酸棗仁藥材總黃酮提取工藝研究

1、    酸棗仁藥材總黃酮提取工藝研究 王勇,魏娜,朱智云作者單位：海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南 海口【摘要】目的：優(yōu)化酸棗仁總黃酮醇提取工藝。方法：以浸膏收率和總黃酮含量為指標，采用正交實驗設(shè)計，考察乙醇用量、乙醇濃度、提取時間和提取次數(shù)，優(yōu)化酸棗仁中總黃酮的醇提取工藝條件。結(jié)果：優(yōu)化的醇提取條件為加乙醇量與酸棗仁量之比為91，乙醇濃度為60%，提取時間1 h，提取2次。結(jié)論：該提取工藝合理，方法簡便，可作為酸棗仁總黃酮醇提取生產(chǎn)工藝的參考。【關(guān)鍵詞】 酸棗仁;總黃酮;紫外分光光度法;正交設(shè)計;提取工藝ABSTRACT Objective： To optimi

2、ze the extraction process of total flavonoids from Ziziphi spinosae Semen. Methods： The factors that affect the extraction process such as the amount of ethanol，the concentration of ethanol， fluxing time and extraction times were investigated by orthogonal design experiments with the yield of dry ex

3、tract and the content of total flavonoids as indices. Results： The optimum extraction technology was that the crude drug powder was extracted by 9 times equivalent volume of 60% ethanol for 1 h in 2 cycles. Conclusions： It is proved that the method is reasonable and simple， which can provide a refer

4、ence for the production of Ziziphi spinosae Semen.KEY WORDS Ziziphi spinosae Semen; Total flavonoids; Ultraviolet spectrophotometry; Orthogonal experiments; Extraction process目前，焦慮、失眠等癥狀不斷困擾著現(xiàn)代人的正常生活，對于具有改善睡眠功能中藥的研究開發(fā)日益迫切。酸棗仁的藥用功能主要為養(yǎng)心、安神、斂汗。用于虛煩不眠，驚悸多夢，體虛多汗，津傷口渴1。近年研究還表明酸棗仁對心血管系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)有明顯的調(diào)節(jié)作用2。酸棗仁(

5、ziziphi spinosae semen)為鼠李科植物酸棗(ziziphus jujuba mill.var.spinosa huex H.F.Chou)的干燥成熟種子，是較為常用的鎮(zhèn)靜催眠中藥。有文獻報道，酸棗仁中含有脂肪油，皂苷，黃酮等多種物質(zhì)，黃酮類為其主要有效成份之一3。中藥中，黃酮類化合物的含量測定方法主要有紫外分光光度法、可見分光光度法和高效液相色譜法4。在提取工藝方面，目前國內(nèi)學(xué)者多采用溶劑提取法、超聲波提取法和復(fù)合酶法5。其中，在溶劑提取法中多采用正交設(shè)計，以酸棗仁中總黃酮苷得率為考察指標，篩選酸棗仁中黃酮苷的最佳提取工藝條件。這些提取工藝研究都為充分開發(fā)和利用酸棗仁資源提

6、供了科學(xué)依據(jù)。本研究對酸棗仁藥材中黃酮類成分的提取主要采用乙醇提取，設(shè)計了L9(34)正交試驗，以浸膏提取率和斯皮諾素(spinosin)含量為指標，獲得最佳提取工藝，為后續(xù)藥效學(xué)、制劑學(xué)實驗奠定基礎(chǔ)，為酸棗仁新產(chǎn)品開發(fā)提供理論依據(jù)。1試藥與儀器1.1試藥酸棗仁藥材購自河北省內(nèi)丘縣酸棗仁軍景加工廠，經(jīng)鑒定為鼠李科植物酸棗的干燥成熟種子，斯皮諾素對照品(純度：98.5% ，上海TAUTO生物公司，批號：09051321)，石油醚 (6090) (分析純，天津大茂化學(xué)試劑廠),95%乙醇(藥用級，洛陽市化學(xué)試劑廠)。1.2儀器116搖擺式六兩裝高速中藥粉碎機(海南佳惠食品機構(gòu))，F(xiàn)A1104型電子

7、天平(德國賽多利斯儀器有限公司)，衡新ACS系列電子秤(中山市衡新電子有限公司)，DK-98-11A型電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)，R-205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申勝生物技術(shù)有限公司),98-1-B型電子調(diào)溫電熱套(天津泰斯特儀器有限公司)，GZX-9240ME型數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)，JASCO紫外可見分光光度計 (日本分光光度儀器公司)。2方法與結(jié)果2.1正交實驗設(shè)計參考酸棗仁的主要成分和理化性質(zhì)的相關(guān)文獻報道4,6，酸棗仁黃酮類化合物易溶于醇，對酸棗仁進行乙醇提工藝研究。以乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)、提取時間為考察因素，每因素設(shè)計3個水平，以浸膏收率

8、、總黃酮含量作為考察指標，按L9(34)正交試驗表安排試驗，平行操作，因素水平見表1。表1酸棗仁正交實驗因素水平表2.2酸棗仁醇提液中總黃酮含量的測定2.2.1對照品溶液儲備液的制備精密稱取spinosin 1.34 mg，用蒸餾水溶解，配制成0.134 mg/mL的溶液，作為對照品溶液儲備液。2.2.2供試品溶液的制備分別取定容到100 mL的酸棗仁提取液10 mL，用20 mL石油醚萃取3次，水層加水稀釋至100 mL，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，加水稀釋至25 mL，搖勻，得供試品溶液。2.2.3測定波長的選擇取供試品溶液及對照品溶液適量，在200400 nm波長范圍內(nèi)掃描，發(fā)現(xiàn)

9、對照品溶液在270 nm或335 nm附近有最大吸收峰，試驗選擇測定波長為335 nm。見圖1。AB圖1spinosin(A)波長掃描圖和酸棗仁供試品溶液(B)波長掃描圖2.2.4 標準曲線的制備分別精密吸取spinosin對照品儲備溶液0.25 mL,0.5 mL,1 mL,1.5 mL,2 mL,2.5 mL至10 mL 容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，于335 nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，對照品溶液濃度為橫坐標，得標準曲線為Y=0.036 5X(r=0.999 6)。對照品溶液濃度在3.3533.5 g/mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。2.2.5供試品溶液的測定方法將定容到25 m

10、L的供試品溶液，以蒸餾水為空白對照，在335 nm波長處測定吸光度值。將測定的結(jié)果代入線性方程，計算醇提取液中總黃酮的含量。2.3提取工藝2.3.1試驗安排及結(jié)果分別稱取酸棗仁粉末(過20目篩)9份，每份100 g，按表2醇提正交試驗表加入相應(yīng)濃度及用量的乙醇，提取相應(yīng)的次數(shù)及時間，用紗布(200目)濾過，回收乙醇，濃縮后，冷卻，用蒸餾水稀釋到100 mL，搖勻。以浸膏收率、總黃酮含量為考察指標，其中浸膏收率權(quán)重系數(shù)為0.3，總黃酮含量權(quán)重系數(shù)為0.7。篩選酸棗仁藥材總黃酮提取的最佳工藝，具體的試驗安排及結(jié)果見表2。2.3.2浸膏收率測定精密量取25 mL提取液置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸

11、干后，于105 干燥3 h，冷卻30 min后，稱重。其浸膏得率計算公式為：浸膏得率=M2-M125×100藥材總重×(1-11.52%)×100%(注：M1為蒸發(fā)皿凈重量，M2為干燥后蒸發(fā)皿和浸膏重量，11.52%為酸棗仁藥材含水量)2.3.3醇提取液中總黃酮的測定分別精密量取九份正交實驗供試品溶液各2份，每份10 mL，用20 mL石油醚萃取3次，水層加水稀釋至100 mL，濾過，取續(xù)濾液1 mL，定容至25 mL，以蒸餾水為空白，于335 nm處測定吸光度值。將測定的結(jié)果代入線性方程，計算醇提取液中總黃酮的含量?？傸S酮含量的計算公式為：黃酮含量=A/0.03

12、65M×(1-11.52%)×2.5×10-2×100%(注：A為吸光度，M為藥材總重，11.52%為酸棗仁藥材含水量)2.3.4直觀分析(極差分析)結(jié)果表2L9(34)正交試驗結(jié)果2.3.5方差分析結(jié)果結(jié)果表明，乙醇用量和提取次數(shù)對實驗結(jié)果有顯著性影響(P0.05)，乙醇濃度和提取時間對結(jié)果影響不大(P0.05)。綜合考慮，最后確定最佳提取工藝條件為9倍量60%乙醇，加熱回流2次，每次1 h。表3方差分析結(jié)果2.4最佳提取工藝驗證根據(jù)以上優(yōu)化工藝，制備3批樣品，進行工藝驗證試驗。見表4。表4總黃酮含量及浸膏收率3討論3.1波長的選擇試驗中對照品spin

13、osin溶液與酸棗仁供試品溶液進行波長掃描發(fā)現(xiàn)，spinosin溶液在270 nm及335 nm附近有最大吸收峰，與藥典及相關(guān)文獻相符;而酸棗仁供試品溶液在270 nm及325 nm附近有最大吸收峰。這可能與藥品質(zhì)量、供試品中化學(xué)成分、溶劑選擇等有關(guān)。參考藥典和相關(guān)文獻1,4,6，本研究最終選擇335 nm為測定波長。3.2提取工藝本研究由表2確定的最佳提取工藝應(yīng)為9倍量60%乙醇，提取2次，每次1.5 h;由表3方差分析結(jié)果得出乙醇用量和提取次數(shù)對試驗結(jié)果有顯著性差異(P0.05)，乙醇濃度和提取時間影響不大(P0.05)。考慮到降低成本，本研究最后確定最佳提取工藝條件為加入9倍量，60%

14、乙醇，加熱回流2次，每次1 h。驗證性實驗表明工藝條件較穩(wěn)定。與文獻報道最佳工藝條件有一定差異，可能與設(shè)置的水平和選取的考察指標有關(guān)?！緟⒖嘉墨I】1中華人民共和國國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2010年版一部)S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：343.2彭智聰，朱建軍. 酸棗仁化學(xué)成分及藥理研究進展J. 時珍國醫(yī)國藥，2001,12(1)：86-87.3袁昌魯，王中博，焦瑩，等. 酸棗仁中黃酮類鎮(zhèn)靜催眠有效成分的研究J. 中藥通報， 1987,9(21)：34-35.4梁柱華，楊建設(shè)，楊藝虹，等. 酸棗仁中總黃酮的含量測定研究J.分析測試技術(shù)與儀器，2008,14(1)：34-37.5

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