從土壤中分純化微生物ppt課件

1、微生物的顯微計(jì)數(shù)和微生物的顯微計(jì)數(shù)和大小丈量大小丈量 實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛢?nèi)容實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛢?nèi)容la. 了解血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造和運(yùn)用方法，并掌握運(yùn)用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)展微生物計(jì)數(shù)的方法。lb. 學(xué)慣用顯微測微尺丈量酵母細(xì)胞的大小，使大家對微生物大小有一種直觀的認(rèn)識。lC.學(xué)習(xí)滅菌技術(shù)實(shí)驗(yàn)儀器實(shí)驗(yàn)儀器,資料和器具資料和器具l 實(shí)驗(yàn)器具l 載玻片、蓋片、200 l移液器及tip、擦鏡紙、 裝有蒸餾水的洗瓶。l實(shí)驗(yàn)儀器l 普通生物顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、血球計(jì)數(shù)板、手動計(jì)數(shù)器;l菌種l 啤酒酵母實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理1mm實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理l血球計(jì)數(shù)板是一塊比普通載玻片厚得

2、多的玻璃片，其上由四條平行槽構(gòu)成的三個(gè)平臺，中間的平臺較寬，其中間又被一短槽隔成兩半，每邊平臺上面各刻有一個(gè)方格網(wǎng)，即為此計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室。計(jì)數(shù)室的長寬各為1 mm，中間平臺下陷0.1mm，故蓋上蓋玻片后計(jì)數(shù)室的容積為0.1mm3。計(jì)數(shù)室有兩種規(guī)格。一種是16X25型，共有16個(gè)大格，每個(gè)大格又分為25個(gè)小格。另一種是25X16型，共有25個(gè)大格，每個(gè)大格又分成16個(gè)小格。運(yùn)用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)微生物細(xì)胞的數(shù)量，就是先測定假設(shè)干個(gè)方格中的微生物細(xì)胞的數(shù)量。再換算成每ml菌液中微生物細(xì)胞數(shù)量。 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟l稀釋：l200rpm,28 , 24h,稀釋20倍l將啤酒酵母菌懸液進(jìn)展適當(dāng)

3、稀釋，菌液如不濃，可不用稀釋.l鏡檢計(jì)數(shù)室：l在加樣前，先對計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)展鏡檢假設(shè)有污物，那么需清洗后才干進(jìn)展計(jì)數(shù) 血球計(jì)數(shù)板清洗血球計(jì)數(shù)板清洗10X1040X10酒精棉球擦洗擦鏡紙擦洗實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟l加樣品：l在清潔枯燥的血球計(jì)數(shù)板上蓋上蓋玻片，再把吸有經(jīng)稀釋并振蕩均勻的啤酒酵母菌液的細(xì)口滴管對準(zhǔn)蓋玻片邊緣，輕擠滴頭，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)浸透作用自行進(jìn)入計(jì)數(shù)室，讓計(jì)數(shù)室剛好充溢菌液。留意不可有氣泡 。l每次吸液前都要振蕩均勻！不要從高處往下滴！實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟l顯微鏡計(jì)數(shù)：l 將血球計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡(X40)察看，假設(shè)酵母細(xì)胞只往某一

4、方向流去，闡明載物臺沒有程度，需調(diào)程度直到菌液不往某一方向流動為止，留意在顯微鏡下是“水往高處流。靜置1分鐘后進(jìn)展計(jì)數(shù)。在計(jì)數(shù)前假設(shè)發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)理稀釋度后再計(jì)數(shù)。 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟l顯微鏡計(jì)數(shù)(400 x)：l 普通樣品稀釋度要求每中格內(nèi)有l(wèi)020個(gè)菌體為宜。計(jì)數(shù)時(shí)，如用16X25規(guī)格的計(jì)數(shù)板要按對角線方位，取左上，右上，左下，右下四個(gè)大格(共4個(gè)中格，l00個(gè)小格)內(nèi)的細(xì)胞逐一進(jìn)展計(jì)數(shù)：假設(shè)運(yùn)用規(guī)格為25X16型的計(jì)數(shù)板，除了取左上，右上，左下，右下四個(gè)中格外，還需加數(shù)中央的一個(gè)中格(共5個(gè)大格，80個(gè)小格)內(nèi)的細(xì)胞，計(jì)數(shù)時(shí)當(dāng)遇到中格線上的酵母菌時(shí)，普通只計(jì)此中格的上方及右方

5、線上的細(xì)胞， 而且只計(jì)胞體一半以上在線內(nèi)的細(xì)胞. 如遇酵母出芽，芽體大小到達(dá)母細(xì)胞的一半時(shí)，即作兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。將各中格的細(xì)胞數(shù)填入表中，假設(shè)各中格的細(xì)胞數(shù)相差不大，闡明菌懸液較均勻，數(shù)據(jù)可以運(yùn)用。酵母菌計(jì)數(shù)酵母菌計(jì)數(shù)稀釋20X10X1040X1040X10實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟l反復(fù)12次實(shí)驗(yàn)過程，取其平均值，按以下公式計(jì)算每ml菌液中所含的酵母菌細(xì)胞數(shù)。l 計(jì)算：16X 25型血球計(jì)數(shù)板的計(jì)算公式：l 25X16型血球計(jì)數(shù)板的計(jì)算公式()：稀釋倍數(shù)小格內(nèi)酵母細(xì)胞數(shù)酵母細(xì)胞數(shù)410400100100ml/稀釋倍數(shù)小格內(nèi)酵母細(xì)胞數(shù)酵母細(xì)胞數(shù)4104008080ml/實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟l清洗血球計(jì)數(shù)板：l

6、運(yùn)用終了后，馬上將血球計(jì)數(shù)板用洗瓶沖洗，可用棉花擦洗，切勿用硬試管刷洗刷，洗完后用蒸餾水沖洗一遍，斜置自行晾干或用濾紙沾干，最后用擦鏡紙揩干凈。顯微測微尺的運(yùn)用顯微測微尺的運(yùn)用(1000 x)(測測20個(gè)單個(gè)酵母母細(xì)胞的長短軸個(gè)單個(gè)酵母母細(xì)胞的長短軸)求平均值求平均值 (eg.9.20.4um.)結(jié)果與討論結(jié)果與討論l根據(jù)他的實(shí)驗(yàn)領(lǐng)會，闡明血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來自哪些方面？l顯微測微尺上的刻度大小和放大倍數(shù)會影響到丈量結(jié)果嗎?l假設(shè)酵母菌是規(guī)范的橢球體，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，試推算酵母菌培育液中酵母菌的體積含量 。l V酵母=4abc/3(a=b為半短軸，c為半長軸預(yù)備實(shí)驗(yàn)四預(yù)備實(shí)驗(yàn)四: 微生物察看與分別微生物察看與分別l肉湯蛋白胨培育基的配制按實(shí)驗(yàn)指點(diǎn)87頁配方瓊脂為2。300ml/組置500ml三角燒瓶中用封口膜封好瓶口，用記號筆在瓶上標(biāo)明培育基稱號、組號如周