴(yán)重，頭痛漸加重轉(zhuǎn)為持續(xù)性、

12、精神異常、躁動不安，嚴(yán)重者出現(xiàn)不同程度意識障礙。者出現(xiàn)不同程度意識障礙。v 肺隱球菌病-呼吸科 肺部是隱球菌侵入的門戶 適用科室及臨床意義一瑞生物一瑞生物v 皮膚黏膜隱球菌病-皮膚科 10%15%的隱球菌病患者出現(xiàn)皮膚損害，比如出現(xiàn)丘疹、水皰、丘疹、水皰、膿皰、傳染性軟疣樣丘疹、痤瘡樣膿皰膿皰、傳染性軟疣樣丘疹、痤瘡樣膿皰等癥狀。 v 兒童腦膜炎-兒科 兒童由于免疫系統(tǒng)不健全，也容易被隱球菌感染，一般兒童的腦脊液樣本都會做隱球菌篩查v 免疫缺陷人群-感染科、器官移植科、ICU等 新型隱球菌作為一種機會性感染真菌，主要侵犯免疫缺陷人群，如器官移植患者以及AIDS患者及使用免疫抑制劑人群等。 適用

13、科室及臨床意義一瑞生物一瑞生物臨床意義u 在撒哈拉以南的非洲地區(qū)，隱球菌腦膜炎是造成艾滋患在撒哈拉以南的非洲地區(qū)，隱球菌腦膜炎是造成艾滋患者死亡的一種重要疾病，隱球菌抗原可以在病癥發(fā)生的幾者死亡的一種重要疾病，隱球菌抗原可以在病癥發(fā)生的幾周前被檢測到。周前被檢測到。u 隱球菌抗原的檢測對于隱球菌腦膜炎的預(yù)防有非常積極隱球菌抗原的檢測對于隱球菌腦膜炎的預(yù)防有非常積極的作用。的作用。一瑞生物一瑞生物臨床意義 篩查了篩查了HIVHIV感染病人感染病人進行隱球菌抗原預(yù)防的進行隱球菌抗原預(yù)防的成本效益，使用隱球菌成本效益，使用隱球菌抗原抗原可以顯著降低成本可以顯著降低成本一瑞生物一瑞生物臨床意義 莢膜多

14、糖抗原是隱球菌特有的分泌物，是隱球菌感染確診的依據(jù)。 在感染的初期，莢膜多糖抗原就被檢測到，因此是隱球菌病早期診斷的標(biāo)志物。 隨著病情的發(fā)展，莢膜多糖抗原的含量會隨之發(fā)生變化，還可作為病情監(jiān)測的指標(biāo)。一瑞生物一瑞生物G實驗：實驗：q 檢測真菌細胞壁特有成分1,3-D-葡聚糖q 吞噬細胞將菌吞噬消化后釋放1,3-D-葡聚糖到血液q 不能檢測到的真菌：隱球菌和接合菌（包括毛霉菌、根霉菌等） G實驗檢測隱球菌為陰性結(jié)果的原因：實驗檢測隱球菌為陰性結(jié)果的原因：q 隱球菌含1,3-D-葡聚糖的量少q 莢膜很厚，不易被吞噬細胞消化聯(lián)合檢測的意義一瑞生物一瑞生物聯(lián)合檢測的意義一瑞生物一瑞生物 隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一 產(chǎn)品介紹產(chǎn)品介紹二 適用科