銀杏黃酮磷脂復(fù)合物對大鼠心肌再灌注血管內(nèi)皮損傷的保護作用

1、銀杏黃酮磷脂復(fù)合物對大鼠心肌再灌注血管內(nèi)皮損傷的保護作用<    【摘要】  目的： 探討銀杏黃酮磷脂復(fù)合物對大鼠心肌缺血再灌注血管內(nèi)皮損傷的保護作用。方法： 健康Wister大鼠40只，隨機分為假手術(shù)組、模型組、銀杏黃酮組及銀杏黃酮磷脂復(fù)合物組，每組10只，檢測各組血漿內(nèi)皮素（ET1）、前列環(huán)素（PGI2）、血栓素A2 (TXA2)水平及血清一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）活性。結(jié)果： 銀杏黃酮磷脂復(fù)合物對心肌缺血30min再灌注120min大鼠，可明顯降低血清NO及MDA含量，而使SOD活性增強，亦使血

2、漿ET1 、TXA2水平下降， PGI2水平及PGI2/TXA2比值明顯增高，且變化較銀杏黃酮顯著。 結(jié)論： 銀杏黃酮磷脂復(fù)合物對大鼠心肌再灌注血管內(nèi)皮損傷具有明顯的保護作用，可能與其增強抗氧化酶活性，減少自由基對內(nèi)皮細胞的氧化損傷，減少內(nèi)源性血管活性物質(zhì)ET1釋放，糾正PGI2TXA2失衡等機制有關(guān)。 【關(guān)鍵詞中華論文網(wǎng)()歡迎您！】  銀杏黃酮； 銀杏黃酮磷脂復(fù)合物； 心肌缺血再灌注損傷； 自由基銀杏黃酮(flavonoids)系銀杏葉中提取的有效成分，具有舒張血管、擴張微循環(huán)口徑、保護血管內(nèi)皮、改善血流灌注等作用。臨床上主要用于冠心病、心絞痛、腦血管疾患、腦損傷后遺癥等的 治療

3、 。銀杏黃酮磷脂復(fù)合物是將銀杏黃酮與磷脂在一定條件下反應(yīng)制得的一類物質(zhì)，它的理化性質(zhì)較銀杏黃酮有很大變化，而且磷脂是生物膜的重要組成部分，從而使磷脂復(fù)合物的生物性質(zhì)有了很大改善，大大提高了銀杏黃酮的生物利用度。本研究采用大鼠復(fù)制心肌缺血再灌注損傷模型，觀察銀杏黃酮磷脂復(fù)合物對缺血再灌注心肌內(nèi)皮損傷保護方面的影響，探討其心血管藥理作用，以期為該藥的臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)的藥 理學(xué) 資料。    1  材料與方法    1  動物    健康Wister大鼠40只，雌雄各半，體重300g左右，合

4、格證號：魯動質(zhì)字0004358，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實驗動物中心提供。    1.2  藥品及試劑    銀杏黃酮及磷脂由濰坊醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室提供；一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒，由南京建成生物工程研究所提供；內(nèi)皮素(ET)放免藥盒、6-酮前列腺素Fl(6-Keto-PGF1)放免藥盒及血栓素B2(TXB2)放免藥盒由解放軍總 醫(yī)院 科技開發(fā)中心放免研究所（原北京東亞免疫技術(shù)研究所）提供。    1.3  主要儀器  

5、  BL-420F生物技能實驗系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司；DH-150型動物人工呼吸機,浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器廠；紫外可見分光光度計，上海尤尼柯儀器有限公司；磁力攪拌器，深圳天南海北實業(yè)有限公司；恒溫水浴箱，江蘇省金壇市大地自動化儀器廠。    1.4  試驗方法    1.4.1  藥品制備  銀杏黃酮溶于丙酮中加溫至60按1:1摩爾比加入大豆磷脂攪拌成溶液狀態(tài)過濾，收集濾液-減壓除去反應(yīng)溶劑加入適量氯仿，充分溶解其中的磷脂復(fù)合物過濾，收集濾液減壓蒸餾將氯仿蒸干，60真空干燥24h，收集固體，為黃褐

6、色粉末，置干燥器中保存。    1.4.2  分組與給藥  實驗前先進行動物篩選，心電圖檢查無異常者進入實驗。將40只大鼠隨機分成4組，每組10只。在造模前，每日灌胃1次，共灌胃14d。其中第1組（假手術(shù)組）與第2組（模型組）灌胃生理鹽水2 ml；第3組（銀杏黃酮組）：灌胃銀杏黃酮生理鹽水混懸液（按銀杏黃酮0.079g/kg）2ml；第4組（銀杏黃酮磷脂復(fù)合物組）：灌胃銀杏黃酮磷脂復(fù)合物生理鹽水混懸液（按銀杏黃酮磷脂復(fù)合物0.237g/kg，其中含銀杏黃酮0.079g/kg）2ml。第14天灌胃后1h開始造模，除假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎外，其余各組

7、均結(jié)扎30min,再灌注120min。    1.4.3  造模  大鼠冠脈結(jié)扎按 文獻中華論文網(wǎng)()歡迎您！ 1方法稍加改進。于最后一次灌胃1h后，3%戊巴比妥鈉（45mg/kg）腹腔麻醉，仰臥位固定，接BL-420F生物技能實驗系統(tǒng),用標準肢體二導(dǎo)連記錄心電圖。頸部去毛，切開皮膚，分離頸前肌，暴露氣管，行氣管插管。插管另端接于動物人工呼吸機行正壓呼吸(呼吸比1:2，呼吸頻率60次min，潮氣量13mLkg)。胸部去毛、消毒，距胸骨左側(cè)旁0.5cm處第3、4肋骨表面縱行切開皮膚及皮下組織約2cm，血管鉗夾閉肋間外肌及小血管，小彎鑷分別從第3、

8、4肋兩側(cè)肋間隙穿過夾回結(jié)扎線，扎緊肋間動脈，剪斷第3、4肋骨后向左右兩側(cè)輕拉，打開胸膜和心包。以左冠狀動脈主干為標志，在左心耳根部下方2mm處進針，除假手術(shù)組僅穿線不結(jié)扎外，其余各組均以3/0絲線穿過左冠狀動脈下方的心肌表層在肺動脈圓錐旁出針，待心電圖恢復(fù)穩(wěn)定10min后，結(jié)扎左冠狀動脈左前降支，結(jié)扎時將硅膠管置于結(jié)扎線與血管之間，使硅膠管壓迫引起冠脈閉塞。結(jié)扎前、后及再通記錄導(dǎo)聯(lián)心電圖，以結(jié)扎部位以下心肌變蒼白、搏動減弱且心電圖ST段弓背向上抬高達0.1mv或T波高聳，QRS波波形寬大畸形為結(jié)扎成功的標志; 解開結(jié)扎線后QRS波振幅逐漸回落，抬高的ST段回落，缺血區(qū)顏色恢復(fù)為再通成功的標志。

9、    缺血30min，再灌注120min，心臟采血。采血共分3部分，第1部分取血2ml注入含10%EDTA-Na2 30 ul和抑肽酶40 ul的離心管中混勻,43000rpm離心10min，分離血漿，放-20保存,用于檢測ET1;第2部分取一次性5ml空針吸取消炎痛-EDTA.Na2液約0.3 ml，取血4ml，即刻在空針內(nèi)顛倒混勻，沿試管壁緩慢注入離心管內(nèi)，4離心3500rpm，15min，分離血漿，放-20保存，用于檢測PGI2和TXA2；第3部分取一次性5ml空針取血3ml,注入試管中靜置30min，2500 rpm，15min，分離血清，放-20保存，

10、用于檢測NO、MDA和SOD。    1.4.4  檢測指標和方法  用放射免疫分析法2測定血漿內(nèi)皮素（ET1）、前列環(huán)素(PGI2 )和血栓素A2（TXA2）的代謝產(chǎn)物6酮前列腺素F1(6-Keto-PGF1)和TXB2水平；血清NO、SOD、MDA含量嚴格按試劑盒說明書操作測定。測定工作在濰坊醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)實驗室和濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院完成。    1.5  統(tǒng)計學(xué)處理    所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差(x±s )表示。采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，經(jīng)方差齊性檢驗和正態(tài)性檢驗后，進行單因素方差分析，組間均數(shù)差異比較采用q檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。    2  結(jié)果     各組大鼠血漿中ET1、PGI2、TXA2含量及PGI2/TXA2比值比較結(jié)果見表1。    從表1可見，模型組各項指標與假手術(shù)組比較，均有顯著差異(P<0.01 )，表明缺血再灌注后血漿中縮血管物質(zhì)明顯升高，而擴血管物質(zhì)明顯降低，PGI2與TXA2的比例失調(diào)，造模成功。兩藥物組各項指標與模型組相比，亦有顯著差