輸血相容性檢測

1、輸血相容性檢測輸血相容性檢測內(nèi)內(nèi) 容容 提提 要要一一二二三三紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)抗體的篩選及鑒定抗體的篩選及鑒定交叉配血交叉配血四四抗篩和配血結(jié)果分析抗篩和配血結(jié)果分析五五案例分析案例分析紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)u鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)u抗人球蛋白試驗(yàn)抗人球蛋白試驗(yàn)u酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)u凝聚胺試驗(yàn)?zāi)郯吩囼?yàn)u微柱凝膠免疫試驗(yàn)微柱凝膠免疫試驗(yàn)u鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)鹽水介質(zhì)中紅細(xì)胞上的抗原決定簇與相應(yīng)抗鹽水介質(zhì)中紅細(xì)胞上的抗原決定簇與相應(yīng)抗體分子上的抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，體分子上的抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼

2、可見的凝集。成肉眼可見的凝集。用于用于IgMIgM抗體抗體的檢出、鑒定、鹽水配血試驗(yàn)以的檢出、鑒定、鹽水配血試驗(yàn)以及血型的鑒定。及血型的鑒定。當(dāng)當(dāng)特異性的特異性的IgGIgG類類抗抗A A、抗、抗B B的濃度足夠大時(shí)，的濃度足夠大時(shí)，在鹽水介質(zhì)里也能與相應(yīng)的紅細(xì)胞發(fā)生凝集在鹽水介質(zhì)里也能與相應(yīng)的紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)，與紅細(xì)胞表面抗原位點(diǎn)數(shù)目和抗原決反應(yīng)，與紅細(xì)胞表面抗原位點(diǎn)數(shù)目和抗原決定簇位置有關(guān)。定簇位置有關(guān)。方法：方法：玻片法玻片法- -便于顯微鏡觀察結(jié)果便于顯微鏡觀察結(jié)果 試管法試管法- -適用于不同溫度、便于洗滌適用于不同溫度、便于洗滌反應(yīng)溫度：反應(yīng)溫度：4 42222臨床意義：鹽水凝集

3、試驗(yàn)陽性，并在臨床意義：鹽水凝集試驗(yàn)陽性，并在3737也有也有活性的抗體有意義。室溫有活性，活性的抗體有意義。室溫有活性，3737無活性無活性者臨床意義不大。者臨床意義不大。優(yōu)點(diǎn)：簡便、快捷、直觀。優(yōu)點(diǎn)：簡便、快捷、直觀。 缺點(diǎn)：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。缺點(diǎn)：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。u鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)抗人球蛋白試驗(yàn)是抗人球蛋白試驗(yàn)是19451945年由年由CoombsCoombs等人建等人建立的，又稱立的，又稱CoombsCoombs試驗(yàn)。抗人球蛋白試驗(yàn)試驗(yàn)?？谷饲虻鞍自囼?yàn)的建立在血型血清學(xué)上有著非常重要的意義。的建立在血型血清學(xué)上有著非常重要的意義。分為直接抗人球蛋白試驗(yàn)（分為直接抗

4、人球蛋白試驗(yàn)（DATDAT）和間接抗）和間接抗人球蛋白試驗(yàn)（人球蛋白試驗(yàn)（IATIAT）。）。u抗人球蛋白試驗(yàn)抗人球蛋白試驗(yàn)IgGIgG類血型抗體類血型抗體（主要是免疫抗體，如（主要是免疫抗體，如RhRh血型血型抗體）分子量小，與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，抗體）分子量小，與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)，稱在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)，稱之為不完全抗體，但在加入抗之為不完全抗體，但在加入抗-IgG-IgG后，以其搭后，以其搭橋作用則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)。橋作用則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)。補(bǔ)體補(bǔ)體成分在體內(nèi)被紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物激活成分在體內(nèi)被紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物激活以后，結(jié)合在

5、紅細(xì)胞表面。在體外含補(bǔ)體的多以后，結(jié)合在紅細(xì)胞表面。在體外含補(bǔ)體的多克隆抗體，或抗克隆抗體，或抗C3bC3b、抗、抗C3dC3d等單特異性抗體與等單特異性抗體與補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞反應(yīng)，使之凝集也稱為抗球補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞反應(yīng)，使之凝集也稱為抗球蛋白試驗(yàn)。蛋白試驗(yàn)?？谷饲虻鞍自囼?yàn)原理抗人球蛋白試驗(yàn)原理 DATDAT是檢測體內(nèi)致敏紅細(xì)胞的一種方法，是檢測體內(nèi)致敏紅細(xì)胞的一種方法，用于用于檢查紅細(xì)胞是否已被不完全抗體所致敏，檢查紅細(xì)胞是否已被不完全抗體所致敏，尤其尤其是是IgGIgG和和C3dC3d包被的紅細(xì)胞。包被的紅細(xì)胞。應(yīng)用：應(yīng)用： HDNHDN和自身免疫性溶血性貧血的診斷和自身免疫性溶血性貧血的

6、診斷 紅細(xì)胞被藥物抗體致敏的檢查紅細(xì)胞被藥物抗體致敏的檢查 急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的檢查急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的檢查直接抗人球蛋白試驗(yàn)直接抗人球蛋白試驗(yàn)IATIAT是是檢測血清中不完全抗體的一種，檢測血清中不完全抗體的一種，用于測用于測定在體外能引起紅細(xì)胞致敏的抗體。定在體外能引起紅細(xì)胞致敏的抗體。應(yīng)用：應(yīng)用：血型的鑒定，如血型的鑒定，如RhRh血型血型抗體的檢出和鑒定抗體的檢出和鑒定交叉配血交叉配血間接抗人球蛋白試驗(yàn)間接抗人球蛋白試驗(yàn)原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有負(fù)電原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有負(fù)電荷，是紅細(xì)胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能荷，是紅細(xì)胞相互排斥的原理。蛋白

7、水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細(xì)胞表面的負(fù)電消化破壞這種唾液酸，減少紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷以及紅細(xì)胞之間的排斥力，縮短了紅細(xì)胞之荷以及紅細(xì)胞之間的排斥力，縮短了紅細(xì)胞之間的間距，使間的間距，使IgGIgG抗體分子能與有相應(yīng)抗原的抗體分子能與有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集常用的酶（常用的酶（0.5%0.5%）：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、）：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶無花果酶u酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 酶法能顯著增強(qiáng)一些抗原抗體系統(tǒng)的反應(yīng)活性，酶法能顯著增強(qiáng)一些抗原抗體系統(tǒng)的反應(yīng)活性，RhRh和和KiddKidd系統(tǒng)最明顯系統(tǒng)最明顯缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 酶法處理酶法處理RBCRB

8、C，蛋白酶會(huì)使，蛋白酶會(huì)使RBCRBC的抗原結(jié)構(gòu)破的抗原結(jié)構(gòu)破壞和變性（壞和變性（MM、N N、FyFya a、FyFyb b） 操作繁復(fù)，少數(shù)人對酶液過敏操作繁復(fù)，少數(shù)人對酶液過敏u酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)原理：原理： 凝聚胺是一種多價(jià)陽離子聚合物，在溶液中有凝聚胺是一種多價(jià)陽離子聚合物，在溶液中有多個(gè)陽離子基團(tuán)，能中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，多個(gè)陽離子基團(tuán)，能中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，并借助正負(fù)電荷的作用，并借助正負(fù)電荷的作用，引起紅細(xì)胞的非特異引起紅細(xì)胞的非特異性凝集。性凝集。 當(dāng)紅細(xì)胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育后，當(dāng)紅細(xì)胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育后，IgGIgG抗體與紅細(xì)胞上相應(yīng)的抗原結(jié)合

9、在凝聚胺的作抗體與紅細(xì)胞上相應(yīng)的抗原結(jié)合在凝聚胺的作用下發(fā)生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分，用下發(fā)生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分，再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負(fù)電荷與再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負(fù)電荷與凝聚胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消凝聚胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消失，而真正的凝集不會(huì)消失。失，而真正的凝集不會(huì)消失。u凝聚胺試驗(yàn)?zāi)郯吩囼?yàn)u微柱凝膠試驗(yàn)微柱凝膠試驗(yàn)原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化學(xué)物質(zhì)做原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化學(xué)物質(zhì)做成微型凝膠柱，柱的上端有一個(gè)加樣反應(yīng)室。成微型凝膠柱，柱的上端有一個(gè)加樣反應(yīng)室?？乖贵w反應(yīng)后離心，凝膠柱起過篩作用，抗原抗體反

10、應(yīng)后離心，凝膠柱起過篩作用，紅細(xì)胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝紅細(xì)胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝膠的上部，未凝集的紅細(xì)胞通過凝膠的間隙，膠的上部，未凝集的紅細(xì)胞通過凝膠的間隙，沉積到底部。沉積到底部。微柱凝膠免疫反應(yīng)的本質(zhì)：凝集反應(yīng)微柱凝膠免疫反應(yīng)的本質(zhì)：凝集反應(yīng)紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)凝集。根據(jù)紅細(xì)紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)凝集。根據(jù)紅細(xì)胞在膠質(zhì)介質(zhì)中的位置肉眼判斷。胞在膠質(zhì)介質(zhì)中的位置肉眼判斷。u微柱凝膠試驗(yàn)微柱凝膠試驗(yàn)特異性膠：抗特異性膠：抗A A、抗抗B B、抗、抗D D中性膠：對照孔、中性膠：對照孔、反定型反定型抗人球蛋白膠：抗人球蛋白膠：抗篩、交叉配血抗篩、交叉配血u

11、幾種方法的比較幾種方法的比較方法方法優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)鹽水法鹽水法操作方便操作方便, ,費(fèi)用低廉費(fèi)用低廉只能檢出不相配合完全抗體只能檢出不相配合完全抗體, ,不能檢不能檢出不相配合的不完全抗體出不相配合的不完全抗體 抗球蛋抗球蛋白法白法檢測不完全抗體最靈敏檢測不完全抗體最靈敏的方法的方法 操作復(fù)雜、不利于急診檢查和血庫的操作復(fù)雜、不利于急診檢查和血庫的大批量工作大批量工作酶法酶法增強(qiáng)增強(qiáng)Rh Rh 、KiddKidd系統(tǒng)系統(tǒng)破壞破壞MM、N N、S S、s s、Fy(a) Fy(a) 、Fy(b)Fy(b)抗原抗原結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu), ,易失活易失活, ,壽命短壽命短, ,反應(yīng)時(shí)間長反應(yīng)時(shí)間長 凝聚胺凝聚

12、胺法法方便、應(yīng)用最廣方便、應(yīng)用最廣KellKell系統(tǒng)部分抗體如抗系統(tǒng)部分抗體如抗K K 、抗、抗 kp(a) kp(a) 、抗抗kp(b)kp(b)檢測不出檢測不出, ,需要抗球蛋白試驗(yàn)需要抗球蛋白試驗(yàn). .且肝素對其有影響且肝素對其有影響, ,易引起假陰性易引起假陰性. .微柱凝微柱凝膠法膠法國際安全輸血檢查的推國際安全輸血檢查的推薦方法，靈敏度高、重薦方法，靈敏度高、重復(fù)性好、特異性好、檢復(fù)性好、特異性好、檢測結(jié)果可較長時(shí)間保存測結(jié)果可較長時(shí)間保存費(fèi)用高費(fèi)用高抗體的篩選及鑒定抗體的篩選及鑒定有臨床意義的抗體：能引起新生兒溶血病、有臨床意義的抗體：能引起新生兒溶血病、引發(fā)溶血性輸血反應(yīng)，或

13、者使輸入的紅細(xì)胞引發(fā)溶血性輸血反應(yīng)，或者使輸入的紅細(xì)胞存活期減少的在存活期減少的在3737有反應(yīng)的同種異型抗體有反應(yīng)的同種異型抗體不規(guī)則抗體：抗不規(guī)則抗體：抗A A，抗，抗B B以外的抗體以外的抗體包括：同種抗體和自身抗體包括：同種抗體和自身抗體u抗體篩選方法抗體篩選方法鹽水介質(zhì)凝集法鹽水介質(zhì)凝集法抗人球蛋白法抗人球蛋白法凝聚胺法凝聚胺法微柱凝膠法微柱凝膠法結(jié)果的判讀與解釋結(jié)果的判讀與解釋溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反應(yīng)陽性結(jié)果。先觀察有無溶血，后觀察有無應(yīng)陽性結(jié)果。先觀察有無溶血，后觀察有無凝集。凝集。記錄結(jié)果，并與以前結(jié)果對照。記錄結(jié)果，并與以

14、前結(jié)果對照?？贵w篩選試驗(yàn)不一定能檢出所有有臨床意義抗體篩選試驗(yàn)不一定能檢出所有有臨床意義的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量效應(yīng)的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量效應(yīng)的抗體，可能被漏檢。的抗體，可能被漏檢。u抗體鑒定抗體鑒定通過篩選，抗體一經(jīng)檢出，應(yīng)進(jìn)一步作抗體鑒通過篩選，抗體一經(jīng)檢出，應(yīng)進(jìn)一步作抗體鑒定試驗(yàn)，以確定其特異性。定試驗(yàn)，以確定其特異性。自身細(xì)胞檢查自身細(xì)胞檢查 - - 排除非特異性排除非特異性 譜紅細(xì)胞檢查譜紅細(xì)胞檢查u抗體鑒定抗體鑒定譜紅細(xì)胞：譜紅細(xì)胞： 一般是由一般是由8-168-16人份的已知血型表現(xiàn)型人份的已知血型表現(xiàn)型O O型紅細(xì)型紅細(xì)胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)

15、譜胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)譜紅細(xì)胞的反應(yīng)格局一般可以鑒定常見的抗體。紅細(xì)胞的反應(yīng)格局一般可以鑒定常見的抗體。方法：方法： 在鹽水法基礎(chǔ)上、靈活應(yīng)用白蛋白介質(zhì)法、在鹽水法基礎(chǔ)上、靈活應(yīng)用白蛋白介質(zhì)法、酶技術(shù)及抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)。酶技術(shù)及抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)。交叉配血交叉配血主側(cè)：主側(cè)：受血者血清受血者血清+ +供者紅細(xì)胞供者紅細(xì)胞 檢測對供者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體檢測對供者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體次側(cè)：次側(cè)：受血者紅細(xì)胞受血者紅細(xì)胞+ +供者血清供者血清 檢測對受者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體檢測對受者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體自身對照：自身對照：受血者紅細(xì)胞受血者紅細(xì)胞+ +受血者血清受血者血清 排除自身抗體、直接抗球

16、蛋白試排除自身抗體、直接抗球蛋白試 驗(yàn)陽性及紅細(xì)胞緡錢狀凝集驗(yàn)陽性及紅細(xì)胞緡錢狀凝集緡錢狀凝集緡錢狀凝集也稱串錢狀凝集，是一種假凝集，紅細(xì)胞像也稱串錢狀凝集，是一種假凝集，紅細(xì)胞像許多錢幣堆積在一起。許多錢幣堆積在一起。血漿球蛋白異常，如高球蛋白血癥、巨球蛋血漿球蛋白異常，如高球蛋白血癥、巨球蛋白血癥。使用大分子右旋糖酐或羥乙基淀粉白血癥。使用大分子右旋糖酐或羥乙基淀粉擴(kuò)容。擴(kuò)容。將血清適當(dāng)稀釋。將血清適當(dāng)稀釋。抗篩和配血結(jié)果分析抗篩和配血結(jié)果分析主側(cè)交叉配血不相合的原因：主側(cè)交叉配血不相合的原因： 病人或供血者病人或供血者ABOABO血型錯(cuò)誤血型錯(cuò)誤 病人血清中存在同種抗體或自身抗體，與供病

17、人血清中存在同種抗體或自身抗體，與供血血 者紅細(xì)胞上的相應(yīng)抗原反應(yīng)。者紅細(xì)胞上的相應(yīng)抗原反應(yīng)。 供血者紅細(xì)胞上已經(jīng)包被了抗體，導(dǎo)致抗人供血者紅細(xì)胞上已經(jīng)包被了抗體，導(dǎo)致抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。球蛋白試驗(yàn)陽性。 病人血清異常，如白蛋白球蛋白比例不正病人血清異常，如白蛋白球蛋白比例不正常引起緡錢狀假凝集，血清中存在高分子聚合常引起緡錢狀假凝集，血清中存在高分子聚合物的血漿擴(kuò)容劑引起假陽性（用鹽水添加試驗(yàn)物的血漿擴(kuò)容劑引起假陽性（用鹽水添加試驗(yàn)來解決）。來解決）。 試驗(yàn)系統(tǒng)被污染。試驗(yàn)系統(tǒng)被污染。 抗篩和配血結(jié)果分析抗篩和配血結(jié)果分析主側(cè)：主側(cè)：+ +，自身對照：，自身對照：- -，抗篩：，抗篩：- -

18、 患者或供血者患者或供血者ABOABO血型錯(cuò)誤血型錯(cuò)誤重新定型重新定型 患者血清中可能含患者血清中可能含ABOABO抗體抗體檢查病人亞檢查病人亞型、輸血史及移植史型、輸血史及移植史 患者血清中有抗體，但篩選細(xì)胞上無相應(yīng)患者血清中有抗體，但篩選細(xì)胞上無相應(yīng)抗原抗原對患者血清進(jìn)行抗體鑒定對患者血清進(jìn)行抗體鑒定 供血者紅細(xì)胞直抗試驗(yàn)陽性供血者紅細(xì)胞直抗試驗(yàn)陽性檢查供血者檢查供血者直抗試驗(yàn)直抗試驗(yàn) 抗篩和配血結(jié)果分析抗篩和配血結(jié)果分析主側(cè)：主側(cè)：+ +，自身對照：，自身對照：- -，抗篩：，抗篩：+ + 患者血清中的同種抗體與供血者紅細(xì)胞上相患者血清中的同種抗體與供血者紅細(xì)胞上相應(yīng)抗原反應(yīng)應(yīng)抗原反應(yīng)對

19、患者血清進(jìn)行抗體鑒定，選對患者血清進(jìn)行抗體鑒定，選擇無相應(yīng)抗原的血擇無相應(yīng)抗原的血抗篩和配血結(jié)果分析抗篩和配血結(jié)果分析主側(cè)：主側(cè)：+ +，自身對照：，自身對照：+ +，抗篩：，抗篩：+ + 病人血清中可能同時(shí)存在自身抗體和同種病人血清中可能同時(shí)存在自身抗體和同種抗體抗體對病人血清進(jìn)行抗體吸收及鑒定，用對病人血清進(jìn)行抗體吸收及鑒定，用吸收后血清配血吸收后血清配血 病人血清不正常：白病人血清不正常：白/ /球比不正常、血漿擴(kuò)球比不正常、血漿擴(kuò)容物容物鹽水添加試驗(yàn)鹽水添加試驗(yàn)試驗(yàn)系統(tǒng)污染試驗(yàn)系統(tǒng)污染重新抽樣檢測重新抽樣檢測抗篩和配血結(jié)果分析抗篩和配血結(jié)果分析次測交叉配血不相合的原因：次測交叉配血不相合的原因： 供血者血漿中存在針對患者紅細(xì)胞抗原的供血者血漿中存在針