月季的組織培養(yǎng)

1、月季的組織培養(yǎng)月季的組織培養(yǎng)方案講演目 錄 1、外植體的選擇 2、外植體的清洗與消毒 3、接種與培養(yǎng) 4、繼代增殖 5、壯苗培養(yǎng)與生根 6、總結(jié) 外植體很小時(shí)，有利于培養(yǎng)脫毒的植株。對(duì)月季的杉樹壞疽環(huán)斑病毒可通過莖尖培養(yǎng)的方式達(dá)到脫毒的目的，如果單純?yōu)榱丝焖俜敝?，可用大的莖尖或莖段進(jìn)行離體培養(yǎng)，這時(shí)外植體的大小決定了莖尖的成活比例。 一般說外植體愈大，成活率愈高，成苗時(shí)間愈短。莖尖在110mm 長(zhǎng)短時(shí)，對(duì)形成多芽苗最有效，不但多芽苗所占百分率高，而且每個(gè)莖段的側(cè)枝數(shù)也比較多。外植體的大小同時(shí)影響外植體自身的發(fā)育和月季組培苗莖的增殖，外植體的長(zhǎng)度在9.010.0mm，直徑在3.03.5mm范圍時(shí)

2、，莖的增殖和發(fā)育是最好的。外植體的選擇 外植體的取材部位對(duì)芽的萌發(fā)也有影響，“Gold Glow”和“Improved fire”月季的側(cè)芽如果在不同激素的培養(yǎng)基上進(jìn)行組培，可發(fā)現(xiàn)在枝條頂部和基部的芽發(fā)育慢，而枝條中部的芽發(fā)育快。在研究中發(fā)現(xiàn)靠近外植體頂端的芽較其他部位芽的發(fā)育慢，在莖尖脫毒培養(yǎng)時(shí)，由嫩莖的頂芽得到的外植體成活率高于腋芽。在實(shí)際工作中由于頂芽數(shù)量少，故月季的組培依舊常常使用腋芽作為外植體，這時(shí)一般需要進(jìn)行莖切除頂芽（摘心）以打破頂端優(yōu)勢(shì)、促使腋芽健壯生長(zhǎng)，以促進(jìn)嫩莖的增殖。 此外，外植體的取材時(shí)間及培養(yǎng)所需時(shí)間對(duì)月季嫩莖的發(fā)育和增殖也有影響。對(duì)于“Bulgarian rose”

3、而言，選取外植體的最佳時(shí)間是冬季（13月），而“Improved fire”月季的培養(yǎng)時(shí)間以28d繼代一次較好，超過 28d，莖的數(shù)目就不再增加了。 采回的枝條切去葉，再剝?nèi)ジ皆谇o上的葉柄及皮刺，先整段用洗手刷沾濃洗衣粉水仔細(xì)刷洗，再用自來水沖洗干凈，放置在小木板上，用利刀切成2-3cm/段，每段至少一個(gè)側(cè)芽， 無菌條件下用70%酒精表面消毒30-40s，再用0.1%HgCl2 2溶液滅菌5-10min，最后用無菌水沖洗3-5次。外植體的清洗與消毒 接種操作的程序： 1.接種室的消毒 2.器皿器具滅菌 3.材料的分離、切取和接種 垂直接種和斜向上45度接種是最佳的接種方式，腋芽再生芽數(shù)較多，且

4、生長(zhǎng)健壯，可能與植物的生長(zhǎng)極性有關(guān)。接種與培養(yǎng) 接種過程中的污染 ：1.細(xì)菌性污染主要癥狀：培養(yǎng)材料附近出現(xiàn)粘液狀和發(fā)酵泡沫狀 物體。 接種三五天可發(fā)現(xiàn)。原 因：外植體帶菌、培養(yǎng)基滅菌不徹底、操作 手法不當(dāng)。2.真菌性污染 ：一般是指霉菌引起的污染 原 因：接種室內(nèi)的空氣不清潔、超凈工作臺(tái)的 過濾效果不理想。 誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基（硝酸鹽、鉀和銨的含量高），附加適量的細(xì)胞分裂素6-卞氨基嘌呤（6-BA）0.5-3.0mg/L和生長(zhǎng)素萘乙酸（NAA）0.01-1.0mg/L,且培養(yǎng)基中添加蔗糖有增加叢生芽數(shù)量的作用。壯苗培養(yǎng)與生根1、壯苗培養(yǎng)在繼代培養(yǎng)過程中，細(xì)胞分裂素濃度的增加有助于增

5、殖系數(shù)的提高。但伴隨著增殖系數(shù)的提高，增殖的芽往往出現(xiàn)生長(zhǎng)勢(shì)減弱，不定芽短小、細(xì)弱，無法進(jìn)行生根培養(yǎng)的現(xiàn)象；即使能夠生根，移栽成活率也不高，必須經(jīng)過壯苗培養(yǎng)。壯苗培養(yǎng)時(shí)，可將生長(zhǎng)較好的芽分成單株培養(yǎng)，而將一些尚未成型的芽分成幾個(gè)芽叢培養(yǎng)。通過選擇適宜的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的種類及不同濃度配比，可以同時(shí)滿足增殖和壯苗的不同要求。高濃度的生長(zhǎng)素和低濃度的細(xì)胞分裂素的組合有利于形成壯苗。因此，在以叢生芽方式進(jìn)行增殖時(shí)，適當(dāng)降低培養(yǎng)基中BA等細(xì)胞分裂素的濃度，并增加NAA等生長(zhǎng)素的濃度，就能達(dá)到壯苗培養(yǎng)的目的。在實(shí)際生產(chǎn)中，我們一般用較低濃度的細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素組成合理的比列，將有效增殖系數(shù)控制在3.0

6、-5.0，以實(shí)現(xiàn)增殖和壯苗的雙重目的。2、生根培養(yǎng) 將成叢的試管苗分離成單苗，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)容器內(nèi)誘導(dǎo)生根的方法。試管苗生根的優(yōu)劣主要體現(xiàn)在根系質(zhì)量（粗度、長(zhǎng)度）和根系數(shù)量（條數(shù)）吸收方面。不僅要求不定根比較粗壯，更重要的是要有較多的毛細(xì)根，以擴(kuò)大根系的吸收面積，增強(qiáng)根系的吸收能力，提高移栽成活率。根系的長(zhǎng)度不宜太長(zhǎng)，在粗而少與細(xì)而多之間，可能以后者較好。在生根階段對(duì)培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件可進(jìn)行調(diào)整，減少試管苗對(duì)異養(yǎng)條件的依賴，逐步增強(qiáng)光合作用的能力。對(duì)于大多數(shù)物種來說，誘導(dǎo)生根需要有適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)素，其中最常用的是NAA和IBA，濃度一般為0.1-10.0mg/L。但唐菖蒲、水仙和草莓等組培苗很容易在無生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基上生根。一般情況下礦質(zhì)元素濃度較高時(shí)有利于莖、葉生長(zhǎng)，較低時(shí)有利于生根。生根培養(yǎng)基中無機(jī)鹽和蔗糖濃度減少一半，光照強(qiáng)度由原來的500-1000lx提高到1000-5000lx，能刺激小植株自身進(jìn)行光合作用制造有機(jī)物，以便由異養(yǎng)型向自養(yǎng)型過渡。在這種條件下，植物能較好的生根，對(duì)水分脅迫和疾病的抗性也會(huì)有所增強(qiáng)，植株可能表現(xiàn)出生長(zhǎng)遲緩和較輕微的失綠，但生產(chǎn)實(shí)踐證明，這樣的幼苗，要比在低光強(qiáng)條件下的較綠較高的幼苗移栽成活率高。生根階段采用自然光照比燈光照明所形成的試管苗更能適應(yīng)外界環(huán)