柑桔皮總黃酮的提取及鑒別(一)

1、柑桔皮總黃酮的提取及鑒別(一)    作者：黃鎖義， 羅燕， 張婧萱， 王三艷 ， 陸輝宇【關鍵詞】 柑桔皮；,總黃酮；,提取；,鑒別摘要：目的為充分利用柑桔植物資源，避免資源的浪費，探討柑桔皮中總黃酮的提取及鑒別方法。方法采用純物理的工藝流程和分光光度法從柑桔皮中提取黃酮類物質，對所提取的黃酮類物質進行驗證。結果測得柑桔皮樣品中總黃酮的含量C=4.49%。回收率為98.0%，其純度和產率均較高。結論該方法采用全物理過程，無任何化學變化及污染，是提取柑桔皮黃酮類物質的有效途徑。關鍵詞：柑桔皮； 總黃酮； 提取； 鑒別The Extraction and

2、Distinguish of the Total Flavanone from Orange Peel Abstract：ObjectiveIn order to make use of the resources of orange peel , avoiding waste. MethodsUse purely physical process flow and spectrophotometry to introduce the method of which extracted the flavanone from the orange peel , and check the fla

3、vanone which withdrawed from the lotus rhizome. ResultsBy this method getting the contents of the total flavanone of orange peel is C=4.49% and rate of the recovery is 98.0%. ConclusionUsing this text which provide the withdrawal and purifying methods to get the outcome and purity of the flavanone a

4、re all very high .This method is purely physical process, and has no chemical change and pollution. It is ideal to withdraw the flavanone of orange peel.Key words：Orange peel ; Total flavanone; Extract; Distinguish 柑桔皮為蕓香科植物橘樹成熟果實的果皮，在我國有悠久的藥用歷史。柑桔樹是我國亞熱帶地區(qū)栽培最廣的果樹，它四季長青，樹枝優(yōu)美。柑桔果實全都是寶，其皮、肉都是正統(tǒng)的中藥。我國古

5、代醫(yī)學認為：柑桔皮性味辛、微溫、無毒、入脾、肺經，有理氣調中、燥濕消痰、行氣導滯的功效，具有消炎，抗?jié)儯志袄懙茸饔?。臨床上用于治療和預防感冒、治療膽結石、風濕性關節(jié)炎、還可用于防治高血壓和動脈硬化，預防血栓的形成，降低膽固醇，減少心梗的發(fā)生，也可用于嘔吐、腹瀉、心腹氣痛的治療，以及抑制多種消化道腫瘤的生長、抗自由基等1?，F代醫(yī)學證明2：柑桔皮中主要含有黃酮類化合物、類胡蘿卜素類、硫胺素、核黃素、膳食纖維等食用和藥用成分，特別是黃酮類化合物在柑桔皮中的含量尤為豐富，黃酮類化合物具有多種生理功能。研究證明柑桔皮具有很高的藥用價值1,2，為了充分利用，避免資源的浪費，我們對柑桔皮中總黃酮進行

6、提取及鑒別，本文方法未見文獻報道，現將其過程介紹如下。1 材料與方法1.1 材料 市售新鮮的柑桔取其皮。試劑：95%乙醇AR；甲醇AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；正丁醇AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；鎂粉AR；乙酸鎂AR；氫氧化鈉AR；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；蘆丁標準品（中國生物制品檢定所）。儀器設備：UV755B紫外可見分光光度計（上海分析儀器總廠）；DZF150小型真空恒溫干燥箱（鄭州長城科工貿易有限公司）；802離心沉淀器（上海分析器械廠）；ZFI型三用紫外線分析儀(上海顧村電光儀器廠)。1.2 方法1.2.1 工藝流程 柑桔皮中總黃酮提取工藝流程見圖1。圖1 柑桔皮中總黃酮提

7、取工藝流程（略）1.2.2 操作步驟 取市售新鮮柑桔，取皮，洗凈，切碎，烘干，取135 g，置于鋁鍋中，加蒸餾水煮沸3 h。冷卻后進行粗濾，對濾渣用上述方法進行再浸取2次，將3次濾液合并，濾液用高速離心機分離 15 min，1 500 r/min。并進行加熱濃縮（加熱溫度在85左右）。濃縮冷卻后加入等體積95%乙醇，放入冰箱內2h。用高速離心機進行分離15 min，1 500 r/min。過濾得濾液濾渣，棄去濾渣。對濾液進行蒸發(fā)濃縮（加熱溫度在85左右）。待乙醇蒸發(fā)完后，將濃液置于真空干燥箱中干燥成疏松固體，粉碎得終產物。1.3 定量實驗-總黃酮的含量測定1.3.1 實驗原理 采用硝酸鋁比色法

8、。黃酮類物質是以2-苯基并吡喃酮為母核的多羥基化合物，可與糖苷類物質遇堿變成明顯黃色，其機制是黃酮類物質在堿性條件下其苯吡喃酮的1，2碳之間的C-O鍵打開成查耳酮的檢測方法常用分光光度計法或液相色譜法。分光光度法以用黃酮與鋁離子在堿性與亞硝酸存在條件下形成黃酮的鋁絡合物，生成穩(wěn)定的黃色。黃色的深淺與黃酮含量呈一定的比例關系，可以蘆丁(標準樣)作對照，于500 nm3波長處比色定量測定。1.3.2 標準曲線的制備 標準溶液的制備：精密稱取蘆丁對照品200 mg，置于100 ml容量瓶中，加入95乙醇溶液并稀釋至刻度，搖勻。精密稱取10 ml置于100 ml容量瓶中，加入95%乙醇使成100 ml

9、,搖勻即得（每毫升含有無水蘆丁0.2 mg）標準曲線的制備：精密吸取對照溶液0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，12.0 ml分置于50 ml容量瓶中，各加95%乙醇12 ml，加5%亞硝酸鈉溶液2.0 ml，混勻，放置6 min，再加10%硝酸鋁溶液2.0 ml，放置6 min，加5%氫氧化鈉溶液20 ml，最后用95%乙醇稀釋至刻度，搖勻，以第一瓶為空白溶液，用UV755B紫外可見分光光度計，在500 nm上測定吸光度。結果見表1。表1 分光光度法測定吸光度結果（略）根據上表得一回歸方程：A=1.243 3C0.008 1，r=0.999 1,n=5，其中截距0.008 1，斜率為1.

10、243 3。1.3.3 提取物含量的測定 精密稱定提取物1.500 0 g，置索氏提取器中，加95%乙醇回流至無色（68 h），將提取液置于燒杯中，水浴加熱濃縮至干，再用熱水洗滌3次，將洗液移至分液漏斗中，并加無水正丁醇液萃取3到5次，每次10 ml,合并萃取液于燒杯中，水浴蒸干，再加95%乙醇使溶解，并移于50 ml容量瓶中，再加95%乙醇至刻度，搖勻。精密取10 ml于50 ml容量瓶中加95%乙醇至刻度，搖勻，按標準曲線的制備操作測定吸光度，A=0.328。1.3.4 顏色反應 紫外光下呈色反應：取該樣品溶液點在濾紙上，在可見光下呈淡黃色，在紫外光下呈淡藍色并有熒光斑點。濃氨水反應：取該

11、樣品溶液點在濾紙上，將濾紙在氨水上方熏0.5 min，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點。三氯化鋁反應：取樣品溶液點在濾紙上，滴加三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點。乙酸鎂反應：取樣品溶液點在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點。鹽酸鎂粉反應：取乙醇提取液1 ml于試管中加鎂粉，再加入濃的鹽酸數滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。1.3.5 紙層析 取樣品溶液10 l點在濾紙上。用正丁醇醋酸水=415為展開劑，上行展開5 h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見熒光斑點。2 結果A=0.328，根據回歸方程：A=1

12、.243 3C-0.008 1，計算樣品中總黃酮的含量C=4.49%?；厥諏嶒灒壕芊Q提取物1.500 0 g，加入蘆丁對照品1.000 0 g，同前樣品測定方法操作測定吸光度，求出回收率為98.0%。3 討論實驗結果表明，本實驗方法工藝簡單，回收率為98.0%，利用本文所提供的提取、純化方法而得到的黃酮類物質其純度較高。此方法采用全物理過程，無任何污染，且該方法操作簡單方便，是一條理想的從柑桔皮中提取黃酮類物質的有效途徑。黃酮類化合物是一類天然產物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及

13、新黃酮類等。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進入脂肪組織，進而體現出如下功能：消除疲勞、保護血管、防動脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循環(huán)、活化大腦及其他臟器細胞的功能。 黃酮類化合物具有抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調節(jié)、降血糖、治療骨質疏松，它能清除自由基、超氧化物和羥基自由基、抑制脂質過氧化及抗癌、抗病毒、抗氧化抗衰老、抗輻射等作用49。近年來，世界上掀起了植物藥開發(fā)的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目。柑桔分布廣泛，本文實驗結果表明，柑桔皮中含有較為豐富的黃酮。因此，柑桔皮具有廣泛開發(fā)和利用價值，值得綜合利用，加強資源開發(fā)。參考文獻：1 劉 茜，焦慶才，劉鐵兵. 柑桔皮提取物防止雄性小鼠生殖細胞損傷的研究J.中藥材 ，1998，21（2）：88.2 敬 璞，丁曉雯，蘇 曄. 柑桔皮水提液在小鼠體內的抗氧化作用研究J. 西南農業(yè)大學學報 ，2003，25（3）：265.3 李冬菊.山楂葉總黃酮的提取及鑒別J.遼寧中醫(yī)雜志，2003，30（7）：578.4 華光軍，郭 勇.黃酮類化合物藥理研究進展J.廣東藥學，1999，9（4）：9.5 黃河勝，馬傳庚，陳志武.黃酮類化合物藥理作用研究進展J.中國中藥雜志，2000，25（1