麋鹿角醇提液對(duì)衰老小鼠的抗氧化作用

1、麋鹿角醇提液對(duì)衰老小鼠的抗氧化作用【摘要】目的觀察麋鹿角醇提液對(duì)D-半乳糖（D-gal）誘導(dǎo)衰老模型小鼠的抗氧化作用。方法取ICR小鼠54只，雌雄兼用，隨機(jī)分成4組：正常對(duì)照組（NG，n=12），模型對(duì)照組（MG，n=14），麋鹿角醇提液低劑量組（LG，2 gkg-1d-1，n=14），麋鹿角醇提液高劑量組（HG，4 gkg-1d-1，n=14）。正常對(duì)照組給予背部皮下注射生理鹽水，其余各組用D-半乳糖（D-gal）按120 mgkg-1d-1背部皮下注射6周，造成亞急性衰老模型。造模同時(shí)，麋鹿角醇提液低劑量組和高劑量組分別給予相應(yīng)濃度的麋鹿角醇提液，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予相同容積的0.5

2、% 羧甲基纖維素鈉（CMC）。然后測(cè)定小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量，并測(cè)定腦中的脂褐質(zhì)（LP）含量以及肝中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性。結(jié)果模型小鼠血清中SOD以及肝中GSH-Px活力均下降，血清中MDA以及腦中的LP含量均升高；而麋鹿角醇提液能提高衰老小鼠血清中SOD的活力，并減少血清中MDA及腦中LP含量。結(jié)論麋鹿角醇提液對(duì)D-gal誘導(dǎo)衰老小鼠具有抗氧化作用。 【關(guān)鍵詞】 麋鹿角 衰老模型 D-半乳糖 抗氧化Antioxidation of Elk Antlers Ethanolic Extract on Aging Model MiceQIN H

3、ongbing, YANG Zhaoye, XIONG Cunquan, ZHU Qing(Yancheng Health Vocational and Technical College，Yancheng 224006, China; Department of Pharmacology, Medical College of Nantong University，Nantong 226001, China)Abstract：ObjectiveTo investigate the antioxidation of Elk antlers ethanolic extract on aging

4、model mice induced by D-galactose. Methods54 ICR mice were randomly divided into 4 groups: normal control group (NG, n=12), model control group (MG，n=14), low-dose drug treatment group (LG，2 gkg-1d-1，n=14), high-dose drug treatment group (HG，4 gkg-1d-1，n=14).NG was subcutaneously injected with salin

5、e, other groups were given subcutaneously injection of D-galactose (D-gal) at 120 mg/kg per day for six weeks to produce subacute aging model. At the same time LG was orally administered Elk antlers ethanolic extract at dose 2 g/kg and HG at 4 g/kg per day. NG and MG were given orally the same volum

6、e 0.5% carboxymethyl cellulose sodium. Then the activity of superoxide dismutase（SOD）and the content of malondialdehyde (MDA) in serum were detected. The lipofuscin content in brain and glutathione peroxidase (GSH-Px) activity in liver were determined.ResultsThe activities of SOD and GSH-Px were dec

7、reased and the contents of MDA and LP were increased in model mice. Elk antlers ethanolic extract could enhance the SOD activity and reduce the content of MDA and LP in model mice. ConclusionElk antlers ethanolic extract has antioxidation on aging model mice induced by D-gal.Key words：Elk antlers; A

8、ging model; D-galactose; Antioxidation 麋鹿角為古方記載之傳統(tǒng)補(bǔ)益類名貴中藥，傳統(tǒng)中醫(yī)臨床應(yīng)用已經(jīng)證實(shí)麋鹿角具有強(qiáng)精益血、滋陰壯陽(yáng)等作用。因歷史原因，麋鹿在我國(guó)已近絕滅，麋鹿角幾乎無(wú)藥可用。如今，人工繁殖技術(shù)的成功確保了藥用資源和生態(tài)環(huán)境的協(xié)調(diào)發(fā)展，為麋鹿角恢復(fù)藥用提供了來(lái)源1。目前，江蘇大豐糜鹿保護(hù)區(qū)麋鹿已由1986年的39頭繁殖到一千三百多頭，并且野生放養(yǎng)自然繁殖成功，野生種群數(shù)達(dá)一百多頭，每年自然脫落下來(lái)的麋鹿角也越來(lái)越多，現(xiàn)已達(dá)3 000 kg，這為其開發(fā)研究提供了充足的物質(zhì)基礎(chǔ)。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)麋鹿角的乙醇提取物具有耐疲勞、抗衰老的藥理作用2。

9、本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠模型，觀察麋鹿角醇提液對(duì)衰老模型小鼠的抗氧化作用，探討麋鹿角抗衰老的作用機(jī)制，為麋鹿角的開發(fā)利用提供相關(guān)的理論依據(jù)。1 材料1.1 動(dòng)物ICR小鼠54只，體質(zhì)量（182） g，雌雄兼用，由南通大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供合格證：SYXK（蘇）2007-0021。1.2 受試藥物配制及試劑麋鹿角，由江蘇大豐麋鹿保護(hù)區(qū)提供，將麋鹿角刨片、粉碎成約100目粉末，準(zhǔn)確稱取麋鹿角粉末200 g，加入70%乙醇溶液浸泡3次，48 h/次，合并浸泡液并過(guò)濾，然后減壓蒸餾，濃縮至80 ml，即為麋鹿角乙醇提取濃縮液，濃度為2.5 g/ml。用0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC)溶液配制成所

10、需濃度的麋鹿角醇提液備用。D-半乳糖為美國(guó)Amerisco公司產(chǎn)品，超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、脂褐質(zhì)（LP）以及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。2 方法2.1 分組與給藥54只ICR小鼠，雌雄兼用，隨機(jī)分成4組：正常對(duì)照組（NG，n=12），模型對(duì)照組（MG，n=14），麋鹿角醇提液低劑量組（LG，2 g/kg，n=14），麋鹿角醇提液高劑量組（HG，4 g/kg，n=14）。正常對(duì)照組按0.1 ml/10 g給予背部皮下注射生理鹽水，其余各組用D-半乳糖（D-gal）按120mg/kg背部皮下注射6周，1次/d，造成亞急性衰老模型。造

11、模同時(shí)，麋鹿角醇提液低劑量組灌胃生藥劑量2 g/kg麋鹿角醇提液（0.2 g/ml麋鹿角醇提液，給藥容積0.1 ml/10g），高劑量組給予灌胃生藥劑量4 g/kg麋鹿角醇提液（0.4 g/ml麋鹿角醇提液，給藥容積0.1 ml/10g），正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予相同容積的0.5% 羧甲基纖維素鈉。2.2 老化相關(guān)產(chǎn)物及抗氧化酶的測(cè)定末次給藥30 min 后，眼眶取血，3 000 r/min，離心10 min，取血清按試劑盒說(shuō)明書中方法測(cè)定SOD 的活力和MDA 的含量。然后處死小鼠，取小鼠的腦組織與肝組織，加入預(yù)冷生理鹽水進(jìn)行勻漿，然后按試劑盒中提供方法測(cè)定腦中脂褐質(zhì)（LP）含量以及肝中G

12、SH-Px活性。2.3 統(tǒng)計(jì)方法數(shù)據(jù)用s表示，用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)。以P0.05作為統(tǒng)計(jì)顯著性差異標(biāo)準(zhǔn)。3 結(jié)果3.1 一般情況衰老模型組連續(xù)給D-半乳糖6周后，毛色逐漸枯槁無(wú)光澤，易脫落，皮膚彈性差，精神萎靡，倦怠嗜睡，群體喜扎堆，進(jìn)食明顯減少，體重增加緩慢，呈現(xiàn)出明顯衰老體征（見表1），各組小鼠初始體質(zhì)量基本一致，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與正常組比較，模型組的末次體質(zhì)量和增重都有所降低（P0.05）。表1 D-gal誘導(dǎo)衰老模型小鼠體質(zhì)量變化情況(略)3.2 麋鹿角醇提液對(duì)衰老小鼠的抗氧化作用如表2 所示，模型小鼠血清中MDA含量及腦中LP含量增加，麋鹿角醇提

13、液低劑量與高劑量組均能降低血清中MDA含量（P0.05），麋鹿角醇提液高劑量組可以減少腦中LP的含量（P0.05）。如表3 所示，模型小鼠血清中SOD及肝中GSH-Px活力下降，麋鹿角醇提液低劑量與高劑量組均能提高血清中SOD活力（P0.05）。表2 麋鹿角乙醇提取液對(duì)小鼠老化相關(guān)產(chǎn)物的影響，表3 麋鹿角醇提取液對(duì)D-gal衰老模型小鼠抗氧化酶活性的影響(略)。4 討論 根據(jù)衰老的代謝學(xué)說(shuō),衰老是機(jī)體新陳代謝障礙的結(jié)果，糖代謝紊亂必然會(huì)引起心、肝、腎、腦等重要器官代謝異常，最終出現(xiàn)衰老。D-gal衰老模型在國(guó)內(nèi)早已得到了廣泛應(yīng)用，其機(jī)制為D-gal在醛糖還原酶催化下還原成為半乳糖，堆積在細(xì)胞內(nèi)

14、形成高滲透壓；D-gal經(jīng)氧化酶氧化分解為CO2和木酮糖，同時(shí)伴有O2和過(guò)氧化氫的產(chǎn)生，大量的自由基與體內(nèi)的生物大分子發(fā)生反應(yīng)，并破壞或消耗機(jī)體抗氧化物質(zhì)，導(dǎo)致組織細(xì)胞受損，出現(xiàn)細(xì)胞衰老和死亡35。體內(nèi)自由基產(chǎn)生過(guò)多，超出機(jī)體調(diào)節(jié)能力，導(dǎo)致自由基鏈鎖反應(yīng)誘發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用，生成過(guò)氧化脂質(zhì)（LPO），并不斷產(chǎn)生自由基。脂褐質(zhì)的化學(xué)本質(zhì)是膜脂質(zhì)和蛋白氧化后的一種復(fù)合產(chǎn)物，即Schiff堿，測(cè)定Schiff堿的含量，可知道細(xì)胞被自由基損傷的程度，即過(guò)氧化程度。MDA 是自由基攻擊生物體的降解產(chǎn)物，MDA 生成的多少可間接反映組織細(xì)胞損傷的程度。超氧化物歧化酶（SOD）為自由基清除劑，它廣泛存在于生物

15、體的各種組織中，能清除自由基O-2（超氧陰離子自由基）。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）是體內(nèi)存在的一種含硒清除自由基和抑制自由基反應(yīng)的系統(tǒng)，能清除脂質(zhì)氫過(guò)氧化物(ROOH)和H2O2，分布于肝臟、胃腸、睪丸等組織中，其中肝含量較高，故測(cè)肝的GSH-Px較好。由于SOD和GSH-Px是機(jī)體清除自由基的主要抗氧化酶，所以測(cè)定SOD與GSH-Px的含量可間接反映機(jī)體清除自由基的能力。 本研究表明，模型小鼠衰老體征明顯，脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA和LP均增加，而抗氧化酶SOD與GSH-Px活力均下降，說(shuō)明衰老模型復(fù)制成功。而麋鹿角醇提液能減少氧自由基產(chǎn)物MDA以及LP，減少組織細(xì)胞過(guò)氧化的損傷，增加機(jī)體內(nèi)抗氧化酶SOD與GSH-Px的活性，可增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力，表明具有較好的抗氧化作用。這可能是其抗衰老機(jī)制的一個(gè)方面?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1汪銀銀，彭蘊(yùn)茹，方泰惠，等麋鹿角的傳統(tǒng)功效與現(xiàn)代研究J現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2007，27（2）：30.2秦紅兵，楊朝曄，朱清，等麋鹿角乙醇提取液抗衰老作用研究J中成藥，2004，26(4)：322.3王赟，陸