離與觀察實(shí)驗(yàn)六：葉綠體的分離

1、實(shí)驗(yàn)六：葉綠體的分離與觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?通過植物細(xì)胞葉綠體的分離，了解細(xì)胞器分離的一般原理和方法。 二、實(shí)驗(yàn)原理： 分離細(xì)胞器的常用方法是將組織勻漿后懸浮在等滲介質(zhì)中進(jìn)行差速離心。一個(gè)顆粒在離心場(chǎng)中的沉降速率取決于顆粒的大小、形狀和密度，也同離心力以及懸浮介質(zhì)的粘度有關(guān)。在一給定的離心場(chǎng)中，同一時(shí)間內(nèi)，密度和大小不同的顆粒其沉降速率不同。依次增加離心力和離心時(shí)間，就能夠使非均一懸浮液中的顆粒按其大小、密度先后分批沉降在離心管底部，分批收集即可獲得各種亞細(xì)胞組分。 葉綠體的分離應(yīng)在等滲溶液(0.35mol/L氯化鈉或0.4mol/L蔗糖溶液)中進(jìn)行, 以免滲透壓的改變使葉綠體受到損傷。將勻漿液

2、1000r/min的條件下離心2min, 以去除其中的組織殘?jiān)臀幢黄扑榈耐暾?xì)胞。然后，在3000r/min的條件下離心5min，即可獲得沉淀的葉綠體(混有部分細(xì)胞核)。分離過程最好在05的條件下進(jìn)行；如果在室溫下，要迅速分離和觀察。葉綠體一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究對(duì)象，是植物細(xì)胞中較大的一種細(xì)胞器，利用低速離心即可分離集中進(jìn)行各種研究。 三、實(shí)驗(yàn)用品 1、器材：a 主要設(shè)備: 普通離心機(jī)、組織搗碎機(jī)、天平。 b 小型器材:燒杯，量筒，滴管，離心管，紗布，載片、蓋片。 2、材料：新鮮菠菜。 3、試劑：0.35mol/L氯化鈉溶液。四、實(shí)驗(yàn)方法 1、葉綠體的分離與觀察 取新

3、鮮的嫩菠菜葉，洗凈擦干去除葉梗脈 取30克放入150ml氯化鈉溶液 入組織搗碎機(jī)勻漿，低速勻漿（5000r/min）35min（破碎細(xì)胞） 勻漿液用6層紗布過濾，取4ml 1000r/min離心2min（去除組織殘?jiān)臀幢黄扑榈募?xì)胞） 取上清 3000r/min離心5min 保留沉淀（即混有部分細(xì)胞核的葉綠體） 用氯化鈉溶液懸浮 在光學(xué)顯微鏡下觀察 2、菠菜葉手切片觀察 新鮮菠菜葉 刀片切出一斜面置于載玻片上；或者用鑷子輕輕撕下表皮，置于載片上。 滴加12d氯化鈉溶液 蓋上蓋片顯微鏡下觀察 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、葉綠體的分離和觀察 普通光鏡下，可看到葉綠體為綠色橄欖形，在高倍鏡下可看到葉綠體內(nèi)部含有較深的綠色小顆粒，即基粒。 2、菠菜葉手切片觀察 在普通光鏡下可以看到三種細(xì)胞：(1)表皮細(xì)胞：為邊緣呈鋸齒形的鱗片狀細(xì)胞；(2)保衛(wèi)細(xì)胞：為構(gòu)成氣孔的成對(duì)存在的腎形細(xì)胞；(3)葉肉細(xì)胞：為排列成柵狀的長(zhǎng)形和橢圓形細(xì)胞。葉綠體呈綠色橄欖形，在高倍鏡下還可以看到綠色的基粒。 六、作 業(yè) 根據(jù)徒手切片觀察結(jié)果，繪制帶有葉綠體的菠菜葉的結(jié)構(gòu)模式圖。 葉綠體的形狀，大小，數(shù)目 形狀：