子宮內膜癌組織中黃體生成素及其受體的表達意義

1、    子宮內膜癌組織中黃體生成素及其受體的表達意義            作者：時間：2007-11-22 11:39:00                           

2、                        作者：陳蕾，白宏偉，尹善德，程鸞，趙軍，孫緒德，王藹明【關鍵詞】  促黃體激素；受體,LH；免疫組織化學；子宮內膜腫瘤Expressions and significances of luteinizing hormone and its receptor in human endometrial cancer

3、【Abstract】AIM:  To study the localization and distribution of luteinizing hormone (LH) and its receptor (LHR) in human endometrial cancer of various differentiation grades. METHODS: LH and its receptor were detected in 15 endometrial cancers by immunohistochemical methods(HE staining, SABC). RE

4、SULTS: LH and its receptor had the same distribution pattern in the tissues of endometrial cancer. The positive signals were mainly located in the membrane and the cytoplasm of adenocarcinoma cells, but not in the nuclei.   The positive intensity was also gradually increased along with the

5、 differentiation from low to highgrade adenocarcinoma （P<0.05）. CONCLUSION:  The endometrioid  adenocarcinoma cells may not only produce LH but express HLR. Their expressions are associated with the differentiation grades of human endometrial cancer.【Keywords】 luteinizing hormone; recep

6、tors, LH; immunohistochemistry; endometrial neoplasms【摘要】 目的： 探討黃體生成素（LH）及其受體（LHR）在不同分化程度的子宮內膜腺癌組織中的定位及分布. 方法： 采用常規(guī)組織學HE染色和免疫組織化學 (SABC)技術檢測了子宮內膜腺癌組織15例中LH及LHR表達和分布. 結果：  LH及LHR在子宮內膜腺癌組織中的定位基本一致，陽性物質主要位于腺癌細胞的胞膜和胞質，胞核未見陽性物質. 隨著分化程度的提高，其免疫反應性物質的著色也逐漸增強，相鄰各組間存在統(tǒng)計學差異（P<0.05）. 結論： 子宮內膜腺癌細胞既能產生LH，

7、又能表達LHR，與子宮內膜腺癌細胞的分化程度有關. 【關鍵詞】 促黃體激素；受體，LH；免疫組織化學；子宮內膜腫瘤0引言黃體生成素 (luteinizing hormone, LH)及其受體(LHR)存在于下丘腦垂體腺軸和以外的多種組織1-3，同時在乳腺、前列腺、子宮和卵巢等發(fā)生的腫瘤細胞上也有LH的結合位點，從而對其進行功能調節(jié)4-6. 子宮內膜癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，也是一種激素依賴性腫瘤，有研究表明7，子宮內膜腺癌組織上有LHR的表達，然而它是否自分泌LH及LHR的表達與子宮內膜腺癌的分化程度是否相關，尚未見有報道. 我們采用免疫組織化學的方法，研究了不同病理分級的子宮內膜

8、腺癌組織中LH和LHR的表達，旨在了解LH及其受體的表達與子宮內膜腺癌增殖的關系， 為進一步探討LH在子宮內膜癌發(fā)病機制中的作用提供依據. 1材料和方法1.1材料子宮內膜腺癌標本15例來自第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院住院患者，其中高中低分化腺癌各5例（HE染色鑒定），選取同期住院的2例子宮內膜增生過長的標本作陽性對照，所有標本用40 g/L甲醛固定24 h，常規(guī)石蠟包埋，制備46 m厚的連續(xù)切片，并貼附于鉻礬明膠的載玻片上. 對每例腺癌組織切片分別用LH抗體和LHR抗體進行免疫組織化學染色. 鼠抗人LH mAb購自美國Santa Cruz 生物試劑公司，工作濃度為11000；兔抗人LHR多克

9、隆抗體和SABC檢測試劑盒均購自武漢Boster公司，工作濃度為1200；DAB顯色試劑盒均為北京中山公司產品. 1.2方法按武漢Boster公司推薦的SABC染色程序稍加改進，具體步驟為：切片經二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，3 mL/L甲醇雙氧水孵育30 min以滅活內源性過氧化物酶，10  mmol/L磷酸鹽緩沖液（PBS, pH=7.4）振洗5 min×3；滴加20 mL/L的正常羊血清（用10 mmol/L PBS，pH=7.4配制）封閉背景；棄去封閉血清不洗，分別滴加LH單克隆抗體和LHR多克隆抗體，4冰箱孵育16 h；PBS洗5 min×3；第二抗體為生物

10、素標記的羊抗兔IgG(1200稀釋)，室溫孵育2 h；PBS洗5 min×3；滴加SABC復合物（1100稀釋）室溫孵育1 h； PBS洗5 min×4；DAB顯色，復染，脫水，透明，中性樹膠封片. 分別用正常羊血清和10 mmol/L PBS取代第一抗體進行孵育作替代對照和空白對照. 采用Q500圖象分析系統(tǒng)（美國Leica公司），對不同分化程度的子宮內膜腺癌細胞LH及其受體免疫反應性物質的相對含量進行測定，光鏡下每例隨機測10個細胞，每組測50個細胞，并計算出每個細胞LH及其受體免疫反應性物質相對含量.統(tǒng)計學分析：  實驗結果采用x±s表示，組間比較

11、采用方差分析. 2結果2.1LH及LHR的分布LH及LHR免疫反應陽性產物呈棕褐色細顆粒狀，二者在胃癌組織中的定位分布區(qū)域基本一致. 對于子宮內膜增生過長，陽性物質主要位于腺細胞的胞質內，細胞核陰性，(圖1A,B)；對于子宮內膜癌，陽性物質主要位于腺癌細胞的胞質內，細胞核是陰性的，隨著分化程度的提高，其免疫反應性物質的著色也逐漸增強，相鄰各組間存在統(tǒng)計學差異（P<0.05）. 陰性對照實驗均為陰性(圖24).圖1子宮內膜增生過長LH和LHR表達略2.2LH及LHR免疫反應量LH及LHR的相對含量，隨著分化程度的增加而增加的趨勢，相鄰各組間存在統(tǒng)計學差異（P<0.05，表1

12、）.圖2圖4略表1子宮內膜腺癌細胞LH和LHR免疫反應性物質的含量 (略)3討論 LH早在1938年首次由HaHtman和Benz報導為腺垂體分泌的一種糖蛋白激素，并在1967年首次被分離成, 兩個亞基. 隨著研究的深入，人們發(fā)現LH及其受體，既可存在于正常的乳腺8、前列腺9、頜下腺10等組織，又可存在于一些惡性腫瘤組織4-6，并對其功能進行調節(jié). 我們采用免疫組織化學的方法，發(fā)現人子宮內膜腺癌組織中有LH的分布，且LH與LHR均定位于子宮內膜腺癌細胞的胞質和（或）胞膜，胞核未見陽性信號，二者的分布范圍大致相同. 在子宮內膜腺癌細胞中同時檢測出LH及其受體，說明子宮內膜腺癌具有自分泌

13、LH的功能，它可能通過局部作用來調節(jié)子宮內膜腺癌細胞的功能，當然這還有待于進一步的LH及其受體mRNA的檢測來加以證實. 我們的試驗結果還顯示，人子宮內膜腺癌組織中LH及其受體表達的陽性物質的含量與子宮內膜癌的分化程度有一定的關系. 子宮內膜腺癌分化程度越好，陽性物質的含量越高；反之，分化越差，陽性物質的含量越低. 子宮內膜高分化腺癌的陽性物質含量最高，中分化腺癌次之，低分化腺癌最低，統(tǒng)計學檢驗差異顯著. 子宮內膜腺癌細胞表達LH及其受體的具體意義尚不清楚，這可能與GnRH及性激素依賴性腫瘤細胞的發(fā)生和增殖調控有關. 研究資料表明11，GnRH類似物或拮抗劑已被用于這類腫瘤患者的臨床治療，其抑制作用可達44%，特別是在體外GnRH不能直接作用于內膜癌細胞，其作用的發(fā)揮主要是通過LH，而不是FSH. 也有學者研究發(fā)現12，在內膜癌發(fā)生的過程中，LH還可以促進促進腫瘤細胞向子宮肌層的侵襲，其作用途徑是通過激活蛋白激酶A（PKA）來實現的，因此在治療子宮內膜癌時，建議應用抑制LH分泌的藥物，即GnRH類似物或拮抗劑. 我們的研究結果結合上述已有的試驗結果，作者認為