HPLC測定鹽酸異丙嗪糖漿中鹽酸異丙嗪的含量

1、HPLC測定鹽酸異丙嗪糖漿中鹽酸異丙嗪的含量                           作者：彭芳玲，陽利龍，龍榮，胡勤【摘要】  目的：建立高效液相色譜法測定鹽酸異丙嗪的含量。方法：以十八烷基硅烷鍵合硅膠（4.6 mm×150 mm，5 m）為色譜柱，以0.5%三乙醇胺溶液（用磷酸調(diào)pH至2.5）乙腈（65

2、35 v/v）為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長為249 nm。結(jié)果：鹽酸異丙嗪在 22.868.4 g/mL（r=0.9999）范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.97%，RSD為0.45%。結(jié)論：本測定方法簡便、快速、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可以有效控制鹽酸異丙嗪糖漿的含量。 【關(guān)鍵詞】  高效液相色譜法；鹽酸異丙嗪糖漿；鹽酸異丙嗪；含量測定    Abstract Objective: To establish an HPLC method for determination of promethazine hydrochlo

3、ride in promethazine hydrochloride syrup. Methods: The chromatographic conditions were a Hypersil BDS?C18 column (4.6 mm×150 mm, 5 m), 0.5% Triethanolamine (with H3PO4 to adjust pH 2.5)acetonitrile (6535 v/v) as the mobile phase, a flow rate at 1.0 mL/min and a wavelength of 249 nm used for det

4、ection. Results: The peak area of promethazine hydrochloride showed a good linearity in the range of 22.868.4 g/mL (r=0.9999). The average recovery was 99.97%, RSD= 0.45% (n=6). Conclusions: This method was simple and fast and reproducible, and it can be used for quality control of promethazine Hydr

5、ochloride syrup.    Key words HPLC; Promethazine hydrochloride syrup; Promethazine hydrochloride; Determination    鹽酸異丙嗪是常用的組胺H1受體拮抗劑，具有明顯的抗過敏和鎮(zhèn)靜作用，因其不良反應(yīng)小，臨床應(yīng)用廣泛。本院自制的鹽酸異丙嗪糖漿應(yīng)用于臨床多年，主要用于小兒支氣管過敏及上呼吸道感染引起的咳嗽。鹽酸異丙嗪屬于吩噻嗪類藥物，結(jié)構(gòu)中的硫易氧化變色，配制成的糖漿在室溫條件下僅能維持6 d1，因此，我們在自擬處方中加入了抗氧化

6、劑，為了區(qū)分同類產(chǎn)品，防止在調(diào)配過程中發(fā)生差錯，加入了適量色素亮蘭。在一定的條件下，未被氧化的硫與金屬離子形成有色配位化合物，采用紫外分光光度法測定其含量2?3，由于加入了色素亮蘭和羥苯乙酯，影響其結(jié)果，改用HPLC測定其含量，經(jīng)過多次試驗可消除單糖漿、抗氧劑、色素等的干擾，且方法快速、準(zhǔn)確、靈敏，可以用于該制劑的質(zhì)量控制。    1  儀器與試劑    1.1  儀器    Agilent 1100高效液相色譜議（G1311A四元泵，G131A自動進(jìn)樣器，G131A柱溫箱，G1311

7、A檢測器，Chemstations工作站），BS210S型電子天平（德國賽多利斯股份公司）。    1.2  試劑    鹽酸異丙嗪對照品（中國藥品生物制品檢定所），甲醇為色譜純（天津科密歐化學(xué)試劑有限公司），水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純，鹽酸異丙嗪糖漿（自制），其他輔料均符合中國藥典（二部）2005版的規(guī)定。    1.3  處方    鹽酸異丙嗪2.0 g，亞硫酸氫鈉、羥苯乙酯、單糖漿、桔子香精、亮蘭適量，純化水加至1 000 mL。 &

8、#160;  2  方法與結(jié)果    2.1  色譜條件    色譜柱（大連依利特）：Hypersil BDS C18柱（4.6 mm×150 mm，5 m），柱溫30 ；流動相：0.5%三乙醇胺溶液（用磷酸調(diào)pH至2.5）乙腈（6535 v/v）；流速：1.0 mL/min，檢測波長249 nm4；進(jìn)樣量10 L；定量方法為外標(biāo)法。    2.2  鹽酸異丙嗪貯備液的制備    精密稱取經(jīng)105 干燥至恒重的鹽酸異丙嗪對照品

9、11.4 mg置100 mL棕色容量瓶中加水溶解至刻度，搖勻，配成0.114 mg/mL的貯備液，用0.45 m的微孔濾膜過濾，濾液放于冰箱內(nèi)（28 ）保存?zhèn)溆谩?#160;   2.3  空白樣品的制備    按處方比例配制不含鹽酸異丙嗪的空白溶液，用0.45 m的微孔濾膜過濾，濾液放于冰箱內(nèi)（28 ）保存?zhèn)溆谩?#160;   2.4  供試品溶液的制備    精取鹽酸異丙嗪糖漿2 mL置100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，用0.45 m的微孔濾膜過濾，濾液放于冰

10、箱內(nèi)（28 ）保存?zhèn)溆谩?#160;   2.5  空白干擾試驗    在上述色譜條件下，分別進(jìn)樣鹽酸異丙嗪對照品（22.8 g/mL）和鹽酸異丙嗪供試品溶液及空白樣品各10 L，鹽酸異丙嗪保留時間6.15 min，鹽酸異丙嗪峰形尖銳對稱，并能與制劑中輔料的色譜峰很好分離，見圖1。    2.6  標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備    精密稱取“2.2”的貯備液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL分別置10 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件進(jìn)樣10 L測定

11、，以鹽酸異丙嗪峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A=41.7162C+50.59（r=0.9999），鹽酸異丙嗪在22.868.4 g/mL范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。百事通    2.7  進(jìn)樣精密度試驗    精取貯備液配成45.6 g/mL和57.0 g/mL的對照品溶液，按上述色譜條件測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 L，測定峰面積，結(jié)果表明精密度良好，RSD分別為0.95%和1.2%。    2.8  重復(fù)性試驗  

12、;  精取同一批供試品5份，按“2.4”處理樣品，按上述色譜條件測定，記錄峰面積得RSD=1.1%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。    2.9  穩(wěn)定性試驗    取供試品（批號061110）在室溫下放置，分別在0、1、3、6個月測定峰面積，鹽酸異丙嗪的RSD=1.3%，結(jié)果表明鹽酸異丙嗪糖漿制劑在6個月內(nèi)穩(wěn)定。    2.10  加樣回收率試驗    精密移取已知含量的樣品（批號071011，1.93 mg/mL）1 mL 6份，分別置100 mL容量

13、瓶（棕色）中，再分別加入高、中、低3個濃度的鹽酸異丙嗪對照品各2份，用蒸餾水定容，搖勻，按樣品測定方法測定其含量，計算回收率，見表1。表1  回收率試驗結(jié)果    2.11  樣品測定    取3批樣品分別精取2 mL，均按“2.4”供試品溶液制備，在上述的色譜條件下，測定每一供試品的峰面積，計算含量，結(jié)果見表2。    表2  樣品測定結(jié)果(n3)    批號樣品含量（mg/mL）平均含量（mg/mL）RSD（%）0709182.082.062

14、.032.061.240710111.931.921.941.930.520711081.891.911.871.881.25    3  討論    藥典測定鹽酸異丙嗪用鹽酸（91 000）作溶劑定容4，本文使用鹽酸（91 000）和重蒸餾水作為溶劑5?6，分別在200400 nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果顯示，兩種溶劑作為空白，在200400 nm范圍內(nèi)掃描，鹽酸異丙嗪的曲線結(jié)果一致，且吸收峰強度相同，因此用重蒸餾水代替鹽酸，簡化了操作步驟，節(jié)約了檢驗成本。    本文對流動相甲醇、水、0.5%三乙醇

15、胺溶液及乙腈的不同比例進(jìn)行了多次試驗，結(jié)果表明：選用0.5%三乙醇胺溶液（用磷酸調(diào)pH至2.5）乙腈（6535 v/v）為流動相能得到滿意的色譜效果7?9。    鹽酸異丙嗪可采用提取中和法、萃取分光光度法、氯化鈀比色法、差示分光光度法等的測定方法10?12，但大都需經(jīng)提取分離，操作繁瑣、費時，提取所需溶劑量大，易引入誤差，本文方法不經(jīng)任何處理，直接采用HPLC測定鹽酸異丙嗪含量，具有專屬性強，操作簡易，結(jié)果準(zhǔn)確的優(yōu)點，符合醫(yī)院制劑的質(zhì)量控制要求?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 駱 勤, 焦海勝, 李 芳, 等. 鹽酸異丙嗪糖漿穩(wěn)定性及含量測定方法探究J. 衛(wèi)生職業(yè)

16、教育, 2004, 22(20): 109?111.2 劉文英. 藥物分析M. 第5版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2006, 179?185.3 楊志斌, 姚慧琴. 鹽酸異丙嗪藥物的光度測定法J. 南昌大學(xué)學(xué)報（理科版）, 1994, 18(3): 313?316.4 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(二部)S. 2005年版. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2005: 511?512.5 羅建華, 江翊國. 紫外分光光度法測定夜咳靈口服液中鹽酸異丙嗪含量J. 抗感染藥學(xué), 2006, 3(1): 30?31.6 李 珂, 王 瑞, 齊永秀, 等. 紫外分光光度法測定鹽酸異丙嗪片的含量J. 泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2007, 28(3): 185?187.7 楊永剛, 劉國華. HPLC法測定復(fù)方止咳糖漿鹽酸異丙嗪和氫溴酸美沙芬的含量J. 中國藥品標(biāo)準(zhǔn), 2005, 6(1): 20?21.8 賈 飛, 陶巧鳳, 施華琴. 高效液相色譜法測定傷風(fēng)止咳顆粒中三組分的含量J. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志, 2005,