ZEISSLSCM780使用注意事項(xiàng)

1、ZEISS LSCM 780 使用注意事項(xiàng)開(kāi)機(jī)： (之前必須鏡檢，確保樣本無(wú)誤，開(kāi)機(jī)后才發(fā)現(xiàn)樣本不能實(shí)驗(yàn)者，取消兩次實(shí)驗(yàn)資格 )1. 開(kāi)三相穩(wěn)壓電源 (注意：先開(kāi)穩(wěn)壓電源后面的黑色扳手開(kāi)關(guān) ，再按下穩(wěn)壓電源前面的綠色按鈕 ) 。如果出現(xiàn)報(bào)警聲，請(qǐng)馬上關(guān)閉穩(wěn)壓電源，并報(bào)告負(fù)責(zé)教師。2. 兩分鐘以后 依次打開(kāi)電源控制板上的三個(gè)開(kāi)關(guān)：先打開(kāi)主開(kāi)關(guān)MAIN SWITCH，再依次打開(kāi)SYSTEMS/PC 和 COMPONENTS 開(kāi)關(guān)。 注意：各個(gè)開(kāi)關(guān)不要同時(shí)按下，開(kāi)機(jī)時(shí)儀器會(huì)進(jìn)行自檢，每按下一個(gè)開(kāi)關(guān)，請(qǐng)等待相應(yīng)的部件自檢完畢后再開(kāi)下一個(gè)開(kāi)關(guān)。3. 打開(kāi)電腦開(kāi)關(guān) 。點(diǎn)擊圖標(biāo)，進(jìn)入桌面，當(dāng)看到桌面右下角圖

2、標(biāo)時(shí)，方可點(diǎn)擊桌面中央的軟件圖標(biāo)， 然后點(diǎn)擊 Start System開(kāi)啟軟件 。注意： 當(dāng)桌面右下角顯示圖標(biāo)臺(tái)儀器的蓋子掀開(kāi)，按一下時(shí)，不可啟動(dòng)軟件。這時(shí)把Reset 按鈕，等待顯示圖標(biāo)。電腦左邊 那注意： 如需使用 458nm或 488nm或 514nm激光線，則在 開(kāi)啟軟件后 再打開(kāi)氬離子(Ar +) 激光器。不需要使用這三種激光線，則不需要打開(kāi)氬離子激光器。氬離子激光器的 打開(kāi)順序 ：先打開(kāi)氬離子激光器正面的開(kāi)關(guān)ON ，再 順時(shí)針旋轉(zhuǎn)鑰匙 至 “” 的方向 ，等待綠色指示燈亮起 方可開(kāi)啟光路 ( 大約 5-10min ) 。注意：氬離子激光器在啟動(dòng)后，需要1h左右的預(yù)熱時(shí)間才能進(jìn)入穩(wěn)定

3、狀態(tài)。如果它的閑置時(shí)間在 1h以上，可將激光器扳鈕由“ laser run”位置扳至 “ idle power ” 處，保護(hù)激光器，延長(zhǎng)使用壽命。找細(xì)胞： 在明場(chǎng)下 ( 用 Transmitted light)找目標(biāo) : 點(diǎn)擊、 、注意：如果實(shí)驗(yàn)只使用空氣鏡，放置樣品后，建議先選擇低倍物鏡找細(xì)胞，再換用高倍物鏡微調(diào)即可。 切記 調(diào)焦和移動(dòng)前后、左右的滑竿時(shí)，不要太快太猛，以免物鏡頂?shù)綐悠坊蜉d物臺(tái)，這會(huì)嚴(yán)重磨損和劃花鏡頭，甚至碰碎鏡頭！切記顯微鏡左、右兩邊的粗準(zhǔn)焦螺旋上方各有5 個(gè)按鈕，實(shí)驗(yàn)人員不要碰觸， 否則可能無(wú)法用眼睛找細(xì)胞。水、油鏡使用： 如需使用水鏡或油鏡，水、油不要滴太多，以免從鏡頭

4、邊緣流入物鏡內(nèi)部污染鏡頭。 換細(xì)胞前后不要反復(fù)擦拭鏡頭， 擦拭過(guò)多容易磨花鏡頭，降低透過(guò)率，一般兩三個(gè)樣本后 再追加一滴水或油即可。 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后先用擦鏡紙將油擦盡，再用無(wú)水乙醇清潔。在熒光下 ( 用 Reflectedlight)找目標(biāo) :先打開(kāi)汞燈電源 ，然后點(diǎn)擊上圖片中的、注意：一、除非實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染的熒光蛋白效率低（鏡檢時(shí)發(fā)光的目標(biāo)不多，但仍然可以進(jìn)行試驗(yàn)），否則一般不要開(kāi)汞燈，壽命有限。 二、經(jīng)鏡檢確定需要使用汞燈的標(biāo)本應(yīng)集中觀察 , 節(jié)省時(shí)間 , 保護(hù)光源，樣本放置好后后再打開(kāi)汞燈電源。切記：不可頻繁開(kāi)關(guān)汞燈，汞燈點(diǎn)燃后至少 15 分鐘汞蒸汽才完全蒸發(fā)，因此打開(kāi)汞燈后 至少要 30 分鐘后

5、 才可以關(guān)閉汞燈電源， 汞燈關(guān)閉后不能馬上再次打開(kāi)使用，至少一小時(shí)以后等燈泡完全冷卻后再開(kāi)。激光掃描圖像獲?。河醚劬φ彝昙?xì)胞以后，要切換到激光掃描模式 來(lái)獲取圖像。依次點(diǎn)擊上圖片中的： 、 按鈕切記：從找細(xì)胞切換到圖象掃描 ，一定要記得點(diǎn)擊，否則容易損壞儀器。光路選擇設(shè)定 ：一、新設(shè)置光路： 點(diǎn)擊下圖上的 Smart Setup 按鈕，選擇自己所用的熒光探針，設(shè)定所需的顏色，然后點(diǎn)擊 Best signal ， 點(diǎn)擊 Apply 按鈕。注意：如果使用 Ar+激光器 , 點(diǎn)擊 Apply 前, 先確定激光器上的 綠色指示燈亮起二、使用原來(lái)的光路：在 File中 open 之前實(shí)驗(yàn)所得的一張圖片，

6、點(diǎn)擊頁(yè)面最下方的 Resue按鈕，此時(shí)軟件的一切參數(shù)均是打開(kāi)的那張圖片的參數(shù)。同樣注意：如果使用 Ar+激光器 , 點(diǎn)擊 Apply 前 , 先確定激光器上的 綠色指示燈亮掃描參數(shù)設(shè)定 ：光路設(shè)定后，點(diǎn)擊上圖中的 Live 按鈕預(yù)覽找目標(biāo)， 此時(shí)可以移動(dòng)樣品， 微調(diào)焦，調(diào)圖像熒光亮度，調(diào)透射圖 T-PMT亮度，調(diào)針孔大小等。 調(diào)好圖像后，點(diǎn)擊 Live處的 紅色 Stop 按鈕，再點(diǎn)擊 Snap按鈕拍照。切記：預(yù)覽結(jié)束后一定要先 Stop，再點(diǎn)擊 Snap,否則立刻就會(huì)死機(jī)。激光器輸出功率的調(diào)節(jié)要注意 ：激光器的輸出功率越高，熒光圖像和透射圖圖像就越亮， 但會(huì)造成熒光樣品的光漂白， 長(zhǎng)時(shí)間掃描

7、或?qū)晒庑再|(zhì)不穩(wěn)定的染料尤其明顯， 所以實(shí)驗(yàn)中盡量不要把激光器的輸出功率調(diào)的太高。 調(diào)節(jié)激光器的輸出功率時(shí)要 逐步調(diào)節(jié)，不要一下子將光標(biāo)拖到需要的功率， 否則容易損壞激光器或 AOTF(聲光調(diào)節(jié)濾光片 ) 。Pinhole 的調(diào)節(jié)要注意： Pinhole 越小，圖象的分辨率越高，但探測(cè)器收集到的熒光也越少，圖像亮度就越小，一般先選 1AU，如果圖像過(guò)暗可適當(dāng)增加。使用多通道（多 Track ）時(shí), 應(yīng)使每個(gè) Track 里設(shè)置的 pinhole 大小一致 (optical slice 一致 ) ，以保證不同通道探測(cè)的都是細(xì)胞同一層面的熒光；增益 Gain (Master) 的調(diào)節(jié)要注意： Ga

8、in (Master) 的設(shè)置不宜太高，原則上增益不要超過(guò) 800，同時(shí) Gain 設(shè)置太高也會(huì)導(dǎo)致背景過(guò)高，降低圖象的信噪比。如果信號(hào)太弱，可以適當(dāng)調(diào)高放大器的增益（Digital Gain），其默認(rèn)值為1，例如可以調(diào)高到1.5 左右（不要超過(guò)2）。背景 Digitaloffset的設(shè)定原則 :圖象最亮點(diǎn)不超過(guò)飽和值256（顯示紅色），圖象背景處的藍(lán)色雪花點(diǎn)不宜太多（藍(lán)色表示信號(hào)強(qiáng)度為零）。注意：準(zhǔn)備樣品的時(shí)候， 請(qǐng)將探測(cè)通道先關(guān)閉 （即將 Track 前的符號(hào)“”去掉） ，這樣高壓包上沒(méi)有加電壓，可以起到保護(hù)高壓包延長(zhǎng)壽命的作用。關(guān)機(jī)（與開(kāi)機(jī)順序相反） ：1關(guān)汞燈： 如果使用了汞燈，先把汞燈強(qiáng)度調(diào)到最小，再關(guān)閉開(kāi)關(guān)OFF。2. 關(guān)激光器：如果使用了 氬離子激光器 ，在實(shí)驗(yàn)完成后，先將氬離子激光器正面的鑰匙逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)至“” 的方向，等待排風(fēng)扇停止工作 ( 大約 5-10min ) ，再關(guān)閉 開(kāi)關(guān) OFF。其它激光器直接在軟件（Laser ）中關(guān)閉。3. 退出系統(tǒng)軟件。4. 關(guān)閉電腦。5. 依次關(guān)閉電源控制板上的三個(gè)開(kāi)