植物細(xì)胞工程知識(shí)點(diǎn)

1、緒論：細(xì)胞工程(cell engineering):應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)方法，借助工程學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法或技術(shù)，在細(xì)胞水平上研究改造生物遺傳特性和生物學(xué)特性，以獲得特定的細(xì)胞、細(xì)胞產(chǎn)品或新生物體的有關(guān)理論和技術(shù)方法的學(xué)科。廣義：所有的生物組織、器官及細(xì)胞離體操作和培養(yǎng)技術(shù)。狹義：細(xì)胞融合和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞學(xué)說(shuō)：細(xì)胞是生物結(jié)構(gòu)、功能和發(fā)育的基本單位。1902, Haberlandt植物細(xì)胞離體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)；B族維生素的應(yīng)用：White等；激動(dòng)素的發(fā)現(xiàn)：Miller ;單個(gè)胡蘿卜細(xì)胞形成體細(xì)胞胚：1958，Steward ;最早研究莖尖培養(yǎng)人參：羅士韋。植物細(xì)胞工程技術(shù)在育種上的應(yīng)用(簡(jiǎn)答)：1、快

2、速獲得特殊倍性材料：?jiǎn)伪扼w、三倍體2、克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性3、克服雜種胚早期夭折 4、導(dǎo)入外源基因5、突變體篩選6、種質(zhì)資源保存植物胚胎干細(xì)胞：莖端分生細(xì)胞、形成層分生細(xì)胞和薄壁細(xì)胞；組織干細(xì)胞：分化程度高的一些細(xì)胞；脫分化(dedifferentiation):分化細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)，形成胚性細(xì)胞團(tuán)或愈傷組織的現(xiàn)象；脫分化條件：創(chuàng)傷和外源激素第一章：分化(differentiation ):導(dǎo)致細(xì)胞形成不同結(jié)構(gòu)，引起功能改變或潛在發(fā)育方式改變的過(guò) 程。脫分化(dedifferentiation):培養(yǎng)條件下使一個(gè)已分化的細(xì)胞回復(fù)到原始無(wú)分化狀態(tài)或分生細(xì)胞狀態(tài)的過(guò)程。再分化(rediffere

3、ntiation ):離體條件下，細(xì)胞脫分化后，無(wú)序生長(zhǎng)的細(xì)胞及其愈傷組織重新進(jìn)入有序生長(zhǎng)再生為個(gè)體的過(guò)程細(xì)胞全能性(cell totipotency ): 一個(gè)生活細(xì)胞所具有的產(chǎn)生完整生物個(gè)體的潛在能力。全能性差異：植物頂端分生組織細(xì)胞較強(qiáng)；完全失去分裂能力的細(xì)胞，如細(xì)胞核開(kāi)始解體的篩管和木質(zhì)部部分沒(méi)有。細(xì)胞脫分化過(guò)程中的生理活動(dòng)與細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化：1、細(xì)胞質(zhì)顯著變濃，大液泡消失；2、核體積增加并逐漸移位至細(xì)胞中央 3、細(xì)胞器增加4、其中細(xì)胞脫分化的重要特征： 液泡蛋 白體的出現(xiàn)，質(zhì)體轉(zhuǎn)變?yōu)樵|(zhì)體 5、細(xì)胞開(kāi)始脫分化的標(biāo)志：蛋白體的出現(xiàn)，同時(shí)細(xì)胞質(zhì)密度增加。(填空)極性(polarity )是植

4、物細(xì)胞分化中一個(gè)基本現(xiàn)象；細(xì)胞的不均等分裂是細(xì)胞極性 建立的標(biāo)志：極性生長(zhǎng)的重要原因是細(xì)胞內(nèi)不同方向Ca+梯度分布；植物細(xì)胞離體培養(yǎng)再生兩條途徑是器官發(fā)生體和細(xì)胞胚胎發(fā)生離體培養(yǎng)中器官發(fā)生的方式：1、先芽后根，較為普遍；2、先根后芽；3、愈傷組織的不同部位形成芽和根，再通過(guò)維管組織的聯(lián)系形成完整植株。激素對(duì)器官分化的調(diào)控：IAA與KT比例高時(shí)利于根的形成，低時(shí)利于芽的形成；植物多 肽PSK可 極大加強(qiáng)基本激素的作用效果。體細(xì)胞胚的形成：1、從外植體上直接發(fā)生。2、經(jīng)過(guò)愈傷組織：誘導(dǎo)形成愈傷組織；胚性 化；體細(xì) 胞胚形成。高濃度2,4-D可誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生；轉(zhuǎn)到低濃度使胚性化。3、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的

5、體細(xì)胞胚發(fā)生；胚性細(xì)胞團(tuán)：成簇成團(tuán)的體積小而細(xì)胞質(zhì)致密的細(xì)胞。體細(xì)胞胚與合子胚的不同：1、合子胚發(fā)育初期有明顯的胚柄，體細(xì)胞胚只有類(lèi)似胚柄的 結(jié)構(gòu)；2、子葉不規(guī)范；3、體積?。?、干物質(zhì)含量低；5、含水量高；6、沒(méi)有休眠第二章：體細(xì)胞無(wú)性系變異(Somaclonal variation ):經(jīng)過(guò)組織培養(yǎng)循環(huán)出現(xiàn)的再生植株變異。組織培養(yǎng)是誘導(dǎo)的主要原因。1、體細(xì)胞再生植株的變異；2、花粉植株的無(wú)性系變異誘變方式：體細(xì)胞人工突變、基因轉(zhuǎn)移、體細(xì)胞融合、物理誘變（紫外線(xiàn)、X射線(xiàn)等）和化學(xué)誘變（DES、EMS等）嵌合體（mosaic）:同一有機(jī)體中同時(shí)存在有遺傳組成不同的細(xì)胞體細(xì)胞無(wú)性系變異的特點(diǎn)（簡(jiǎn)

6、答）：1、體細(xì)胞無(wú)性系變異是組培中較普遍現(xiàn)象2、體細(xì)胞無(wú)性系變異可遺傳3、體細(xì)胞無(wú)性系變異頻率顯著高于自然突變4、體細(xì)胞無(wú)性系變異與外植體來(lái)源及培養(yǎng)時(shí)間有關(guān)（填空）分化水平高的組織產(chǎn)生的無(wú)性系比分生組織產(chǎn)生的更易變異。獲得較高頻率的體細(xì)胞無(wú)性系變異：以分化程度高的組織或細(xì)胞為外植體，在一定植物激 素濃度下誘導(dǎo)愈傷，并經(jīng)較長(zhǎng)時(shí)間的繼代培養(yǎng)，然后誘導(dǎo)分化再生植株， 有可能得到較高頻 率的體細(xì)胞無(wú)性系變異。體細(xì)胞變異的細(xì)胞遺傳學(xué)基礎(chǔ)（論述）：染色體變異：非整倍體；染色體斷裂、缺失、易位、基因重復(fù)和突變植物組織和細(xì)胞進(jìn)入離體培養(yǎng)環(huán)境后，細(xì)胞分裂的不規(guī)則性顯著增加，導(dǎo)致染色體和分子水平的變異。最常見(jiàn)是染

7、色體數(shù)目變化。離體培養(yǎng)細(xì)胞染色體易于斷裂原因：細(xì)胞離體培養(yǎng)時(shí)分裂周期縮短，分裂速度加快，異染色質(zhì)復(fù)制落后于真染色質(zhì)，形成染色體橋，造成染色體斷裂。離體培養(yǎng)細(xì)胞異常有絲分裂類(lèi)型：1、有絲分裂失敗或進(jìn)行無(wú)絲分裂 2、核內(nèi)有絲 分裂：染色體復(fù)制而細(xì)胞不分裂3、核內(nèi)再?gòu)?fù)制：DNA復(fù)制而染色體不復(fù)制 4、有 絲分裂時(shí)形成多極紡錘體。轉(zhuǎn)座子活化的影響：1、轉(zhuǎn)座子活化可造成基因表達(dá)的廣泛變化，因此無(wú)性系變異頻率才如此之高2、轉(zhuǎn)座子具有使不活動(dòng)的結(jié)構(gòu)基因活化特點(diǎn)，因此會(huì)有顯性基因3、轉(zhuǎn)座子還可使多拷貝基因中那些不表達(dá)的拷貝活化，提高基因表達(dá)的強(qiáng)度，即基因放大。單倍體培養(yǎng)細(xì)胞的無(wú)性系變異篩選抗性突變細(xì)胞株具有高

8、效和容易穩(wěn)定優(yōu)越性：隱性突變基因可以表達(dá)，大大提高選出抗性細(xì)胞株的機(jī)率；顯著加快了突變體的穩(wěn)定和純合過(guò)程。第三章：器皿的選擇與清洗： 不同規(guī)格三角瓶；清洗：自來(lái)水洗，烘干，泡酸，自來(lái)水洗，去離子水洗，三蒸水洗，烘干（培養(yǎng)材料染菌的瓶子經(jīng)高壓滅菌后也按該程序清洗。酸液（洗液）：濃硫酸加重鉻酸鉀）母液的配制：1、大量元素母液：通常配成 10X濃縮液，配1L培養(yǎng)基時(shí)加100mL注意：配制時(shí)加 一個(gè)溶解一個(gè)，最后加鈣2、微量元素母液：通常配成 1000 X濃縮液，配1L培養(yǎng)基時(shí)加1mL3、鐵鹽母液：通常配成 100 X濃縮液，配1L培養(yǎng)基時(shí)加10mL，螯合鐵使得培 養(yǎng)基pH 升高至6? 8時(shí)，鐵離子仍

9、保持二價(jià)，可被很好地吸收利用過(guò)濾消毒方式：0.45或0.22卩m微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾，如激素、誘導(dǎo)子等復(fù)合滅菌：在充分清洗后（通常流水沖洗幾小時(shí)），75 %酒精滅菌0.5min , 0.1%升汞滅菌5?20min，消毒劑滅菌后一定要用無(wú)菌水充分清洗滅菌方式：1、高壓滅菌2、干熱滅菌3、過(guò)濾滅菌4、藥劑滅菌5、火焰滅菌6、熏蒸滅菌：KMnO4+HCHO實(shí)驗(yàn)室滅菌7、紫外滅菌：無(wú)菌間及安全柜滅菌激素（脫落酸）：組培中主要用于胚胎或胚狀體發(fā)育的后期，抑制胚胎的過(guò)早萌發(fā)，促進(jìn)胚胎成熟，使胚胎長(zhǎng)成形態(tài)正常的植株生長(zhǎng)素分裂素使用原則：較高濃度的生長(zhǎng)素單獨(dú)或與細(xì)胞分裂素結(jié)合使用可有效刺激培養(yǎng)細(xì)胞的增殖和連續(xù)生長(zhǎng)

10、，形成愈傷組織。培養(yǎng)基中KT濃度高于IAA濃度時(shí)，培養(yǎng)物形成芽，不形成根；兩者濃度大致相等時(shí)，只誘導(dǎo)愈傷組織發(fā)生，基本沒(méi)有器官發(fā)生；當(dāng)IAA濃度高于KT時(shí)，培養(yǎng)物分化出根，不形成芽。體細(xì)胞胚胎發(fā)生(somatic embryogenesis):從植物體細(xì)胞培養(yǎng)物中分化胚胎或胚狀體的過(guò)程。第四章快繁(rapid propagation )或微繁(micropropagation )技術(shù)：利用組培進(jìn)行快速營(yíng)養(yǎng)繁殖的技術(shù)快繁的應(yīng)用價(jià)值：1、雜合植物材料的大量繁殖。2、脫毒種苗生產(chǎn)3、加速繁殖數(shù)量有限的特殊種質(zhì)材料4、單獨(dú)繁殖雄株或雌株外植體褐變brooming :褐變?cè)颍褐参镏泻卸喾?，?chuàng)傷會(huì)激活

11、多酚氧化酶，將多酚氧化為棕褐色的醌類(lèi)，使得外植體切口發(fā)生褐變，并滲透入培養(yǎng)基，嚴(yán)重影響培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和分化，甚至致其死亡。影響褐變因素：木本植物外植體易褐化，尤其成年樹(shù)；培養(yǎng)基中過(guò)高濃度的無(wú)機(jī)鹽和肌醇會(huì)加劇褐變；6-BA和KT有誘導(dǎo)褐化作用；強(qiáng)光和高溫會(huì)促進(jìn)褐化。預(yù)防褐變：1、選取酚類(lèi)含量低的實(shí)驗(yàn)材料2、選擇無(wú)機(jī)鹽含量低，不加肌醇的培養(yǎng)基 3、在弱光線(xiàn)或黑暗條件下培養(yǎng)4、培養(yǎng)基中加入抗氧化劑：Vc、檸檬酸、半胱氨酸、二硫蘇糖醇和聚乙烯吡咯烷酮( PVP)。5、在培養(yǎng)基中加入 0.5%1%活性炭，吸附醌類(lèi)，注意同時(shí)提高培養(yǎng)基中激素濃度。6、不斷地更換新培養(yǎng)基再生植株方式：1、外植體直接產(chǎn)生不定芽2

12、、外植體產(chǎn)生愈傷，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)后產(chǎn)生胚狀體，再生植株3、外植體產(chǎn)生愈傷，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)后分化芽，再生植株。不定芽adventious shoot :頂芽和腋芽以外任何其它器官或組織產(chǎn)生的芽組培脫毒方法：1、高溫脫毒：病毒和植物細(xì)胞對(duì)高溫耐受力不同。熱處理脫毒又稱(chēng)為溫?zé)岑煼ǎ譁販n處理和熱風(fēng)處理兩種。2、低溫脫毒也稱(chēng)冷凍法3、化學(xué)法：2-硫尿嘧啶、8-氮鳥(niǎo)嘌呤、virazole (病毒唑)和一些蛋白質(zhì)與核酸合成的抑制劑，植物病毒鑒定方法：1、指示植物法2、抗血清鑒定法 3、酶聯(lián)免疫法4、電鏡檢查法5、 RT-PCR(填空)1、朱至清發(fā)現(xiàn)低銨離子濃度和過(guò)濾消毒的單糖顯著促進(jìn)禾谷類(lèi)花粉胚的發(fā)育，建立了 N

13、6和改良N6培養(yǎng)基2、歐陽(yáng)俊聞確立單核中期的小麥花粉最適于產(chǎn)生花粉植株，較高的培養(yǎng)溫度有利于花粉綠苗形成3、衛(wèi)志明首次指出大麥遭受碳饑餓可大幅度提高花粉胚的產(chǎn)率。4、孫敬三發(fā)現(xiàn)花粉中質(zhì)體 DNA降解引起的質(zhì)體 RNA和蛋白質(zhì)的匱乏是白化苗形成的原因。5、煙草“單育一號(hào)”水稻“單豐一號(hào)”。單核中晚期至雙核早期的花粉最易形成花粉胚或花粉愈傷條件培養(yǎng)基:已經(jīng)預(yù)先培養(yǎng)過(guò)花藥(或其它離體細(xì)胞)的液體培養(yǎng)基游離小抱子培養(yǎng)(isolated microspore culture )，又花粉培養(yǎng)(pollen culture ):把小抱 子從花藥中分離出來(lái)，進(jìn)行人工培養(yǎng) 小抱子分離培養(yǎng)方法：擠壓法、散落法和器

14、械法單倍體植株：植物學(xué)上通常把具有配子體染色體數(shù)目的抱子體叫做單倍體植株單倍體植物在遺傳育種上的價(jià)值(簡(jiǎn)答)：1、利用單倍體植物控制雜種分離，加快常規(guī)育 種速度2、提高常規(guī)育種的選擇效率3、利用H系進(jìn)行基因定位，繪制遺傳圖心形胚以后的雙子葉胚較易培養(yǎng)，球形胚很難培養(yǎng)；ABA可抑制幼胚吸水，使其脫水干燥，發(fā)育成熟胚胎拯救：種間或?qū)匍g雜交時(shí)，兩個(gè)基因組表達(dá)不協(xié)調(diào)，多數(shù)情況下胚乳最先敗育，胚仍然健康，可通過(guò)離體胚培養(yǎng)將雜種幼胚培養(yǎng)成植株，稱(chēng)為胚胎拯救胚乳培養(yǎng)的意義：1、胚乳細(xì)胞中儲(chǔ)存大量淀粉、蛋白質(zhì)和脂類(lèi)，是研究這些產(chǎn)物代謝工程的理想系統(tǒng)2、完全由薄壁細(xì)胞組成的均質(zhì)組織，是實(shí)驗(yàn)形態(tài)發(fā)生學(xué)研究的極好材

15、料。3、胚乳植株-三倍體，高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、果實(shí)無(wú)籽；三倍體的經(jīng)濟(jì)價(jià)值：無(wú)籽果實(shí)；生物量高；品質(zhì)好；獲得三體以進(jìn)行基因定位。第五章懸浮培養(yǎng)Cell suspension culture:將單個(gè)游離細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)增殖的技術(shù)懸浮細(xì)胞系：1、懸浮培養(yǎng)物分散性良好，細(xì)胞團(tuán)較小。2、均一性好：細(xì)胞形狀和細(xì)胞團(tuán)大小大致相同。3、生長(zhǎng)迅速懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的同步化：1、分選法：梯度離心；Ficoll ;流式細(xì)胞儀2、饑餓法3、抑制劑 法FdU, HU4、低溫處理：低溫處理抑制細(xì)胞分裂，再把溫度提高到正常的培養(yǎng)溫度，也可達(dá)到部分同步化?？醋o(hù)培養(yǎng)（nurse culture）:在固體培養(yǎng)基上置入一塊活

16、躍的愈傷組織，再在愈傷組織上放一小片濾紙，待濾紙潤(rùn)濕后將細(xì)胞接種于濾紙上，當(dāng)培養(yǎng)細(xì)胞長(zhǎng)出微小細(xì)胞團(tuán)以后，將其肢解轉(zhuǎn)至瓊脂培養(yǎng)基上讓其迅速生長(zhǎng)次生代謝產(chǎn)物secondary motabalate :由初生代謝產(chǎn)物經(jīng)過(guò)一些獨(dú)特的代謝途徑派生出來(lái)的小分子化合物意義：植物次生代謝產(chǎn)物一直是藥物和工業(yè)原料的重要來(lái)源。在保持植物抗逆性、抗病性和抗蟲(chóng)性及擔(dān)當(dāng)信號(hào)分子方面起重要作用。植物細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)：可擺脫對(duì)植物資源的依賴(lài)，保護(hù)物種多樣性和生態(tài)環(huán)境藥用植物細(xì)胞培養(yǎng)步驟：1、誘導(dǎo)植物產(chǎn)生旺盛生長(zhǎng)的愈傷組織和懸浮細(xì)胞系2、篩選高產(chǎn)細(xì)胞系3、生物反應(yīng)器中大量培養(yǎng)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)二步法培養(yǎng)：第一步，愈傷培養(yǎng)在生長(zhǎng)培養(yǎng)基

17、上使細(xì)胞快速增殖。第二步，細(xì)胞生長(zhǎng)通過(guò)指數(shù)生長(zhǎng)期后，轉(zhuǎn)移到生產(chǎn)培養(yǎng)基上進(jìn)行第二步培養(yǎng)，以獲得最高次生產(chǎn)物產(chǎn)量。誘導(dǎo)子（elicitor）: 一類(lèi)能引起植物細(xì)胞代謝強(qiáng)度改變或代謝途徑改變的物質(zhì)，主要指生物來(lái)源的化合物，如寡糖、多糖等。原生質(zhì)體（protoplast ）:植物細(xì)胞中，除細(xì)胞壁以外的成分分離原生質(zhì)體的方法：1、機(jī)械法：葉肉或其它細(xì)胞放在高滲的蔗糖溶液中，使細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離，原生質(zhì)體收縮成球形，完全脫離細(xì)胞壁。剪碎組織，可釋放原生質(zhì)體。缺點(diǎn)：產(chǎn)量低，無(wú)法從分生組織分離原生質(zhì)體。2、酶法雙子葉植物的幼葉、子葉、根和下胚軸的切段通常被用來(lái)制備原生質(zhì)體：禾谷類(lèi)植物，疏松易碎的愈傷或懸浮培養(yǎng)的

18、細(xì)胞是制備原生質(zhì)體的理想材料酶溶液的配制：為保持釋放出的原生質(zhì)體的活力和膜穩(wěn)定性，要求酶液滿(mǎn)足以下條件：1、酶液滲透壓必須與處理細(xì)胞的滲透壓相似：同一種植物，子葉和下胚軸游離原生質(zhì)體時(shí)需要的滲透壓最高，愈傷次之，胚性懸浮細(xì)胞要求最低?？捎迷|(zhì)體培養(yǎng)基做溶齊山其滲透壓合適。2、酶液添加CaCI2 ? 2H2O, KH2PO4和葡聚糖硫酸鉀以提高原生 質(zhì)體膜的穩(wěn)定性。還可加 入AgNO3減少酶解產(chǎn)生的乙烯，加入過(guò)氧化物歧化酶減輕O2!自由基對(duì)細(xì)胞膜損傷，從而提高原生質(zhì)體植板率。3、MES （嗎啉乙基磺酸）作為pH緩沖調(diào)節(jié)劑對(duì)于保持酶解物的酸堿環(huán)境起緩沖作用，增加原生質(zhì)體的釋放量和穩(wěn)定性。4、酶溶

19、液最適pH范圍為5.45.8酶液配好后，過(guò)濾滅菌備用。原生質(zhì)體活力檢測(cè)方法 （FDA （ Fluorescein diacetate ，熒光素雙醋酸鹽）活體染色： FDA能 透過(guò)原生質(zhì)體膜，在內(nèi)酯酶作用下水解為不能排出的，累積在質(zhì)膜內(nèi)的熒光素。 在熒光顯 微鏡下觀察時(shí)，凡發(fā)淡綠熒光的都是活的原生質(zhì)體植物細(xì)胞的離體受精過(guò)程：1、精細(xì)胞分離：三細(xì)胞花粉：禾本科與十字花科植物，花粉中含有一個(gè)營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和兩個(gè)游離在營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的精細(xì)胞，為三細(xì)胞花粉；二細(xì)胞花粉：茄科和百合科植物，花粉中有一個(gè)營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一個(gè)生殖細(xì)胞，為二細(xì)胞花粉?；ǚ勖劝l(fā)后，生殖細(xì)胞在花粉管中分裂形成兩個(gè)精子。三細(xì)胞花粉，可以直接從

20、成熟花粉中分離精子；二細(xì)胞花粉，需要先進(jìn)行花粉的離體培養(yǎng)，待精子形成后，再?gòu)幕?粉管中分離精子。2、三細(xì)胞花粉精細(xì)胞分離方法：滲透壓沖擊法：花粉置于低滲溶液中，吸水破裂，釋放出精細(xì)胞。經(jīng)低速離心，得到精細(xì)胞；研磨法：成熟花粉懸浮于適當(dāng)溶液中，研磨使花粉破裂，釋放精細(xì)胞。二細(xì)胞花粉花粉精細(xì)胞分離方法：離體培養(yǎng)法：花粉在液體培養(yǎng)基中人工萌發(fā)，待形成精細(xì)胞后，用滲透壓沖擊或研磨使花粉管破裂；活體-離體法：先將花粉授在柱頭上，花粉萌發(fā)并產(chǎn)生精子后，用滲透壓沖擊法分離；改進(jìn)的活體-離體法；3、卵細(xì)胞的分離：可先分離胚囊，從中分離卵細(xì)胞也可直接從胚珠中分離卵細(xì)胞：胚囊分離技術(shù)-酶解振蕩法生活胚囊的分離方法

21、：胚珠放在酶液中，酶液：纖維素酶、果膠酶、半纖維素酶、蝸牛酶或崩潰酶。酶解-滲透壓沖擊法4、卵細(xì)胞與 胚囊其它細(xì)胞的分離： 酶解-解剖法：優(yōu)點(diǎn)：分離率較高；缺點(diǎn)：酶解 若過(guò)度或清洗不 徹底，會(huì)對(duì)后期合子培養(yǎng)產(chǎn)生不利影響。第七章體細(xì)胞雜交（somatic hybridization ）:完全不經(jīng)過(guò)有性過(guò)程，只通過(guò)體細(xì)胞融合制造雜種的方法。又稱(chēng)原生質(zhì)體融合（protoplast fusion ）:指將植物不同種、屬，甚至科間的原生質(zhì)體通過(guò)人工方法誘導(dǎo)融合，然后進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其再生雜種植株的技術(shù)。胞質(zhì)雜種（cybrid）:具有一個(gè)親本的細(xì)胞核和兩個(gè)親本的細(xì)胞質(zhì)的體細(xì)胞雜種叫做胞質(zhì)雜種1974, Kao 建立 PEG 法異核體（hetrokaryon ）:不同來(lái)源原生質(zhì)體融合形成的雜種原生質(zhì)體。原生質(zhì)體融合種類(lèi)：1、對(duì)稱(chēng)融合2、非對(duì)稱(chēng)融合原生質(zhì)體融合手段：1