加味四逆散對(duì)肝纖維化大鼠肝組織ⅠⅢⅣ型膠原影響的實(shí)驗(yàn)研究

1、加味四逆散對(duì)肝纖維化大鼠肝組織，型膠原影響的實(shí)驗(yàn)研究         09-09-02 14:58:00     編輯：studa20                    作者：鄭旭銳，孫守才，李長(zhǎng)秦，胡建軍【摘要】  目的觀察加味四逆散對(duì)肝纖維化大鼠肝組織，型膠原的影響效果，

2、從而探討該方抗肝纖維化的機(jī)理。方法采用二甲基亞硝胺腹腔注射制備大鼠肝纖維化模型，加味四逆散灌胃給藥，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)分析各組大鼠肝組織，型膠原的含量。結(jié)果加味四逆散能明顯降低肝纖維化大鼠肝組織，型膠原的含量，與病理模型組比較有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)論加味四逆散可有效的減少肝組織，型膠原的沉積，對(duì)肝纖維化有肯定的治療作用。 【關(guān)鍵詞】  加味四逆散； 肝纖維化； 型膠原； 型膠原； 型膠原Abstract：ObjectiveThe mechanism  of Chinese herbail compound  JIA WEI SI  NI

3、  SAN in treating hepatic fibrosis were explored and studied  by observing  the expression of Collagen ， and Collagen  in  liver.MethodsThe rat fibrosis model was induced by DMN.  The groups of  treatment were fed  with  JWSNS gavage. ，and   collagen

4、 were  detected  in  liver samples with immunohistochemisty. ResultsUpon pathological  examination ,the JWSNS  treatment had significantly  reversed  DMN-induced liver  fibrosis .  In  JWSNS  treatment group  the  expression of collage

5、n  ,and collagen  in  liver  was  markedly  reduced  respectively  according   to immunohistochemisty  analysis  as  compared  with  model  group（P<0.05）. ConclusionThe  mechanism  of  treating  he

6、patic fibrosis  with  JWSNS  appears to due to  the  enhancement  of  degradiation  of  collagen  in  liver.  JWSNS  can  treat  hepatic  fibrosis  effectively.Key words：JWSNS ；  Hepatic fibrosis ；  Collag

7、en ；   Collagen ；  Collagen     加味四逆散是治療慢性病毒性肝炎的有效經(jīng)驗(yàn)方，既往的臨床觀察和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)證實(shí)該方具有良好的防治肝纖維化作用13。本研究觀察加味四逆散對(duì)肝纖維化大鼠肝組織型膠原（CoL-）、型膠原（CoL-）、型膠原（CoL-）影響效果，探討加味四逆散抗肝纖維化的藥理機(jī)制、作用環(huán)節(jié)。1    材料1.1    動(dòng)物   雄性SD大鼠50只，體重（180±20）g，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1

8、.2     藥物及試劑   加味四逆散煎劑（由柴胡、枳殼、白芍、甘草、黃芪、丹參、桃仁等藥組成），藥物加水浸泡常規(guī)煎煮，過濾，水浴蒸發(fā)至每毫升含生藥3.75g，置于4冰箱保存?zhèn)溆?。秋水仙堿（云南醫(yī)藥集團(tuán)云南藥業(yè)有限公司）；二甲基亞硝胺(DMN，美國(guó)Sigma公司)；CoL-，CoL-，CoL-抗體（均為0.1 ml兔抗鼠濃縮型，武漢博士德生物制品公司）。免疫組化試劑盒由第四軍醫(yī)大學(xué)免疫組化室提供。2    方法2.1    模型制備   50只大鼠隨機(jī)選

9、取8只作為空白對(duì)照組（A ），其余42只均用二甲基亞硝胺（用生理鹽水稀釋至5 mg/ml）以10 ml/kg體重腹腔注射，1次/d，每周連續(xù)3 d，連續(xù)4周。2.2  分組  4周造模結(jié)束后，42只大鼠共死亡10只，死亡率為23.8%，將剩余32只造模大鼠隨機(jī)分為：病理模型組（B）12只 ；秋水仙堿組（C）10 只；中藥組（D）10只。2.3   給藥A、B組：以生理鹽水4ml/只灌胃；C組：以秋水仙堿0.01mg/kg體重灌胃；D組：以加味四逆散煎劑20ml/kg體重灌胃。以上各組用藥均1次/d，連續(xù)用藥30d后結(jié)束。2.4  &#

10、160; 標(biāo)本采集與制備   實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，B組大鼠死亡2只，死因可能為肝纖維化未經(jīng)治療進(jìn)行性加重導(dǎo)致肝硬化腹水而死亡。將其余存活大鼠斷頭處死取新鮮肝組織左葉，10%甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，片厚5m。2 .5    觀測(cè)指標(biāo)及測(cè)定方法2.5.1    一般表現(xiàn)   精神、活動(dòng)、飲食、皮毛、糞便等。2.5.2     普通病理組織學(xué)檢查    將各組石蠟切片均行常規(guī)HE染色及膠原纖維染色。光鏡下觀察。病理組織學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為4：“-”級(jí)：正常肝臟或無明顯膠原纖維增生；“±”級(jí)：膠原纖維增生，中央靜脈和匯管區(qū)有少量纖維索放散延伸，但無間隔形成；“+”級(jí)：膠原纖維增生，中央靜脈和匯管區(qū)結(jié)締組織變厚，由此向四周伸出纖維索，形成不完全間隔；“+”級(jí)：膠原纖維大量增生，有個(gè)別菲薄的完全間隔形成（假小葉）；“+”級(jí)：完全間隔較厚，假小葉大量形成。2.5.3    肝組織CoL-、CoL-、CoL-免疫組化觀察石蠟切片，免疫組化染色按試劑盒說明進(jìn)行，SP染色法，DAB法顯