動(dòng)物細(xì)胞工程新

1、動(dòng)物細(xì)胞工程離體植物器官、離體植物器官、組織或細(xì)胞組織或細(xì)胞愈傷組織愈傷組織胚狀體胚狀體脫（去）分化脫（去）分化再分化再分化（芽、根）（芽、根）n植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基使用的培養(yǎng)基： 固體有機(jī)物（蔗糖）植物激素植物體植物體復(fù)習(xí)復(fù)習(xí)目的目的植物體植物體植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞植物細(xì)胞A 植物細(xì)胞植物細(xì)胞B 去細(xì)胞壁去細(xì)胞壁原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞愈傷組織愈傷組織雜種植株雜種植株植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞融合1、植物體細(xì)胞雜交的結(jié)果、植物體細(xì)胞雜交的結(jié)果是產(chǎn)生了？是產(chǎn)生了？2、這個(gè)過(guò)

2、程中涉及的原理是？、這個(gè)過(guò)程中涉及的原理是？雜種植株雜種植株細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性 植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性目的目的植物體植物體多莉多莉克隆猴克隆猴動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段常用的技術(shù)手段動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體單克隆抗體核移植核移植動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。術(shù)的基礎(chǔ)。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.選材：選材：動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官，它動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官，它們細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，分化程們細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)。度低，容易培養(yǎng)

3、。v在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，用在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，用胰蛋白酶胰蛋白酶分散分散細(xì)胞，說(shuō)明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是細(xì)胞，說(shuō)明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)。動(dòng)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PH為為7.27.4，此環(huán)境下，此環(huán)境下胃蛋白酶（胃蛋白酶（2.0）沒(méi)有活性，而胰蛋白酶）沒(méi)有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。的活性較高。2.分散成單個(gè)細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞3.動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特性動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特性：n細(xì)胞貼壁：細(xì)胞貼壁： 懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。稱為細(xì)胞貼壁。要求：要求： 培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無(wú)毒、易于貼附。培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)

4、皿的內(nèi)表面光滑、無(wú)毒、易于貼附。細(xì)胞的接觸抑制：細(xì)胞的接觸抑制： 當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物有機(jī)體中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物有機(jī)體中取出相關(guān)的組織取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)將它分散成單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞,然后然后,放在適宜的培養(yǎng)基中放在適宜的培養(yǎng)基中,讓讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖.2.原理：原理：細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖1.概念概念3.過(guò)程：過(guò)程：動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官物的組織、器

5、官細(xì)胞懸浮液細(xì)胞懸浮液（單個(gè)細(xì)胞）單個(gè)細(xì)胞）胰蛋白酶胰蛋白酶動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來(lái)形成具有一網(wǎng)絡(luò)起來(lái)形成具有一定彈性和韌性的組織定彈性和韌性的組織和器官。和器官。（分解彈性纖維）（分解彈性纖維）10代細(xì)胞代細(xì)胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)50代細(xì)胞代細(xì)胞傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株無(wú)限傳代無(wú)限傳代細(xì)胞系細(xì)胞系遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)未改變未改變遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)改變改變剪碎剪碎細(xì)胞株：細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至原代細(xì)胞一般傳至1010代左右細(xì)胞代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少

6、數(shù)細(xì)胞存活到活到40504050代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。 細(xì)胞系：細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至細(xì)胞株傳代至5050代后又出現(xiàn)細(xì)胞代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無(wú)限制傳代，這改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無(wú)限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。 細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別： 細(xì)胞系的遺傳細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。容易傳代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)：將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)將動(dòng)物組

7、織消化后的初次培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁至細(xì)胞貼壁,稱為原代培養(yǎng)。稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)：用胰蛋白酶將出現(xiàn)接觸抑制用胰蛋白酶將出現(xiàn)接觸抑制的貼壁細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁上脫離下來(lái)，制的貼壁細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁上脫離下來(lái)，制成細(xì)胞懸液，分裝到多個(gè)培養(yǎng)瓶中繼續(xù)成細(xì)胞懸液，分裝到多個(gè)培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，這個(gè)過(guò)程叫傳代培養(yǎng)。培養(yǎng)，這個(gè)過(guò)程叫傳代培養(yǎng)。 上述過(guò)程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)到上述過(guò)程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)到接觸抑制就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其接觸抑制就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)細(xì)胞接觸抑制細(xì)胞接觸抑制 細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過(guò)程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過(guò)程中，隨著

8、細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加。互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加。細(xì)胞在體外培養(yǎng)中所需的條件細(xì)胞在體外培養(yǎng)中所需的條件與體內(nèi)細(xì)胞基本相同。與體內(nèi)細(xì)胞基本相同。n【討論】【討論】多細(xì)胞動(dòng)物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，討論以下多細(xì)胞動(dòng)物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，討論以下問(wèn)題：?jiǎn)栴}：1.體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提供哪些物質(zhì)？體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提供哪些物質(zhì)？ 提示：充足的營(yíng)養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的提示：充足的營(yíng)養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的pH和氣和氣體環(huán)境。體環(huán)境。2.體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什

9、么樣的環(huán)境條件？體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？ 提示：無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境。提示：無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境。1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清、血漿、葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清、血漿、維生素、促生長(zhǎng)因子等。維生素、促生長(zhǎng)因子等。）3、溫度和、溫度和PH 36.5 +0.5度 ；PH為7.2-7.4。4、氣體環(huán)境：、氣體環(huán)境： O2和和CO2（95%空氣和空氣和5% CO2 ）補(bǔ)充合成培養(yǎng)基補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)中缺乏的物質(zhì)4.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條

10、件動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件5.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果：獲得細(xì)胞群獲得細(xì)胞群（1 1）生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品：病毒疫苗、）生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。干擾素、單克隆抗體等。（2 2）獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于）獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮。還可植皮。還可作為基因工程中的受體細(xì)胞。作為基因工程中的受體細(xì)胞。（3 3）用于檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物）用于檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性。質(zhì)的毒性。（4 4）用于生理、病理、藥理等方面的）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)5.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞培

11、養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用思考：思考：2、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？培養(yǎng)材料？1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？有何獨(dú)特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？體？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。主要成分：葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。獨(dú)特之處

12、有：獨(dú)特之處有：1、液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基 2、成分中有動(dòng)物血清等、成分中有動(dòng)物血清等因?yàn)檫@些組織或器官上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)因?yàn)檫@些組織或器官上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)使每一個(gè)細(xì)胞都能與培養(yǎng)液直接接觸并進(jìn)行物質(zhì)交換，保使每一個(gè)細(xì)胞都能與培養(yǎng)液直接接觸并進(jìn)行物質(zhì)交換，保證生命活動(dòng)的正常進(jìn)行。證生命活動(dòng)的正常進(jìn)行。不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體動(dòng)物個(gè)體獲得細(xì)胞獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體植物體培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞分泌蛋白或細(xì)胞分泌蛋白快速繁殖、培育快速繁殖、培育無(wú)

13、病毒植株等無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清葡萄糖、動(dòng)物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目2 2、植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較、植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù):將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。這個(gè)

14、新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。用核移植的方法得到的動(dòng)物用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物核移植核移植胚胎細(xì)胞核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高難度高）受體細(xì)胞：受體細(xì)胞：M期的期的卵母細(xì)胞卵母細(xì)胞用核移植的方法得到的動(dòng)物。用核移植的方法得到的動(dòng)物。（M卵母細(xì)胞）卵母細(xì)胞）減數(shù)第二次分裂中期減數(shù)第二次分裂中期去核的卵母細(xì)去核的卵母細(xì)胞胞供體細(xì)胞供體細(xì)胞注入去核注入去核卵母細(xì)胞卵母細(xì)胞受體細(xì)胞激活，受體細(xì)胞激活，完成分裂、發(fā)完成分裂、發(fā)育育胚胎移胚胎移植植卵細(xì)胞卵細(xì)胞母綿羊母綿羊母綿羊母綿羊乳腺細(xì)胞乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植早期胚胎早期胚胎卵

15、裂卵裂C母綿羊子宮母綿羊子宮胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育過(guò)程多莉羊的培育過(guò)程融合后的卵細(xì)胞融合后的卵細(xì)胞克隆羊的成功證明了什么？克隆羊的成功證明了什么？1、動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性；、動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性；2、細(xì)胞質(zhì)具有調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育、細(xì)胞質(zhì)具有調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育的作用。的作用。體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景畜牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生以及其他領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用前畜牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生以及其他領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用前景景1加速加速家畜遺傳改良家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育2保護(hù)瀕危物種，增加動(dòng)物保護(hù)瀕危物種，增加動(dòng)物 的存活數(shù)量的存活數(shù)量3可作為生

16、物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白，克隆動(dòng)物細(xì)可作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白，克隆動(dòng)物細(xì)胞、組織、器官可作為移植的供體，了解胚胎發(fā)胞、組織、器官可作為移植的供體，了解胚胎發(fā)育及衰老過(guò)程、做疾病模型等育及衰老過(guò)程、做疾病模型等體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題1.許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過(guò)許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過(guò)大，異常肥胖，發(fā)育困難，免疫失調(diào)等。大，異常肥胖，發(fā)育困難，免疫失調(diào)等。2.成功率非常低及克隆動(dòng)物食品的安全性問(wèn)題。成功率非常低及克隆動(dòng)物食品的安全性問(wèn)題。胚胎移植技術(shù)胚胎移植技術(shù)試管動(dòng)物（嬰兒）培養(yǎng)過(guò)程試管動(dòng)物（嬰兒）培養(yǎng)過(guò)程卵細(xì)胞卵細(xì)胞精子精子

17、體外受精體外受精受精卵受精卵胚胎胚胎新個(gè)體新個(gè)體母體子宮內(nèi)母體子宮內(nèi)孕育、產(chǎn)出孕育、產(chǎn)出克隆動(dòng)物的研究意義克隆動(dòng)物的研究意義1. 1.克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2. 2.改良動(dòng)物品種改良動(dòng)物品種 3. 3.治療人類疾病，作為供體治療人類疾病，作為供體4. 4.保護(hù)瀕危動(dòng)物保護(hù)瀕危動(dòng)物2.某研究小組為測(cè)定藥物對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞的毒性，某研究小組為測(cè)定藥物對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞的毒性，準(zhǔn)備對(duì)某種動(dòng)物的肝腫瘤細(xì)胞準(zhǔn)備對(duì)某種動(dòng)物的肝腫瘤細(xì)胞(甲甲)和正常肝細(xì)胞和正常肝細(xì)胞(乙乙)進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列說(shuō)法正確的是進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列說(shuō)法正確的是()A在利用兩種肝組織

18、塊制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，也可在利用兩種肝組織塊制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，也可用胃蛋白酶處理用胃蛋白酶處理B細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行，的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO2的作用是刺激細(xì)胞的呼吸的作用是刺激細(xì)胞的呼吸C甲、乙細(xì)胞在持續(xù)的原代培養(yǎng)過(guò)程中，乙會(huì)出甲、乙細(xì)胞在持續(xù)的原代培養(yǎng)過(guò)程中，乙會(huì)出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象D僅用該培養(yǎng)液也能用來(lái)培養(yǎng)乙肝病毒僅用該培養(yǎng)液也能用來(lái)培養(yǎng)乙肝病毒c1(2009浙江卷浙江卷)用動(dòng)、植物成體的體細(xì)胞進(jìn)用動(dòng)、植物成體的體細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是()A都需要用都需要用CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱B都需要用液體培養(yǎng)基都需要

19、用液體培養(yǎng)基C都要在無(wú)菌條件下進(jìn)行都要在無(wú)菌條件下進(jìn)行D都可體現(xiàn)細(xì)胞的全能性都可體現(xiàn)細(xì)胞的全能性C誘導(dǎo)方式誘導(dǎo)方式物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒仙臺(tái)病毒仙臺(tái)病毒紫外線紫外線喪失感染性喪失感染性（不感染細(xì)胞）（不感染細(xì)胞）保留融合活性保留融合活性 （誘導(dǎo)細(xì)胞融合）（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）一、動(dòng)物細(xì)胞融合一、動(dòng)物細(xì)胞融合1.方法方法2.滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理：滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理：n病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重聚，

20、細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合。新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合。n滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。抗原結(jié)構(gòu)。3.用途：制備單克隆抗體用途：制備單克隆抗體滅活的病毒顆粒滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）細(xì)胞核細(xì)胞核病毒顆粒病毒顆粒細(xì)胞核細(xì)胞核 動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程示意圖動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)

21、程示意圖二、單克隆抗體二、單克隆抗體什么是抗體？什么是抗體？ 抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。免疫功能的球蛋白。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。B淋巴細(xì)胞與抗體淋巴細(xì)胞與抗體B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。產(chǎn)生抗體。動(dòng)物體內(nèi)的動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬(wàn)種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗百萬(wàn)種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。原具有特異性免疫作用。每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。體。單

22、克隆抗體單克隆抗體 由單個(gè)由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖（克?。纬苫蛐拖嗤募?xì)胞群，（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。單克隆抗體。 特點(diǎn)：特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高 單單: 單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞克隆克隆: 無(wú)性繁殖無(wú)性繁殖抗體抗體: 化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)n體外培養(yǎng)的條件下，一個(gè)體外培養(yǎng)的條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞是不可淋巴細(xì)胞是不可能無(wú)限增值的，如何使單個(gè)淋巴細(xì)胞增殖呢？能無(wú)限增值的，如何使單個(gè)淋巴細(xì)胞增殖呢？如何大量生產(chǎn)單克隆

23、抗體？如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？n利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能n利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性n利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞n利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞1 1、單克隆抗體制備過(guò)程、單克隆抗體制備過(guò)程 注射注射 抗原抗原效應(yīng)效應(yīng)B淋巴淋巴細(xì)胞細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體誘導(dǎo)其融合的方誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？法有哪些？思考：思考：1、本過(guò)程利用了哪些原理？、本過(guò)程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)細(xì)胞融合？胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無(wú)限增殖的泌抗體的能力，而且還有無(wú)限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體