實驗性腹膜炎小鼠脾、腎鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶的變化

1、實驗性腹膜炎小鼠脾、腎鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶的變化                                             作者：程建青 李海峰 范紅斌

2、 杜斌 楊志勇 【摘要】  目的： 觀察實驗性腹膜炎小鼠脾、腎鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)在腹膜炎病程中變化。方法：36只小鼠隨機分為6組，即腹膜炎48h、5d、10d、14d、21d組與對照組，腹膜炎組腹腔注射1%冰醋酸0.2mL，對照組腹腔注射等量生理鹽水，每組各6只。采用比色法測定脾、腎組織CaN活性。結(jié)果： 脾CaN活性在實驗性腹膜炎5d、10d、14d、21d呈持續(xù)性低水平（P<0.01）；腎CaN活性在實驗性腹膜炎10d達高峰14d、21d與10d相比呈下降趨勢但仍高于對照組，差異有顯著性。結(jié)論： 實驗性腹膜炎小鼠脾、腎CaN活性變化與病程進展有關(guān)。 【關(guān)鍵詞

3、】  腹膜炎;脾;腎;鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶    【ABSTRACT】  Objective:AIM To investigate the alteration of calcineurin activity in spleen and kidney in experimental peritonitis mice.Methods:36 Kunming mice were randomly divided into 6 groups，which were experimental Peritonitis groups for 48h、5d、10d、1

4、4d、21d and control group.In the groups of experimental peritonitis,the model of nonspecific peritonitis was induced by injecting ice acetate acid into mouses peritoneal cavity,and the same quatity of normal saline was injected to animals in control group.CaN activity in spleen and kidney was measure

5、d by using PNPP as substrate.Results:CaN activity in spleen was significantly decreased in experimental peritonitis groups of 5d、10d、14d、21d compared with that of control group（P<0.01）,while in kidney was increased for the groups of 10d、14d、21d（ P<0.01or P<0.05） compared with that of contro

6、l group.There was a peak time at 10d.Conclusion:CaN activity might be involved in functional regulation for spleen and kidney in experimental Peritonitis.    【KEY WORDS】  Peritonitis;Spleen;Kidney;CaN    鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(calcineurin,CaN)是迄今發(fā)現(xiàn)的唯一受Ca2+/鈣調(diào)素(calmodulin,CaM)調(diào)節(jié)的絲

7、/蘇氨酸蛋白磷酸酶,參與了多種生理功能調(diào)節(jié)1。既往發(fā)現(xiàn)CaN在淋巴細胞的活化和神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用2,CaN活性改變與多種疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，本研究對實驗性腹膜炎小鼠脾、腎CaN活性變化進行研究，為研究腹膜炎自愈過程中機體損傷和抗損傷機理提供理論依據(jù)。    1  材料與方法    1.1  動物分組及模型制備  選用健康昆明種小鼠36只，體重1822g，由浙江實驗動物中心提供。在標準飼養(yǎng)條件下，小鼠隨機分為6組，即腹膜炎48h、5d、10d、14d、21d與對照組，腹膜炎組腹腔注射1%冰醋酸0.2m

8、L，對照組腹腔注射等量生理鹽水，每組各6只。    1.2  酶活性測定  無機磷法測定CaN活性，以每小時每毫克蛋白的CaN分解底物對硝基苯磷酸(PNPP)產(chǎn)生1mol·L-1無機磷的量為一個活力單位（molPi/mgprot/hour）?？捡R斯亮藍法測定組織蛋白含量。測定試劑購自南京建成生物工程研究所，按試劑盒說明制備脾、腎組織樣本,操作按照說明書進行酶測定，考馬斯亮藍法測定組織蛋白。    1.3  統(tǒng)計學分析  運用 SPSS12.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理。實驗數(shù)據(jù)以平均

9、值±標準差（x±)表示，樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析。                                 2  結(jié)果    小鼠腹腔解剖觀察  實驗組小鼠腹腔注射冰醋酸后，精神萎糜，進食減少。腹腔解剖，

10、48h有腹膜和腸管壁充血、水腫，胃腸擴張明顯，有腹水。5d的小鼠，腹腔仍有充血，但充血減輕，水腫減輕，滲出的腹水被吸收，肝臟與膈肌之間及部分小腸之間粘連。注射10d后的小鼠腹腔中的滲出液體已大部分被吸收，腸管色澤恢復，有輕微充血和腸管壁輕微水腫的情況，仍有臟器的粘連情況。注射冰醋酸14d后的小鼠腹腔中滲出的液體已吸收，腸管壁的水腫不明顯，充血減輕。21天小鼠腹腔觀察已基本恢復正常，與空白對照組比較無明顯區(qū)別。    脾、腎CaN活性在實驗性腹膜炎48h無顯著性變化；脾的CaN活性在腹膜炎5d、10d、14d、21d組呈持續(xù)性低水平（P<0.01）(圖1)；腎

11、CaN活性在實驗性腹膜炎5d、10d 逐漸上升，10d達高峰（P<0.01），14d、21d與10d相比呈下降趨勢但仍高于對照組，差異有顯著性（P<0.05）(圖2)。各組小鼠脾、腎CaN的活性變化見表1。表1  不同組別小鼠脾、腎鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶活性比較注:*與對照組比較P<0.05，*與對照組比較P<0.01    3  討論    機體局部病變可引發(fā)全身各器官發(fā)生相應的反應。本研究采用比色法，對實驗性腹膜炎小鼠脾、腎CaN活性進行測定，發(fā)現(xiàn)實驗性腹膜炎小鼠CaN活性在脾、腎調(diào)控變化不同。

12、與對照組相比,脾CaN活性在實驗性腹膜炎5d、10d、14d、21d均呈顯著性降低。腎CaN活性在實驗性腹膜炎從5d升高，10d達高峰14d、21d仍高于對照組，差異有顯著性。以往研究顯示，CaN具有廣泛的組織分布，在神經(jīng)組織和T淋巴細胞中含量最為豐富，其中腦的CaN占腦總蛋白含量1%以上，在心臟和骨骼肌中亦有較高的表達，在肺、脾、腎和肝組織中也同樣存在。CaN不同的組織分布特性，表明其具有廣泛的組織生物學效應3。CaN的組織生物學效應是通過CaN活化達到的。有研究發(fā)現(xiàn)，正常Wistar大鼠CaN活化強弱特征表現(xiàn)為:脾、腎、肝、腦、肺、主動脈和心，其中以脾CaN活性最強，心臟CaN活性最弱4。

13、然而，當受外源性醛固酮處理4周后，Wistar大鼠CaN活化特性發(fā)生了明顯的變化，表現(xiàn)為:心、肺、脾和腦CaN活性明顯增高，其中心臟上升了147%、肺95%、脾65%、腦43%。本研究顯示小鼠脾CaN活性高于腎臟，實驗性腹膜炎自愈過程中，脾和腎的CaN活性變化不同。對腎性高血壓大鼠重要臟器CaN活性變化的研究發(fā)現(xiàn)，假手術(shù)組大鼠脾中CaN活性甚高，認為可能是外傷性刺激對假手術(shù)組大鼠脾臟組織中的CaN高表達造成了一定的影響5。而本研究中腹膜炎521dCaN活性呈持續(xù)性低水平，表明腹膜炎損傷與外傷性刺激脾的反應機理不同。腎內(nèi)CaN活性變化，證實在實驗性腹膜炎過程中腎組織有反應性變化，但在21d時Ca

14、N活性仍高于正常對照組，提示腹膜炎損傷自愈過程在細胞水平的恢復較腹腔觀察征象可能更長一些時間。腎CaN活性增強可能是細胞內(nèi)鈣大量內(nèi)流激活的結(jié)果，而脾的CaN活性下降可能來源于某種內(nèi)源性抑制因子。脾和腎在已有的研究資料中是含有CaN活性較高的器官，研究病理狀態(tài)下脾和腎CaN活性變化，對探討重要臟器結(jié)構(gòu)與功能保護具有重要意義。本研究結(jié)果提示實驗性腹膜炎小鼠脾、腎CaN活性變化與病程進展有關(guān)。有關(guān)小鼠腹膜炎CaN活性在脾、腎調(diào)控變化的不同機理有待進一步研究。 【參考文獻】  1 Gurerini D.Calcineurin:not just a simple protein phosphataseJ.Biochem Biophys Res Commun,1997,235(2):2712752 Yakel JL.Calcineurin regulation of synepic function:from ion channels to transmitter release and gene transcriptionJ.Trends Pharmacol Sci,1997,18(4):1241333 Liu J.FK506 and cyclosporin,molecular probes for studyin