放線菌形態(tài)觀察

1、放線菌的形態(tài)觀察作者：喻曙光 學(xué)號：201000。 班級：生院2010級生命基地 生北周五第四組 同組者：?！緦嶒?zāi)康摹?學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法。2了解放線菌的形態(tài)特征。【實驗原理】高氏I號營養(yǎng)培養(yǎng)基高氏I號營養(yǎng)培養(yǎng)基是用來培養(yǎng)和觀察放線菌形態(tài)特征的合成培養(yǎng)基。此合成培養(yǎng)基的主要特點是含有多種化學(xué)成分已知的無機鹽，這些無機鹽可能相互作用而產(chǎn)生沉淀。因此，在混合培養(yǎng)基成分時，一般是按配方的順序依次溶解各成分，甚至有時還需要將兩中或多種成分分別滅菌，使用時再按比例混合。此外，合成培養(yǎng)基有的還要補加微量元素，如Fe元素。放線菌及插片法觀察放線菌放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭

2、氏陽性細(xì)菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長的叫基內(nèi)菌絲（簡稱“菌絲”），基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲（簡稱“氣絲”），并進一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。有的放線菌只產(chǎn)生基內(nèi)菌絲而無氣生菌絲。放線菌菌絲體有基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲組成，制片時不采用涂片法，以免破壞細(xì)胞及菌絲形態(tài)。通常采用插片法或玻璃紙法并結(jié)合菌絲體簡單染色進行觀察。在插片法中，首先將滅菌蓋玻片插入接種有放線菌的平板，使放線菌沿蓋玻片和培養(yǎng)基交接處生長而附著在蓋玻片上。取出蓋玻片可直接在顯微鏡下觀察放線菌在自然生長狀態(tài)下的形態(tài)特征，而且有利于對不同生長時期的放線菌形態(tài)進行觀察。在顯微鏡下

3、直接觀察時，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生。在油鏡下觀察，放線菌的孢子有球形、橢圓、桿狀或柱狀。能否產(chǎn)生菌絲體及由菌絲體分化產(chǎn)生的各種形態(tài)特征是放線菌分類鑒定的重要依據(jù)?！緦嶒灢牧稀?.菌種：青色鏈霉菌(S. glaucus )，弗氏鏈霉菌(S. fradiae )。 2培養(yǎng)基：高氏I號培養(yǎng)基。3儀器或其他用具：培養(yǎng)皿，蓋玻片，載玻片，接種針，鑷子，顯微鏡等?！緦嶒灢襟E】1配制高氏I號培養(yǎng)基（200mL）：按配方稱取高氏培養(yǎng)基各組分，先用少量冷水，將淀粉調(diào)成糊狀，倒入煮沸的水中，在火上加熱，邊攪拌邊加入其他成分，溶化后，補足水分至

4、200mL，調(diào)節(jié)pH，121滅菌20min。2倒平板：取融化并冷卻高氏I號培養(yǎng)基倒平板，倒平板時盡量使培養(yǎng)基厚一些，凝固待用。3 接種：無菌操作，用接種針挑取菌種培養(yǎng)物在平板上劃線接種，劃線要密，不能交叉。4 插片：以無菌操作用酒精泡過并在酒精燈上灼燒的鑷子將滅菌的蓋玻片以大約與培養(yǎng)基成45°角插入平板內(nèi)，并與劃線垂直，每個平板插入3個蓋玻片。5 培養(yǎng)：將平板倒置，28培養(yǎng)7天。6 鏡檢：用酒精泡過并在酒精燈上灼燒的鑷子小心拔出蓋玻片，擦去一面培養(yǎng)物，然后將有菌的一面朝下放在載玻片上，直接1040倍鏡檢，必要時可用油鏡觀察?！緦嶒灲Y(jié)果與分析】表（1）：各種菌絲形態(tài)特征項目基內(nèi)菌絲形態(tài)

5、氣生菌絲形態(tài)孢子絲形態(tài)青色鏈霉菌較長，疏松，多分枝毛狀緊密螺旋形弗氏鏈霉菌略短，較密，多分枝厚絮狀直條狀（一）繪圖表示孢子絲圖1弗氏鏈霉菌 圖2青色鏈霉菌 （二）實驗圖示 弗氏鏈霉菌及青色鏈霉菌圖3弗氏鏈霉菌 圖4弗氏鏈霉菌孢子絲 圖5青色鏈霉菌 圖6青色鏈霉菌孢子絲【思考題】1.鏡檢時如何區(qū)分放線菌基內(nèi)菌絲、氣生菌絲及孢子絲？答：氣生菌絲直生或分枝絲狀，較基內(nèi)菌絲粗，是指從基質(zhì)伸向空氣中的菌絲體。菌類的菌絲體多是匍匐在基質(zhì)上，或是貫通基質(zhì)而伸長的，為了孢子的形成而生長氣生菌絲。在一定條件下，水生菌類也可以生長氣生菌絲。真菌和放線菌的營養(yǎng)菌絲發(fā)育到一定時期，長出培養(yǎng)基外并伸向空間的菌絲稱為氣生菌絲。它疊生于營養(yǎng)菌絲上，以致可以覆蓋整個菌落表面。在光學(xué)顯微鏡下，顏色較深，直徑比營養(yǎng)菌絲粗，直形或彎曲，有的產(chǎn)生色素。在固體培養(yǎng)基上霉菌的菌絲分化為營養(yǎng)菌絲和氣生菌絲。營養(yǎng)菌絲深入到培養(yǎng)基內(nèi)吸收養(yǎng)料；氣生菌絲向空中生長，有些氣生菌絲發(fā)育到一定階段分化成繁殖菌絲，產(chǎn)生孢子。2.弗氏鏈霉菌和青色鏈霉菌的孢子絲有何區(qū)別？答：青色鏈霉菌的孢子絲為螺旋形，而弗氏鏈霉菌的孢子絲為直線形。