小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體本科畢業(yè)論文

1、. . . . 農業(yè)大學本科畢業(yè)論文論文題目 小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體 學生 學號 成績 93 學院 農學院 專業(yè)班級指導教師指導教師職稱 教授 材料目錄：1、任務書 （ 1 ）份2、開題報告 （含文獻綜述） （ 1 ）份3、指導教師評閱書 （ 1 ）份4、答辯記錄表 （ 1 ）份5、論文正文 （ 1 ）份6、其它材料農業(yè)大學本科畢業(yè)論文任務書學 院： 農學院 教師： 桂茹 職 稱： 教授 年 月 日專業(yè)名稱農學院，農學專業(yè)論文題目小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體題目來源通過前人在實驗室利用花藥培養(yǎng)的研究成果目的意義：單倍體植物在作物育種、遺傳分析、基因克隆等領域已得到廣泛應用，創(chuàng)建單倍體植物的方法有

2、很多種，而用花藥培養(yǎng)技術是創(chuàng)建小麥單倍體行之有效的方法。小麥是我國主要糧食作物之一，花藥培養(yǎng)技術對小麥育種具有突出優(yōu)點，純合速度快，后代穩(wěn)定性好，從而縮短育種年限，提高選擇的準確性與可靠性，花藥培養(yǎng)的單倍體群體通過加倍得到的純合體植株群體即為DH群體（doubled haploid）。DH 群體為永久性群體, 不僅可獲得常規(guī)育種難以或無法得到的新類型，更廣泛用于基因圖譜構建、分子標記等遺傳學研究， 在構建遺傳連鎖圖與QTL分析上有著突出優(yōu)勢,因為群體中每個個體在遺傳上都是純合的,非常適于連續(xù)性資料積累。同時，通過選擇綜合性狀優(yōu)良的品系還可培育出小麥新品種。本研究意在用花藥培養(yǎng)技術創(chuàng)建小麥DH群

3、體?？尚行苑治觯涸囼灢殚喠舜罅康膮⒖嘉墨I，實驗設計合理，預期結果明確，所在課題組現(xiàn)已搜集了大量的種質資源，并進行了基礎研究。所在作物遺傳育種實驗室具備良好的實驗室條件和試驗所需的儀器設備條件如低溫培養(yǎng)箱，恒溫培養(yǎng)箱等實驗儀器，能確保本試驗有序進行。預期結果：（1） 能通過小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體可能存在的問題：（1） 由于培養(yǎng)環(huán)境和基因型差異，花培過程中白化現(xiàn)象可能嚴重。28 / 28（2） 單倍體植株自然加倍可能丟失部分優(yōu)良單株。進度安排：2012年2月-3月：選題，查閱文獻資料; 3月-4月：確定方案;2012年5月：收集實驗資料，在農業(yè)大學實驗室接種花藥；6月-9月：花藥的脫分化，再分化

4、，壯苗；10月-11月：分批移栽；2013年1月-4月：幼苗自然加倍5月-6月：撰寫論文，準備答辯。專家意見：該實驗擬對小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體，實驗設計合理，技術路線可行，預期結果明確，進度安排合理，同意按計劃執(zhí)行。專家簽字：年 月 日學院意見: 同意立題院長： 年 月 日 農學 學院 農學 專業(yè) 王冬旭 學生： 現(xiàn)把 2012-2013 學年，第 二 學期的畢業(yè)論文安排下達給你，你本學期承擔的畢業(yè)論文任務如下：1、依據(jù)本任務書中論文題目、目的意義、可行性分析的容完成開題報告。2、按照開題報告的要求按期完成畢業(yè)論文各項工作的實施。3、完成畢業(yè)論文的撰寫。4、完成畢業(yè)論文的答辯。請按相關要求完

5、成畢業(yè)論文任務。教師簽字： 年 月 日農業(yè)大學本科畢業(yè)論文開題報告題 目： 小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體 學 院： 農學院 學生： 王冬旭 專 業(yè)： 農學 班級學號： 12 指導教師： 桂茹 指導教師職稱： 教授 年 月 日學生王冬旭專業(yè)班級農學0902學 號12指導教師桂茹職 稱教授所在學院農學院論文名稱小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體選題依據(jù)：單倍體植物在作物育種、遺傳分析、基因克隆等領域已得到廣泛應用，創(chuàng)建單倍體植物的方法有很多種，而用花藥培養(yǎng)技術是創(chuàng)建小麥單倍體行之有效的方法。小麥是我國主要糧食作物之一，花藥培養(yǎng)技術對小麥育種具有突出優(yōu)點，純合速度快，后代穩(wěn)定性好，從而縮短育種年限，提高選擇的準確

6、性與可靠性，花藥培養(yǎng)的單倍體群體通過加倍得到的純合體植株群體即為DH群體（doubled haploid）。DH 群體為永久性群體, 不僅可獲得常規(guī)育種難以或無法得到的新類型，更廣泛用于基因圖譜構建、分子標記等遺傳學研究3， 在構建遺傳連鎖圖與QTL分析上有著突出優(yōu)勢,因為群體中每個個體在遺傳上都是純合的,非常適于連續(xù)性資料積累。同時，通過選擇綜合性狀優(yōu)良的品系還可培育出小麥新品種。本研究意在用花藥培養(yǎng)技術創(chuàng)建小麥DH群體。文獻綜述：花藥培養(yǎng)技術王冬旭指導老師：桂茹（農業(yè)大學農學院農學0902班  071000）小麥是世界圍廣泛種植的主要糧食作物之一，全球35%-40%的人

7、口以它為主食，具有分布廣、面積大、總產高、貿易額多、營養(yǎng)價值高等特點，在世界食品安全、戰(zhàn)略貯備和農產品貿易中占有極其重要的地位1小麥不僅經(jīng)濟價值高，而且營養(yǎng)豐富，小麥籽粒中含有人類所必需的大量的營養(yǎng)物質，其中碳水化合物含量占60-80，蛋白質含量占8-15，脂肪含量占1.5-2.0，礦物質含量占1.5-2.0，以與各種維生素等。而且小麥特有的化學組成、獨特的面筋蛋白和豐富的營養(yǎng)成份，使其具有良好的黏彈性、脹發(fā)性和延伸性，可用于制作各種面食；另外，麥麩是優(yōu)良的精飼料，麥稈常常用于編織和造紙2。除被用作上述各種主食和副產品等的加工原料外，小麥還被用作儲備和貿易糧種。中國既是小麥生產大國，也是小麥消

8、費和貿易大國。由于大國效應，中國小麥的產量直接影響著世界小麥的生產發(fā)展、市場波動與國際貿易格局。2009年中國小麥的種植面積約為2421萬公頃，產量約為11495萬噸，平均單產為4746kg/ha3。據(jù)有關部門測算，2015年我國小麥的人均需求量將達到9.68kg，總需求量將達到14051萬噸；占糧食總需求的24.1%4，目前的生產量尚不能滿足消費的需求?？梢?，在今后的幾十年中，我國對小麥的消費需求將有增無減，小麥生產的壓力會越來越大。圍繞如何提高小麥的產量，世界很多國家在小麥品質育種技術研究方面取得了很大成就，培育并推廣了許多農藝性狀好的優(yōu)質高產的小麥品種，其中花藥培養(yǎng)育種技術在培育新品種中

9、有不錯的成效。1、植物花藥培養(yǎng)研究進展花藥培養(yǎng)育種就是利用組織培養(yǎng)的方式將得到的單倍體植株經(jīng)自然或人工加倍得到純合二倍體的育種方法。通過這種方式可得到遺傳穩(wěn)定、排除雜合體中基因顯隱性隱蔽、純合的二倍體植株, 這樣縮短育種時間, 提高選擇的準確性與可靠性。中國自20 世紀70 年代開始進行花藥培養(yǎng)育種研究, 已取得重大成就, 以水稻和小麥為代表的作物花培育種研究與應用處于世界領先地位, 并成功與常規(guī)雜交育種、遠緣雜交育種與轉基因技術相結合, 發(fā)展形成了一套較完整的育種技術體系6。2、植物幼穗發(fā)育時期與誘導率花藥培養(yǎng)中愈傷組織的誘導受多種生理與環(huán)境因子的影響。首先, 花粉在接種時所處的發(fā)育時期可能

10、比較重要, 不同物種最適接種時期各異( 多數(shù)為單核期或雙核期) 。小麥根據(jù)從挑旗到抽穗期間幼穗的大小, 從外觀形態(tài)上分為5個時期:小胞期，中胞期，大包期，破肚期，抽穗期；以中包期和大包期幼穗花藥的愈傷誘導率最高。前人研究表明, 單核中、晚期是花藥培養(yǎng)的最適接種時期7。在小麥穗分化過程中, 不同穗位小花發(fā)育不同步, 所以幼穗的最適接種期彈性較大, 但已抽穗的幼穗一般不宜再用做花藥培養(yǎng), 以免影響愈傷誘導率。此外, 供試植株的生理狀態(tài)對愈傷組織的產生也有影響, 一般情況下幼年植株的花藥對誘導的反應能力較強。其次, 接種前的預處理對愈傷組織產生也有明顯影響, 尤其在誘發(fā)小孢子脫分化方面作用明顯。例如

11、: 低溫( 4 ) 預處理( 24 48 h) 可促進草莓、羽衣甘藍和石刁柏花藥培養(yǎng)時產生更多愈傷組織 8- 9。申書興等10研究認為小孢子培養(yǎng)開始時, 熱激處理( 33 , 24 h) 后25 下培養(yǎng)能促進四倍體大白菜小孢子進行對稱分裂, 有利于愈傷組織的產生與獲得大量胚狀體。喬奇等9試驗發(fā)現(xiàn), 消毒方法對花藥愈傷組織的形成也有影響, 但這可能與材料的生境有關。另外, 組織學研究證實, 花藥壁在花粉產生愈傷組織和形成花粉胚過程中對其有一定影響作用,只有貼靠在花藥壁附近的花粉才能順利實現(xiàn)脫分化。這說明絨氈層起源的某些重要物質的梯度變化對愈傷誘導有重要影響11?；ㄋ幍拈L度與體積對其形成愈傷組織的

12、能力也有影響。3、小麥花培的影響因素3.1培養(yǎng)基對小麥花培能力的影響培養(yǎng)基是花藥培養(yǎng)的關鍵, 國外許多研究探討了培養(yǎng)基對小麥花培能力的影響。1986 年王培等12研究指出C17 培養(yǎng)基是適合小麥花藥培養(yǎng)的培養(yǎng)基, C17 培養(yǎng)基的花藥愈傷組織誘導率均顯著高于MS、N6、C1、D、W、麥II 和馬鈴薯簡化培養(yǎng)基, 而且歷年誘導提高的幅度非常穩(wěn)定, 同時指出, 該培養(yǎng)基還不完善, 需要進一步調整微量元素和有機物的種類和配比。國很多單位采用該培養(yǎng)基, 并在C17培養(yǎng)基的基礎上進行了改進。王培等13利用C17 的浸潤培養(yǎng)基進行花藥培養(yǎng), 發(fā)現(xiàn)花藥愈傷組織誘導率從固體培養(yǎng)基的13. 94% 提高到29.

13、 95% , 愈傷組織的綠苗分化率也明顯提高。榮敏等14選取3 個冬小麥雜交組合為材料, 以C17 培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基, 分別添加不同濃度的ABA, 結果表明隨著ABA濃度的增加對出愈率影響不大, 但分化率和綠苗率均表現(xiàn)先升后降的趨勢, 在添加0. 1 mg/ L 濃度的ABA 時, 分化率和綠苗率最高3.2培養(yǎng)條件對小麥花培能力的影響在一樣培養(yǎng)基情況下, 不同的培養(yǎng)條件對花培能力的影響也很大。溫度是影響花藥培養(yǎng)的重要因素, 王培等15, 16采用5 個溫度進行花藥誘導率試驗, 結果表明誘導花藥培養(yǎng)的溫度在2830時誘導效率最高。梁輝等17采用33和36的高溫培養(yǎng)不同時間, 再轉到28培養(yǎng),

14、結果表明24 h 的高溫培養(yǎng)可以較大幅度的提高小麥綠苗分化率, 而對愈傷組織誘導率則有明顯降低的趨勢。宣樸等18研究了轉愈初期短期低溫處理對小麥愈傷組織綠苗分化率的影響。結果表明, 在轉愈傷組織初期, 采用了4和6低溫培養(yǎng)13 d 能大幅度提高小麥花培愈傷組織綠苗分化率, 提高育種效率。在花培期間不同的光暗培養(yǎng)對花藥培養(yǎng)能力也有影響, Ekiz H 等19研究了光照對春小麥花藥培養(yǎng)愈傷組織誘導和分化的影響, 結果表明在誘導愈傷培養(yǎng)過程中暗培養(yǎng)愈傷誘導率最高, 而在分化階段采用15 d 暗培養(yǎng)加7 dgro-lux 光培養(yǎng), 綠苗分化率最高。愈傷組織的培養(yǎng)時間也影響幼苗的分化率, 國惠等20研究

15、了愈傷組織向分化培養(yǎng)基上轉移時間對綠苗分化的影響, 結果表明, 隨著花藥接種時間的延長, 愈傷組織分化綠苗的能力下降, 花粉愈傷組織向分化培養(yǎng)基上轉移的時間以在接種3050 d , 選擇顏色淡黃, 結構臻密, 直徑在2 mm 左右的愈傷組織, 分23 批轉移為宜, 這樣可以避免愈傷組織綠苗分化潛力的降低。3.3 生長調節(jié)物質對愈傷組織誘導的影響在花藥培養(yǎng)過程中, 大部分小孢子退化, 只有少部分小孢子發(fā)生分裂形成多核花粉粒, 并進一步產生愈傷組織而撐破花藥壁, 這也是產生單倍體植株( 或胚狀體) 的前提。培養(yǎng)過程中小孢子的去向主要有4 種: 萎縮、發(fā)芽、肥大和產生愈傷組織( 或形成胚) 。大量試

16、驗結果證實, 花藥離體培養(yǎng)過程中, 生長調節(jié)物質配比與含量對愈傷組織的誘導具有重要作用, 顯著影響出愈率, 對愈傷的起源有重要調控作用21-233. 4 其他培養(yǎng)基成分對愈傷組織誘導的影響基本培養(yǎng)基種類與各無機成分配比的變化對花藥離體培養(yǎng)中愈傷組織的產生有決定性的影響。黃鶯等 24證實, 提高培養(yǎng)基中微量元素倍數(shù)或降低大量元素的倍數(shù)有利于煙草花培出愈。培養(yǎng)基中的有機成分對愈傷組織的誘導同樣具有重要作用。碳源不但提供能源, 還是滲透調節(jié)物質, 對培養(yǎng)效果影響明顯。4、 小麥花藥培養(yǎng)試管苗的移栽與管理4.1 煉苗把將要移栽的小麥單倍體試管苗的試管，不要打開瓶塞放在移栽環(huán)境下，練苗5-7天；4.2

17、移栽土壤移栽前與時整地，翻耕土地，澆足底墑水；4.3移栽方法經(jīng)過煉苗的小麥單倍體植株用鑷子從試管中取出, 用清水洗凈植株基部的培養(yǎng)基并栽人田間, 栽后將根的四周用手指壓實, 栽滿一個畦后與時澆水,4.4 移栽時間移栽時間早晚對移栽成活率影響很大。把握在11月20 日左右, 此時氣溫雖然已降為6 ，但小麥單倍體植株生長在塑料棚, 溫度仍能保持在10.3。小麥分蘗和次生根大量發(fā)生最適宜的溫度為14 ，這個溫度有利于小麥單倍體試管苗的分蘗和次生根的生長, 并能與時從土壤里吸收營養(yǎng),同時由于移栽溫度低也控制了各種病害的浸染。翌年春天氣溫升至2 3 時揭開塑料棚, 移栽的小麥單倍體植株95% 以上都能成

18、活參考文獻1廣才,何中虎,王德森,等.栽培措施對面包小麥產量與烘烤品質的調控效應J.作物學報,2002,28(6):797802.2于振文.作物栽培學各論M.中國農業(yè),2003,2223.3.應中.2009年糧食市場情況分析（下）J.中國農業(yè)信息,2010(3):3638.4紀軍,鐘冠昌,俊明,等.我國優(yōu)質麥生產現(xiàn)狀與品質育種方法J.農業(yè)科學,2001,29(6):729730. 5 思經(jīng)國際農業(yè)生物技術進展 : 中國農業(yè)科技, 1997- 56王茂良, 慧.花藥離體培養(yǎng)研究進展. 農學院學報. 2010 年10 月第25卷第3 期7 歐陽俊聞. 小麥花藥培養(yǎng)研究進展, 見: 胡含, 王恒立主

19、編. 植物細胞工程與育種, : 工業(yè)大學, 1990, 168 王超楠, 輝, 鳳英, 等. 羽衣甘藍花藥培養(yǎng)胚狀體誘導初報 J . 中國蔬菜, 2006 ( 6) : 23-4.9 喬奇, 振亞, 勒秀蘭. 消毒方法對草莓花藥愈傷組織形成的影響 J . 農業(yè)科學, 1999 ( 7) : 29.10 申書興, 前程, 世雄, 等. 四倍體大白菜小孢子植株的獲得與倍性鑒定 J . 園藝學報, 1999, 26 ( 4) : 232-237. 11 周毓君, 朱寶成, 郭明申, 等. 草莓花藥愈傷組織的形成與形態(tài)發(fā)生 J . 園藝學報, 1996, 23 ( 2) : 119-22. 12 王培

20、, 玉蓉. C( 17) 培養(yǎng)基在花藥培養(yǎng)中應用的研究 J . 植物學報, 1986, 28( 1) : 3845. 13 王培, 玉蓉. 固體培養(yǎng)基上浸潤培養(yǎng)提高花粉植株誘導率的研究 J . 華北農學報, 1992, 7( 3) : 5965.14 榮敏, 溫書敏. 脫落酸( ABA) 對小麥花藥培養(yǎng)的影響 J . 農業(yè)大學學報, 1999, 022( 002) : 2426.15 王培, 玉蓉. 培養(yǎng)溫度對花藥愈傷組織誘導率的研究 J . 華北農學報, 1986, 1( 1) : 2025.16 王培, 玉蓉. 提高冬小麥花粉植株誘導率的研究 J . 華北農學報, 1986, 1( 1)

21、: 2025.17 梁輝, 歐陽俊聞. 小麥花藥培養(yǎng)初期高溫處理對培養(yǎng)反應的影響 J . 科學通報, 1997, 42( 13) : 14361439.18 宣樸, 郭元林. 低溫對小麥花培愈傷組織綠苗分化率的影響 J . 西南農業(yè)學報, 2004, 17( 2) : 146148. 19 E kiz H, Konzak C F. Ef f ect s of ligh t regimes on an ther culture response in bread w heat J . Plant Cell, T issue and Organ culture,1997, 50( 1) : 712

22、.20 國惠, 志萍. 小麥花培過程中轉愈時間對綠苗分化的影響 J . 農業(yè)科技, 1996, 1: 1011. 21 冰玉, 曉華, 周祥明, 等. 林木花藥培養(yǎng)研究進展與展望 J . 植物學通報, 2003, 20 ( 6) : 656-663. 22 馨宇, 王永成, 愛群, 等. 辣椒花藥培養(yǎng)研究新進展. 中國農學通報, 2007, 23 ( 8) : 331-334. 23 玉芳, 岳嵐, 何松林, 等. 觀賞植物花藥培養(yǎng)的主要影響因素 J . 中國農學通報, 2008, 24 ( 6) : 58- 61. 24 黃鶯, 仁祥, 武筑珠, 等. 活性碳、微量元素、大量元素對煙草花藥培

23、養(yǎng)的影響 J . 農業(yè)科學, 1999, 27( 4) : 1-5研究方法、容：1 材料和方法1.1 試驗材料試驗材料為農業(yè)大學小麥育種組配制的5個小麥組合，分別為：12（233），12（238），12（620），12（664）和12（667）。 1.2 方法1.2.1 小麥單倍體的創(chuàng)建1.2.1.1 接種花藥，培養(yǎng)愈傷組織 4月29日5月2日取花粉處于單核靠邊期的5個組合小麥的植株幼穗，在無菌操作室，用0.1%的升汞對幼穗進行表面消毒8分鐘，蒸餾水洗去殘留升汞。在超凈工作臺上取小麥花藥，接種在培養(yǎng)基表面，置于無菌培養(yǎng)室避光培養(yǎng)進行脫分化誘導，培養(yǎng)溫度為2830。所用脫分化培養(yǎng)基為C17培養(yǎng)基

24、，約20天后陸續(xù)長出愈傷組織。1.2.1.2 分化幼苗 花藥脫分化培養(yǎng)30天后，待愈傷組織長到直徑約1.01.5mm時，將其轉入分化培養(yǎng)基中，10天左右可誘導出綠苗。分化培養(yǎng)基用C17+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L ，30g/L蔗糖。培養(yǎng)溫度在25，光照長度12h/ d，光照強度10000LX。1.2.1.3 生根培養(yǎng)花粉綠苗長到45cm高時，在超凈工作臺上將其轉入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，715天后促進根系發(fā)達。生根培養(yǎng)基采用MS+KT 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L， 80g/L蔗糖，培養(yǎng)溫度在25，光照長度12h/ d，光照強度10000LX。1.2.1.4 壯苗培養(yǎng)和移

25、栽根系發(fā)達的小麥苗同轉生根培養(yǎng)基方法一樣再轉入壯苗培養(yǎng)基中。壯苗培養(yǎng)基用1/2MS+KT 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+0.5mg/L矮壯素，80mg/L蔗糖，培養(yǎng)溫度在25，光照長度14h/ d，光照強度10000LX。在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)23天苗見長后移入春化培養(yǎng)箱，溫度8，進行春化培養(yǎng)35天。10月下旬移栽到田間。幼苗移栽時, 需提前35天打開培養(yǎng)瓶的蓋子, 置于室溫下煉苗, 移栽時需洗去培養(yǎng)基，覆蓋塑料膜保溫、保濕。1.2.1.5 白化苗培養(yǎng)在C17培養(yǎng)基的基礎上，附加0.5mg/L活性炭對小麥白化苗培養(yǎng)，以培養(yǎng)基中不添加活性炭的為對照，觀察白化苗變化。1.2.2 小麥單倍體加倍

26、把移栽的單倍體幼苗置于溫棚中進行自然加倍；1.2.3 統(tǒng)計方法主要指標計算方法如下：花粉愈傷組織誘導率（簡稱出愈率）（%）=花粉愈傷組織總數(shù)/接種花藥總數(shù)×100；綠（或白）苗分化率（%）=分化綠（或白）苗數(shù)/花粉愈傷組織數(shù)×100；綠苗誘導率（%）=分化綠苗數(shù)/接種花藥數(shù)×100。這里出愈率代表花粉脫分化能力，分化率代表愈傷組織的分化能力，綠苗誘導率代表花粉綠苗的產量。另外，在分化綠苗的愈傷組織中，愈傷組織分化出的白、綠嵌合苗，這一部分愈傷組織計算到分化綠苗的愈傷組織數(shù)里。進度安排：2012年2月-3月：選題，查閱文獻資料; 3月-4月：確定方案;2012年5月

27、：收集實驗資料，在農業(yè)大學實驗室接種花藥；6月-9月：花藥的脫分化，再分化，壯苗；10月-11月：分批移栽；2013年1月-4月：幼苗自然加倍5月-6月：撰寫論文，準備答辯。指導教師意見：論文選題針對性強，試驗材料有代表性，試驗方案可行，預期結果明確，同意開題指導教師：年 月 日審 核 小 組 成 員姓 名職 稱備 注姓 名職 稱備 注開題報告記錄：審核小組評語：審核小組組長：（簽字）年 月 日學院意見：院長：年 月 日農業(yè)大學本科畢業(yè)論文指導教師評閱書學生：王冬旭學號：12專業(yè)班級：農學0902班 所在學院：農學院論文題目：小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體 指導教師評語：該同學遵守學校的各項規(guī)章制度

28、，對工作認真負責，能夠較好的完成各項實習任務。學習態(tài)度端正，具有較扎實的生物科學基礎理論和專業(yè)知識。論文對小麥花藥培養(yǎng)DH群體的研究，論文選題針對性強，依據(jù)充分，具有一定的科學意義和應用價值。實驗設計科學合理，研究方法可行，工作量較大，符合本科論文要求，論文寫作格式規(guī)，條理清楚，符合一般科技論文寫作要求。該生閱讀文獻資料較多，基本掌握了本學科領域的基礎理論和專業(yè)知識。論文不足之處：（1） 文中材料和方法部分過于繁瑣，部分容可用一句話概括，使其簡單明了（2） 文章參考文獻尚需進一步完善（3） 注意文中個別專業(yè)詞成 績 評 定：是否同意答辯：指導教師（簽名）： 年月日農業(yè)大學本科畢業(yè)論文答辯評分表

29、評分指標分 值評 價 容得 分論文選題10選題有重要理論意義或實用價值。立題依據(jù)充分。文獻引用12閱讀、引用文獻資料較廣泛，較全面了解本領域學術動態(tài)，綜合分析能力較強。論文難度與工作量14難度較大，工作量大。論文成果的創(chuàng)新性12有獨到見解，有較大的創(chuàng)新性成果。理論基礎與科研能力16具有堅實的基礎理論和系統(tǒng)的專門知識，具有較強的獨立從事科研工作的能力，研究方法和技術體系得當。寫作能力16條理清楚，層次分明，說理透徹，文筆流暢，表格、繪圖準確規(guī)，中外文摘要簡明扼要，語句通順，語確，符合科技寫作規(guī)。答辯報告10能簡明扼要、重點突出地闡述論文或設計的主要容，有新見解，結論明確；時間掌握恰當。回答問題1

30、0思維敏捷，邏輯性強，準確流利地回答各種問題?？?分100注：本表為答辯小組成員評分用表，評分標準參照農業(yè)大學畢業(yè)論文質量評定參考標準農業(yè)大學屆本科畢業(yè)論文答辯記錄表所在學院： 專業(yè)班級： 時間： 年 月 日學 生 姓 名學 號指導教師職 稱畢業(yè)論文題目：答 辯 小 組 成 員姓 名職 稱成 績姓 名職 稱成 績答辯小組評語：答辯小組組長：（簽字）年 月 日答 辯 成 績：注：本表與學生畢業(yè)論文（設計）一同在學院存檔（必須用鋼筆書寫）小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體農學專業(yè)0902班：王冬旭指導老師：桂茹摘要：本文對親本性狀差異較大、來源不同的5個小麥組合的F1代植株進行花藥培養(yǎng)，創(chuàng)建DH群體，該群體

31、在遺傳學、形態(tài)發(fā)生學和分子生物學等基礎研究提供了豐富的背景和遺傳穩(wěn)定的材料, 而且對于單倍體的育種實踐也有重要意義。試驗共獲得小麥單倍體植株893株，DH植株343，平均出愈率14.58%，綠苗分化率平均為15.74%，平均加倍率為35.5%。研究還表明，在培養(yǎng)基中添加活性炭等改善培養(yǎng)條件，可使白化苗轉綠，提高綠苗分化率。 關鍵詞：小麥；花藥培養(yǎng)；單倍體，DH群體Creating DH population with anther culture in wheatAbstract:The parental traits among 5 wheat combination greatly, di

32、fferent sources of F1 generation plants in anther culture, create DH group, the population based studies and molecular biology provides the background and rich genetic stability of the material in genetics, morphology, and have an important significance in the practice of haploid breeding. Test of 8

33、93 strains of wheat haploid plants were obtained, DH plants are 343, average rate of 14.58%, the green plantlet differentiation rate averaged 15.74%,The average doubling rate was 35.5%. Research also shows that, in the culture improvement of adding active carbon in the medium conditions, can make th

34、e albino turned green, increase the frequency of green plantlet differentiationKey words: wheat, anther culture, haploid，DH population單倍體植物在作物育種、遺傳分析、基因克隆等領域已得到廣泛應用，創(chuàng)建單倍體植物的方法有很多種，而用花藥培養(yǎng)技術是創(chuàng)建小麥單倍體行之有效的方法1。小麥是我國主要糧食作物之一，花藥培養(yǎng)技術對小麥育種具有突出優(yōu)點，純合速度快，后代穩(wěn)定性好，從而縮短育種年限，提高選擇的準確性與可靠性2?；ㄋ幣囵B(yǎng)的單倍體群體通過加倍得到的純合體植株群體即為D

35、H群體（doubled haploid），DH 群體為永久性群體, 不僅可獲得常規(guī)育種難以或無法得到的新類型，更廣泛用于基因圖譜構建、分子標記等遺傳學研究3， 在構建遺傳連鎖圖與QTL分析上有著突出優(yōu)勢,因為群體中每個個體在遺傳上都是純合的,非常適于連續(xù)性資料積累4，5。本研究意在用花藥培養(yǎng)技術創(chuàng)建小麥DH群體。1 材料和方法1.1 試驗材料試驗材料為農業(yè)大學小麥育種組配制的5個小麥組合，分別為：12（233），12（238），12（620），12（664）和12（667）。 1.2 方法1.2.1 小麥單倍體的創(chuàng)建 1.2.1.1 接種花藥，培養(yǎng)愈傷組織 4月29日5月2日取花粉處于單核靠邊

36、期的5個組合小麥的植株幼穗，在無菌操作室，用0.1%的升汞對幼穗進行表面消毒8分鐘，蒸餾水洗去殘留升汞。在超凈工作臺上取小麥花藥，接種在培養(yǎng)基表面，置于無菌培養(yǎng)室避光培養(yǎng)進行脫分化誘導，培養(yǎng)溫度為28306。所用脫分化培養(yǎng)基為C17培養(yǎng)基，約20天后陸續(xù)長出愈傷組織。1.2.1.2 分化幼苗 花藥脫分化培養(yǎng)30天后，待愈傷組織長到直徑約1.01.5mm時，將其轉入分化培養(yǎng)基中，10天左右可誘導出綠苗。分化培養(yǎng)基用C17+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L ，30g/L蔗糖。培養(yǎng)溫度在25，光照長度12h/ d，光照強度10000LX。1.2.1.3 生根培養(yǎng) 花粉綠苗長到45cm高時

37、，在超凈工作臺上將其轉入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，715天后促進根系發(fā)達。生根培養(yǎng)基采用MS+KT 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L， 80g/L蔗糖，培養(yǎng)溫度在25，光照長度12h/ d，光照強度10000LX。1.2.1.4 壯苗培養(yǎng)和移栽根系發(fā)達的小麥苗同轉生根培養(yǎng)基方法一樣再轉入壯苗培養(yǎng)基中。壯苗培養(yǎng)基用1/2MS+KT 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+0.5mg/L矮壯素，80mg/L蔗糖，培養(yǎng)溫度在25，光照長度14h/ d，光照強度10000LX。在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)23天苗見長后移入春化培養(yǎng)箱，溫度8，進行春化培養(yǎng)35天。10月下旬移栽到田間。幼苗移栽時, 需提前35天打開培養(yǎng)

38、瓶的蓋子, 置于室溫下煉苗, 移栽時需洗去培養(yǎng)基，覆蓋塑料膜保溫、保濕7。1.2.1.5 白化苗培養(yǎng)在C17培養(yǎng)基的基礎上，附加0.5mg/L活性炭對小麥白化苗培養(yǎng)，以培養(yǎng)基中不添加活性炭的為對照，觀察白化苗變化。1.2.2 小麥單倍體加倍 把移栽的單倍體幼苗置于溫棚中進行自然加倍；1.2.3 統(tǒng)計方法主要指標計算方法如下：花粉愈傷組織誘導率（簡稱出愈率）（%）=花粉愈傷組織總數(shù)/接種花藥總數(shù)×100；綠（或白）苗分化率（%）=分化綠（或白）苗數(shù)/花粉愈傷組織數(shù)×100；綠苗誘導率（%）=分化綠苗數(shù)/接種花藥數(shù)×100。這里出愈率代表花粉脫分化能力，分化率代表愈傷

39、組織的分化能力，綠苗誘導率代表花粉綠苗的產量8。另外，在分化綠苗的愈傷組織中，愈傷組織分化出的白、綠嵌合苗，這一部分愈傷組織計算到分化綠苗的愈傷組織數(shù)里。2.結果與分析2.1 小麥花藥出愈率試驗共接種38313枚花藥，培養(yǎng)出愈傷組織5462塊，平均出愈率14.58%，5個組合出愈情況見表1。其中以12（620）組合出愈率最高為15.73%，12（238）組合最低為13.12%。表1 5個組合小麥花藥出愈率Table 1 5 combinations of Wheat Anther Callus Induction組合名稱Group name接種花藥數(shù)Number of inoculated a

40、nthers愈傷組織塊數(shù)Numbers of callus出愈率Increasing the rate of12（233）543681715.03%12（23812%12（620）6923108915.73%12（664）519870513.56%12（667）547484615.45%2.2 小麥花藥愈傷組織幼苗分化率和幼苗誘導率表2 5個組合小麥花藥培養(yǎng)綠苗分化率和綠苗誘導率Table 2 5 combinations of green plantlet differentiation rate of wheat anther culture and Plantl

41、et induction frequency組合名稱Group name分化綠苗數(shù)Green seedling differentiation綠苗分化率Green plantlet differentiation rate綠苗誘導率Green plantlet induction rate12（233）698.45%1.27%12（238）32416.16%2.12%12（620）27224.98%3.93%12（664）9213.05%1.77%12（667）13616.08%2.48%試驗共獲得893株綠苗，綠苗分化率和綠苗誘導率平均為15.74%和2.31%，（表2），以12（620）組

42、合花藥愈傷組織幼苗分化率和綠苗誘導率最高，分別為24.98%和3.93%，12（233）組合最低，分別為8.45%和1.27%。不同組合花藥愈傷組織幼苗分化率差異明顯。2.3 小麥DH獲得量與加倍率表3 5個組合小麥DH獲得量與加倍率Table 3 5 combinations of wheat DH and the double rate組合名稱Group name分化綠苗數(shù)Green seedling differentiationDH數(shù)Number of DH加倍率The double rate12（233）692840.6%12（238）32416952.2%12（620）2728631.6%12（664）922527.2%12（667）13635