臨床化學(xué)診斷酶學(xué)

1、第五章診斷酶學(xué)I.、*P-Z_-本章考點：1. 血清酶（ 1）分類、生理變異與病理生理機(jī)制（ 2）酶活性與酶質(zhì)量測定方法及其評價（ 3）同工酶及其亞型測定的臨床意義2. 血清酶活性檢測技術(shù)（ 1）酶活性概念和表示方法（ 2）酶活性測定方法分類、原理、優(yōu)缺點及應(yīng)用（ 3）影響酶作用的因素（ 4）工具酶的概念、代謝物測定中常用的指示反應(yīng)3. 常用血清酶及同工酶測定的參考值及臨床意義（ 1）肌酸激酶及同工酶和其亞型（ 2）乳酸脫氫酶及同工酶（ 3）氨基轉(zhuǎn)移酶及同工酶（ 4）堿性磷酸酶及同工酶（ 5）谷氨?；D(zhuǎn)移酶及同工酶（ 6）淀粉酶及同工酶（ 7）酸性磷酸酶及同工酶4. 代謝物酶法測定第一節(jié)血清酶

2、一、血清酶的分類根據(jù)酶的來源及其在血清中發(fā)揮催化功能的情況，可將血清酶分為兩大類。（一）血漿特異酶在血漿中發(fā)揮特定催化作用的酶。如凝血酶、膽堿酯酶（CHE、脂蛋白脂肪酶、銅氧化酶等。它們大多數(shù)在肝內(nèi)合成，在血漿中的濃度甚至超過器官細(xì)胞內(nèi)濃度。有的可以作為肝功能試驗的一部分。血漿特異酶活性的改變，除了反映血液功能外，還反映來源器官的功能。（有少部分酶在細(xì)胞合成后分泌到血液中行使其功能，如凝血因子及有關(guān)的纖溶因子。它們以酶原狀態(tài)分泌人血，在一定的條件下被激活，引起相應(yīng)的生理或病理變化。）（二）非血漿特異酶在血漿中濃度很低，且無功能，分為兩種。1. 分泌酶：來源于消化腺或其他外分泌腺的酶。如“-淀粉

3、酶（AMY、前列腺酸性磷酸酶（ACP、脂肪酶（LPS）、胃蛋白酶原、胰蛋白酶原、ALP等。正常體液中外分泌酶活性低而穩(wěn)定，不發(fā)生催化作用。在血液中的濃度和其分泌腺體的功能活動和疾病有關(guān)，來源增加或排泄受阻時，血漿中此類酶活性增高。例如，急性胰腺炎時，血淀粉酶就會升高。2. 代謝酶：（細(xì)胞酶）在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮催化功能的酶。正常時這些酶存在于組織細(xì)胞中，血漿中酶活性很低。細(xì)胞內(nèi)、外濃度差異懸殊。當(dāng)酶來源的組織細(xì)胞發(fā)生病變，細(xì)胞膜通透性增加或細(xì)胞壞死時，細(xì)胞內(nèi)酶大量進(jìn)入血漿，導(dǎo)致血漿酶活性顯著增高。其下降的臨床意義很少。這一類酶臨床應(yīng)用較多，如轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶等，它們在肝病、心臟疾病時都可能

4、出現(xiàn)變化。二、血清酶生理變異及其病理生理機(jī)制（一）血清酶生理變異除病理因素外，有不少生理因素可以影響血清酶測定數(shù)值，這些變化無臨床病理意義。1 .性別：大多數(shù)酶無性別差異，只有少數(shù)酶如CK和GG%在明顯差異，CK和GGTTB是男性高于女性，因此不能以一個參考值作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。2 .年齡：不少酶在兒童期和成人時活性不同，例如新生兒的CK和LD活性常為成人的23倍，以后逐漸降低，到一定年齡和成人一樣。變化最明顯的酶是和骨的生長發(fā)育有密切關(guān)系的堿性磷酸酶。有些酶在進(jìn)入老年期也可能有變化，如ALP和GGTiU老年時可能有輕度升高。3 .進(jìn)食：多數(shù)酶不受進(jìn)食影響，但酗酒可引起GG醐顯升高。4 .運動：劇烈

5、運動可引起血清中多種酶升高，升高程度和運動量、運動時間以及是否經(jīng)常運動有關(guān)。升高的酶多為肌肉中含量豐富的酶，如CKLD、AST等。5 .妊娠與分娩：妊娠時有許多生理變化，也可出現(xiàn)一些酶升高，如妊娠時ALP（因有胎盤ALP同工酶）升高，分娩時可能有CK、CK-BB、LD升高。（二）血清酶病理改變機(jī)制疾病時，影響血清酶的因素很多，主要機(jī)制如下：1. 酶合成異常：血漿特異酶大多數(shù)是在肝合成，當(dāng)肝功能障礙時酶濃度常下降。如血清膽堿酯酶活性在有肝功能障礙時可下降。由于酶基因變異也可引起特定酶減少或消失，如肝-豆?fàn)詈司C合征患者血中銅氧化酶活性可明顯下降。如有骨細(xì)胞增生時，血中ALP可上升。此外惡性腫瘤，應(yīng)

6、用某些藥物，也可引起相應(yīng)的血清酶變化。2. 細(xì)胞酶的釋放：是疾病時大多數(shù)血清酶增高的主要機(jī)制，影響細(xì)胞酶釋放的主要原因有：（1）細(xì)胞內(nèi)、外酶濃度的差異：非血漿特異酶在細(xì)胞內(nèi)、外濃度可差千倍以上，只要有少量細(xì)胞受損傷，酶從細(xì)胞中釋出，就可使血液中酶明顯升高；（2）酶在細(xì)胞內(nèi)的定位和存在的形式：胞質(zhì)中游離的酶如ALT、LD最容易釋放人血，而在亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中的酶則較難釋放出來，特別是線粒體酶，如肝細(xì)胞中的AST常需細(xì)胞出現(xiàn)壞死病變時才能釋放人血；（3）酶蛋白分子量的大?。好羔尫诺乃俣却蠹s和分子量成反比，此因素對酶在血液出現(xiàn)時間的影響大于對酶濃度高低的影響，例如LD分子量大于CK而當(dāng)有心肌梗死時，LD在

7、血液中升高的時間就晚于CK3. 酶在細(xì)胞外間隙的分布和運送：細(xì)胞中酶有三種途徑進(jìn)入血液：血管內(nèi)皮細(xì)胞和血細(xì)胞的酶直接進(jìn)入血液；酶可同時進(jìn)入血液和組織間隙，后者再入血；酶大部分進(jìn)入組織間隙后再入血。這些因素都會影響酶進(jìn)入血液的時間和升高的程度。4. 血液中酶的清除：不同疾病和不同的酶從血液中清除的時間和機(jī)制不同，同一疾病不同酶恢復(fù)正常的時間也不一樣，這和酶的半壽期以及一些其他因素有關(guān)。5. 1.下列哪種酶是血漿特異酶A. 膽堿酯酶B. 脂肪酶C. 轉(zhuǎn)氨酶D. 乳酸脫氫酶E. 淀粉酶正確答案A習(xí)題2.細(xì)胞酶的釋放量不受下列哪個因素的影響A. 各種酶的測定波長及反應(yīng)速率B. 細(xì)胞內(nèi)外酶濃度的差異C.

8、 酶的相對分子量D. 酶的組織分布E. 酶在細(xì)胞內(nèi)的定位和存在形式正確答案A第二節(jié)血清酶活性檢測技術(shù)一、酶活性測定的基本知識酶測定包括酶量測定和酶活性測定。酶在體液中含量極微，僅為ng/L水平，測定酶量十分困難。因此臨床上大都采用酶活性測定，以酶活性間接表示酶量。（一）酶活性的概念與表示法1. 概念：酶活性指酶催化反應(yīng)的能力即酶促反應(yīng)速度。反應(yīng)速度是指在規(guī)定條件下單位時間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量。2. 表示方法：酶活性的大小通常以酶單位數(shù)表示。（1）酶的國際單位在實驗規(guī)定的條件下（溫度、最適pH、最適底物濃度時），在1分鐘內(nèi)催化1mol底物發(fā)生反應(yīng)所需的酶量為1個酶活力國際單位（U）。（

9、2） Katal（催量）：即每秒鐘轉(zhuǎn)化1個摩爾底物（mol/s）的酶量。國際單位和katal間換算關(guān)系如下：1U=1mol/min=1X10-6/60s=16.67nkatal（二）酶活性單位的計算計算酶活性單位之前，按照酶單位定義確定物質(zhì)量、體積和時間的單位，然后進(jìn)行計算：酶單位/升=如果采用分光光度法，并知產(chǎn)物或底物的摩爾吸光系數(shù)，可變換為：e為摩爾（線性）吸光體系（Lmol-1cm-1）A為吸光度變化v為標(biāo)本體積（ml）V為反應(yīng)體系體積（ml）L為管徑（cm）在實際測定中后面幾項皆為常數(shù)，用K表示，叫做酶活力濃度測定轉(zhuǎn)化因子：常數(shù)K值設(shè)置：在測酶時，常數(shù)K值的選擇是很重要的。比值過高雖然

10、測定的線性范圍較寬，但重復(fù)性差，反之，雖然精密度好，但線性窄。K值設(shè)置的出發(fā)點應(yīng)是測定酶的判斷值或參考值上限，應(yīng)保證這些值測定的可靠，所以轉(zhuǎn)氨酶的常數(shù)一般在3000左右。（三）酶促反應(yīng)進(jìn)程能夠真正代表酶活性大小的是線性期的酶促反應(yīng)速度，即酶促反應(yīng)初速度酶活性測定時首先要確定線性期，在此期測定反應(yīng)速度才能準(zhǔn)確代表酶活性習(xí)題3.酶單位Katal的含義是A.每秒鐘能催化1科mol底物的酶量為IKatalB.每分鐘能催化1科mol底物的酶量為IKatalC.每秒鐘能催化1個單位的底物的酶量為1KatalD.每分鐘能催化1個單位的底物的酶量為IKatalE. 每秒鐘能催化mol 底物的酶量為 1Kata

11、l二、標(biāo)本采集要點在實驗室測定酶之前，標(biāo)本要經(jīng)過采集、分離血清和儲存等一系列處理過程，而酶在血中是處于一個動態(tài)變化過程，血液離開體內(nèi)后，會有一定變化。因此在其中任何一個階段處理不當(dāng)，都有可能引起測定值變化。1. 不能溶血：因大多數(shù)酶在血細(xì)胞中的含量比在血漿中高得多。如LDH高150倍，ALT高7倍。2. 及時分離血細(xì)胞：防止血細(xì)胞內(nèi)酶大量進(jìn)入血漿；3. 及時測定：防止酶蛋白變性；4. 盡量用血清標(biāo)本：防止某些抗凝劑對酶的抑制作用；（除非測定與凝血或纖溶有關(guān)的酶）5. 有些標(biāo)本不能冷凍：有的酶在低溫下不穩(wěn)定。常用酶如ALT、AST；ALP、CKGGT和AMY冷凍保存在10個月活性變化不大。但有些

12、酶如LD在融凍時被破壞，LD在低溫反而不如室溫穩(wěn)定，即所謂的“冷變性”。采血后如不及時將血清和血凝塊分離，血細(xì)胞中酶同樣可以透過細(xì)胞膜進(jìn)入血清，所以采血后12小時實驗室必須及時離心，分離血清。一般都不采用血漿而采用血清作為測定標(biāo)本。大多數(shù)抗凝劑都在一定程度上影響酶活性。酶蛋白不穩(wěn)定，易失活。大部分酶在低溫中比較穩(wěn)定，分離血清如不能及時測定，應(yīng)放冰箱保存。三、酶的測定（一）酶活性測定方法1. 按反應(yīng)時間分類法：20世紀(jì)50年代以前大都使用固定時間法。這種方法是以酶催化反應(yīng)的平均速度來計算酶的活性，現(xiàn)多已不用。50年代中期開始采用連續(xù)監(jiān)測法。這種方法用自動生化分析儀上完成，可以測酶反應(yīng)的初速度，其

13、結(jié)果遠(yuǎn)比固定時間法準(zhǔn)確，在高濃度標(biāo)本尤為明顯，但本法也受到反應(yīng)時間，反應(yīng)溫度，試劑等的影響，應(yīng)加以注意。（ 1）定時法：（兩點法）通過測定酶反應(yīng)開始后某一時間段內(nèi)（t1到t2）產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應(yīng)初速度的方法。其中t1往往取反應(yīng)開始的時間。酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間，通過加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白沉淀劑等，使反應(yīng)完全停止（也叫中止反應(yīng)法）。加入試劑進(jìn)入化學(xué)反應(yīng)呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。該法最基本的一點是停止反應(yīng)后才測定底物或物的變化。優(yōu)點：簡單易行，對試劑要求不高。缺點：難保證測定結(jié)果的真實性。難以確定反應(yīng)時間段酶促反應(yīng)是否處于線性期。隨著保溫時間的延續(xù)，酶變性失活加速。

14、（ 2）連續(xù)監(jiān)測法：又稱為動力學(xué)法或速率法、連續(xù)反應(yīng)法。在酶反應(yīng)過程中，用儀器監(jiān)測某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時間的變化所發(fā)生的改變，通過計算求出酶反應(yīng)初速度。連續(xù)監(jiān)測法根據(jù)連續(xù)測得的數(shù)據(jù)，可選擇線性期的底物或產(chǎn)物變化速率用于計算酶活力。因此連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性比定時法更準(zhǔn)確。實際工作中，采用工具酶的酶耦聯(lián)法已經(jīng)成為應(yīng)用最廣、最頻繁測酶活性濃度的方法。（ 3）平衡法：通過測定酶反應(yīng)開始至反應(yīng)達(dá)到平衡時產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法，又叫終點法。2. 按檢測方法分類法：分光光度法；旋光法；熒光法；電化學(xué)方法；化學(xué)反應(yīng)法；核素測定法；量熱法。（二）酶質(zhì)量測定法利用酶的抗原性，通過抗原、抗體反

15、應(yīng)來直接測定酶的質(zhì)量，直接用質(zhì)量單位ng/ml、gg7L來表示酶含量的高低。免疫學(xué)方法與測定活性方法相比，其優(yōu)點是靈敏度和特異性高，不受體液中其他物質(zhì)的影響，特別是抑制劑和激活劑的影響，當(dāng)血液中有酶抑制劑存在，或因基因缺陷，合成了無活性的酶蛋白時，可以測出滅活的酶蛋白量，有利于疾病診斷和科學(xué)研究。如肌酸激酶同工酶MB（CKMB質(zhì)量測定較活性測定對疾病的診斷價值高。四、酶活力測定的影響因素（酶反應(yīng)動力學(xué)）大多數(shù)酶促反應(yīng)是可逆反應(yīng)，酶反應(yīng)動力學(xué)中所指速度是反應(yīng)的初速度。影響酶活性的因素包括底物的濃度、酶反應(yīng)的最適pH、最適溫度、酶的抑制作用，另外還包括試劑中表面活性劑的作用等因素。（一）底物濃度的

16、影響：在檢測試劑中底物濃度、輔因子、活化劑、變構(gòu)劑的種類和濃度均對酶的測定至關(guān)重要。其中以底物的種類和濃度最為重要。底物濃度的影響不是簡單的直線關(guān)系，米氏方程描述了底物濃度對酶促反應(yīng)速度的影響。1.米氏方程：當(dāng)S<<Km隨著底物濃度增加，反應(yīng)速度增加當(dāng)S>>Km當(dāng)?shù)孜餄舛茸銐虼螅磻?yīng)速度不再受底物濃度影響，反應(yīng)速度達(dá)到最大反應(yīng)速度，是零極反應(yīng)。所以檢測酶活性時，要保證有足夠的底物濃度2.Km：Km直為反應(yīng)速度相當(dāng)于最大反應(yīng)速度一半時的底物濃度。Km直是酶的特征常數(shù)之一，只與酶的性質(zhì)有關(guān)，而與酶濃度無關(guān)。Km反映酶與底物的親合力Km值越大，酶與底物親合力越小，反應(yīng)速度越慢

17、。底物濃度的影響主要是兩個方面即底物的種類和濃度，兩者都與Km有關(guān)。（1）如果所測的酶專一性不強(qiáng)，可作用于多種底物，Km最小的是酶的最適底物。（生理底物）在臨床測定酶活性時，應(yīng)選Km最小的底物，有利于降低試劑成本和防止底物難溶。（2）選擇適宜的底物濃度由米-曼氏方程計算得出，底物濃度范圍設(shè)計在1020KR初速度可達(dá)最大速度的90395%舉例：已知Km求使反應(yīng)速度達(dá)到95%VmaX勺底物濃度。（以上介紹的米氏方程式只能適應(yīng)用于單一底物的酶。）習(xí)題4.對于單底物酶促反應(yīng)，當(dāng)?shù)孜餄舛萐小于酶的米氏常數(shù)Km時，反應(yīng)速度的變化為A. 反應(yīng)速度最大B. 反應(yīng)速度隨底物濃度增加而加快C. 增加底物濃度反應(yīng)速

18、度不受影響D. 反應(yīng)速度隨底物濃度增加而減慢E. 酶促反應(yīng)呈零級反應(yīng)正確答案B（二）反應(yīng)體系的最適pH、緩沖液的種類和濃度：1.pH影響pH可以影響酶與底物的親和力，也影響酶的穩(wěn)定。測定酶活性濃度時一定要選擇在最適pHo多數(shù)酶的最適pH在58之間。最適pH時酶反應(yīng)速度最大，測定靈敏度最高；要使pH值保持穩(wěn)定在測定酶活性時要使用緩沖液。2. 緩沖液依據(jù)緩沖液對酶活性的影響可將緩沖液分為活性緩沖液、惰性緩沖液和抑制緩沖液三大類。緩沖液的離子強(qiáng)度也影響著酶的活性，一般選擇與生理環(huán)境或體液比較接近的離子強(qiáng)度。理想的緩沖液應(yīng)具備以下條件：（ 1）有足夠的緩沖容量：緩沖液的pKa與最適pH越接近，緩沖容量

19、越大。有酸堿的產(chǎn)生或消耗的酶促反應(yīng)，對緩沖容量的要求更高。（ 2）純度高，不含有抑制酶活性的雜質(zhì)。（ 3）溫度依賴性小，受溫度波動pH變化小。（ 4）盡量選擇活性緩沖液或惰性緩沖液。（ 5）對酶有穩(wěn)定作用。（三）溫度的控制：溫度對酶活性影響有雙重性。一般說來在2535c之間隨溫度升高酶促反應(yīng)加快。酶的Q10值約在1.52.5。Ql0值即溫度增加l0化學(xué)速度的變化率。溫度繼續(xù)升高可使酶變性，反應(yīng)速度下降。在最適溫度時，反應(yīng)速度最快。不同的溫度酶反應(yīng)的速率不同，可直接影響測定結(jié)果。為保證最適溫度要在恒溫條件下進(jìn)行，溫度波動要控制在±1。37是目前使用最廣泛的測定酶催化活性的溫度。目前在常

20、規(guī)實驗室中廣泛使用半自動全自動生化分析儀，有高效率的恒溫系統(tǒng)，使反應(yīng)系統(tǒng)很快升溫并維持在37，可避免溫度差異引起的誤差。（四）其他因素1. 輔助因子：在酶活性測定時，要保證輔基或輔酶的供給。2. 激活劑：在酶活性測定時，要滿足酶對激活劑或表面活性劑的需要。如Cl-是淀粉酶的激活劑，N-乙酰半胱氨酸時是CK檢測的激活劑。3. 抑制劑：使酶活性降低，在測定酶活性時，應(yīng)避免抑制劑的影響。使酶活性降低或喪失的物質(zhì)稱為抑制劑。抑制分為競爭性抑制和非競爭性抑制，在酶活性測定過程中，應(yīng)盡量避免抑制劑存在。但在有的反應(yīng)體系中，加入競爭性抑制劑可以提高工具酶的米氏常數(shù)。為了減少上述諸多因素對酶催化活性濃度的影響

21、，國際臨床化學(xué)學(xué)會（IFCC）推薦采用具有量值溯源的，互換性好的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用于血清酶催化活性濃度的測定的校正。目前，IFCC已經(jīng)公布了包括ALT，AST，ALP，GGT，CK，LDH，Amylase在內(nèi)的數(shù)個常用酶測定的參考方法，該參考方法主要應(yīng)用于酶學(xué)測定參考實驗室，對廠家的試劑進(jìn)行溯源性考核。綜上所述，根據(jù)酶的特性及定量原理，測定酶活力時，必須注意以下幾點：（1）酶促反應(yīng)過程中，只有最初一段時間內(nèi)反應(yīng)速度與酶活性成正比，隨著反應(yīng)時間的延長，反應(yīng)速度即逐漸降低。（ 2） 要規(guī)定一定的反應(yīng)條件，如時間、溫度、pH等，并在酶測定過程中保持這些反應(yīng)條件的恒定，如溫度不得超過規(guī)定溫度的±1，

22、pH應(yīng)恒定。（ 3） 配制的底物濃度應(yīng)準(zhǔn)確且足夠大，底物液中應(yīng)加入不抑制該酶活力的防腐劑并保存于冰箱中，以防止底物被分解。（ 4） 標(biāo)本要新鮮，由于絕大多數(shù)酶可因久置而活力降低，標(biāo)本如無法及時測定，應(yīng)保存于冰箱中。用血漿時，應(yīng)考慮到抗凝劑對酶反應(yīng)的影響。有些酶在血細(xì)胞、血小板中的濃度比血清高，為此在采血、分離血清時，應(yīng)注意防止溶血和白細(xì)胞的破裂。（ 5） 測定過程中，所用儀器應(yīng)絕對清潔，不應(yīng)含有酶的抑制物，如酸、堿、蛋白沉淀劑等。習(xí)題5.溫度對酶促反應(yīng)影響說法正確的是A. 能降低反應(yīng)的活化能B. 溫度可影響酶促反應(yīng)的平衡點C. 溫度升高酶促反應(yīng)變慢D. 溫度升高酶促反應(yīng)加快E. 一般來說，在2

23、535c溫度每增加10C,酶促反應(yīng)速度增加12倍正確答案E五、工具酶及其指示反應(yīng)（一）工具酶的概念：作為試劑用于測定酶活力或化合物濃度的酶稱為工具酶。對于底物或產(chǎn)物不能直接測定或難于準(zhǔn)確測定的酶促反應(yīng)，采用酶耦聯(lián)法測定。最簡單的酶耦聯(lián)反應(yīng)：A:底物B:待測酶產(chǎn)物（不能直接測定）C:代表指示酶產(chǎn)物（可以直接測定）Ex：待測酶Ei:代表指示酶Ex是所要測定的酶，A、B二物質(zhì)分別為其底物和產(chǎn)物，對此二物質(zhì)變化，無法直接監(jiān)測，此時可加入其他酶，其底物為Ex的產(chǎn)物B,其反應(yīng)產(chǎn)物C可直接監(jiān)測，這樣通過第二個酶反應(yīng)有可能推測出第一個酶的活性濃度，外加的第二酶稱為指示酶Ei。酶耦聯(lián)反應(yīng)與一般酶反應(yīng)的一個重要區(qū)

24、別處是有一個明顯的延滯期。酶耦聯(lián)反應(yīng)一開始存在著底物A，不存在指示酶的反應(yīng)，隨著產(chǎn)物B的出現(xiàn)和增加，指示酶反應(yīng)隨之加快，Ex和Ei反應(yīng)速度相等，也就是達(dá)到穩(wěn)態(tài)。從酶反應(yīng)開始至穩(wěn)態(tài)期間，指示酶反應(yīng)較慢且不穩(wěn)定，稱為延滯期。顯然這期間指示酶反應(yīng)速度不能代表測定酶量多少。設(shè)計或選擇酶測定方法時，如果用酶耦聯(lián)法，延滯期越短越好，測定時間一定要避開此期。由于工具酶所催化的反應(yīng)必須在中間產(chǎn)物濃度很低的條件下進(jìn)行，并且將很快轉(zhuǎn)變?yōu)樽罱K產(chǎn)物，反應(yīng)體系中不應(yīng)有中間產(chǎn)物堆積，否則將導(dǎo)致誤差。如果一些酶反應(yīng)找不到合適的指示酶與其直接耦聯(lián)，此時往往可以加入另一種酶，將兩者連接起來，模式如下：將這種聯(lián)接的酶稱為輔助酶（

25、Ea）。個別情況可能使用兩種乃至兩種以上的輔助酶。指示酶和輔助酶都是工具酶。例如要測定ALT活性檢測340nm吸光度的改變測得ALT活性。在這里ALT為待測酶，LDH為工具酶，它的作用相當(dāng)于試劑。（二）指示反應(yīng)1.耦聯(lián)的脫氫酶及其指示反應(yīng)NADH（NADP）H+或NAD（NADP）C-6-PD) 。NAD（P）+是由維生素PP（煙酰胺）參與構(gòu)成的輔酶，是體內(nèi)最常見的脫氫酶的輔酶。常用的酶：乳酸脫氫酶（LD）、蘋果酸脫氫酶（MD）、谷氨酸脫氫酶（GLD）和6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化的反應(yīng)：P+NAD（P）H+H+PH2+NAD（P）+NADP）H的特征性光吸收在340nm,可以通過分光光度計測定3

26、40nm光吸收的增加或減少表示酶活性另外可用365nm波長紫外光激發(fā)NAD（P）H,使其在460nm發(fā)射強(qiáng)烈熒光加以測定。（二）耦聯(lián)H202的工具酶及其指示反應(yīng)有些酶作用于底物時，可使其氧化產(chǎn)生H2O2,后者在PODW作用下使色素原氧化顯色進(jìn)行測定。葡萄糖氧化酶、尿酸酶、甘油氧化酶、膽固醇氧化酶等工具酶分別用于葡萄糖、尿酸、甘油、膽固醇H202，H202可通過下列指示反應(yīng)來檢測。1. 使單一的色素原顯色：色素原是一種無色的色素前身，在過氧化物酶（POD存在下被H02氧化后可生成有色的色素。如臨床測堿磷酶：2. 使成對的色素原顯色：必須有兩個色素原共同存在，再在過氧化物酶（POD）的催化下生成色

27、素。如酚和4-氨基安替比林作用，生成紅色色素。最常用的是Trinder反應(yīng)習(xí)題6.以NAD還原成NADHOE應(yīng)為基礎(chǔ)的生化分析，采用的波長及吸光度變化為A.340nm從小到大B.340nm從大到小C.405nm從小到大D.405nm從大到小E.280nm從小到大正確答案A六、同工酶和亞型測定的臨床意義同工酶是指其分子組成及理化性質(zhì)不同但具有相同催化功能的一組酶。同工酶是一個復(fù)雜的生物現(xiàn)象，至今在分類、概念上還有許多問題需要進(jìn)一步研究，但在臨床應(yīng)用上，對疾病的診斷和鑒別診斷都是很有幫助的，可以把同工酶理解為一個包括有多種能催化相同生化反應(yīng)的酶族，在這一族中雖然都催化相同的生化反應(yīng)，但各個同工酶在

28、理化性質(zhì)上有差異，因此可以根據(jù)同工酶的差異用各種物理、化學(xué)方法將其分離測定。從根本上說，這些差異和酶蛋白結(jié)構(gòu)有關(guān)，這些結(jié)構(gòu)差異又可引起酶蛋白抗原性的變化，因此現(xiàn)在利用免疫原理來測定同工酶的方法有了很大發(fā)展，并用之于臨床。1. 構(gòu)成：一般由多亞基構(gòu)成，亞基不同組合方式構(gòu)成不同形式。例如：乳酸脫氫酶（LDH卜LDH5）由H亞基和M亞基構(gòu)成的四聚體2. 分布特點：（ 1） 明顯的組織器官特異性；（ 2） 細(xì)胞內(nèi)定位不同；（3）有些同工酶在不同發(fā)育階段類型不同。3. 臨床應(yīng)用：（ 1） 可根據(jù)同工酶的變化來推測受損的組織或器官。因同工酶的分布具有器官特異性、組織特異性和細(xì)胞特異性，可以較為準(zhǔn)確地反映病

29、變器官、組織和細(xì)胞的種類及其功能損傷的程度。如心肌有損傷時雖然可有總LD活性上升，但診斷意義不大，如果LD1活性上升，且LD1>LD2則說明有心肌疾病，如果在此基礎(chǔ)上還出現(xiàn)LD5>LD4則說明在心肌損傷的同時并伴有肝的損傷，例如右心衰引起肝淤血的狀況。（2）可判斷某些疾病的程度和預(yù)后有一些同工酶在細(xì)胞內(nèi)定位不同，線粒體中有些酶的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)與胞質(zhì)中同工酶有明顯差異，有臨床意義。用的較多的是線粒體AST,此酶較難進(jìn)入血清，但當(dāng)肝病變嚴(yán)重、細(xì)胞壞死時，線粒體同工酶可進(jìn)入血中使其升高，對判斷疾病的程度和預(yù)后都有幫助。有些同工酶在從組織進(jìn)入體液后，可進(jìn)一步分化為幾個不同的類型，即所謂同工酶亞

30、型。CKHMB的亞型有MB1MB2，CK-MM勺亞型有MM1MM2MM3這些亞型對心肌梗死的診斷和溶栓效果的判斷都優(yōu)于CK-總酶和同工酶。所以,同工酶和同工酶亞型的臨床應(yīng)用還是很有發(fā)展前途的。第三節(jié)常用血清酶和同工酶測定的臨床意義一、肌酸激酶（CK）（一）連續(xù)監(jiān)測法測CKCK是由兩種不同的亞基M和B組成的二聚體，正常人體中有三種同工酶，CK-BB（CK1）:主要存于腦組織、前列腺、腸、肺、膀胱、子宮、胎盤及甲狀腺中;CK-MB（CK2:主要存于心??；CK-MM（CK3:主要存于肌肉組織。CK作用后生成的磷酸肌酸含高能磷酸鍵，是肌肉收縮時能量的直接來源。1 .原理本法采用酶耦聯(lián)反應(yīng)測定CK活性濃

31、度。在340nm監(jiān)測NAD(P)H的生成量，可計算出CK的活性濃度。2 .生理變異年齡、性別和種族對CK含量都有一定影響。新生兒CK常為正常成年人的23倍。CK含量和肌肉運動密切相關(guān)，其量和人體肌肉總量有關(guān)，男性參考值高于女性可能與這點有聯(lián)系。白種男性CK均值為黑種人的66%可能與種族有關(guān)，但也不排除兩個人種之間體力勞動的差別。3 .參考值：男性38174U/L(37C);女性26-140UI/L(37C)。4 .臨床意義(1) CK主要用于心肌梗死的診斷心肌梗死發(fā)生后24h此酶即開始升高，1248h達(dá)最高峰值，可高達(dá)正常上限的1012倍，在24天降至正常水平。此酶對診斷心肌梗死較AST；LD

32、的陽性率高，特異性強(qiáng)，是用于心肌梗死早期診斷的一項較好指標(biāo)，同時對估計病情和判斷預(yù)后也有參考價值。應(yīng)注意測定時受樣品溶血情況的影響。病毒性心肌炎時CK也有升高。(2)肌營養(yǎng)不良癥、皮肌炎、骨骼肌損傷等也可致CK升高；(3)腦血管意外、腦膜炎、甲狀腺功能低下等疾病及一些非疾病因素如劇烈運動、各種插管及手術(shù)、肌肉注射冬眠靈和抗生素等也可能引起CK活性增高；(4)甲狀腺功能亢進(jìn)，長久臥床者總CK(主要為CK-MM可下降。表3-5-1常見疾病的血清總CK和CK同工酶變化疾病總CKCK同工酶急性心肌梗死常用酶中升高最早(48h),24h達(dá)峰值，23d恢復(fù)正常，中度升高確診心梗試驗之一，大于總酶白6%T意

33、義，23d恢復(fù)正常心肌炎肌肉損傷(挫傷、手術(shù)、肌注、劇烈運動等)急性期輕度升高，可達(dá)5倍正常上限，升高程度和操作程度相關(guān)，嚴(yán)重者可達(dá)10000U/L以上，肌注僅輕度升高，一日內(nèi)恢復(fù)正常CK-MEH增高，CK-M由高為主，CK-MB/CK活性比6%多發(fā)性肌炎和肌炎明顯升高主要為CK-MM神經(jīng)性肌肉疾患正常無變化腦血管意外（腦出血，腦血栓）部分患者血液和CSF中CK升高CK-BB甲狀腺功能低下可高達(dá)正常上限50倍主要為CK-MM運動試驗可輕度升高CK-MB正常惡性腫瘤（通常見十前列腺小細(xì)胞肺癌、消化道癌）不定CK-BB輕度升高（二）瓊脂糖凝膠電泳法測定血清肌酸激酶同工酶1 .原理：除了在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)存

34、在三種CK同工酶外，在細(xì)胞線粒體內(nèi)還有另一種CK同工酶，稱為CK-Mt。幾種CK同工酶的分子量雖然相同，但免疫特性和電泳遷移率各不相同。在電泳時，CK-BB遷移最快，走在陽極白蛋白區(qū)，CK-MB居中，位于a2和3球蛋白區(qū)，CK-MMft慢，位于陰極丫-球蛋白區(qū)，CK-Mt遷移率最低，位于CK-M業(yè)后。電泳后進(jìn)行酶促反應(yīng)顯色，觀察結(jié)果。利用前述的脫氫反應(yīng)產(chǎn)生NADPH其中H+經(jīng)PMS（酚嗪二甲酯硫酸鹽）傳遞給NBT（四氮陛鹽）生成不溶性有色化合物可掃描定量。2 .臨床意義：正常血清中絕大部分為CK-MM勺活性，含有少量的CK-MB不超過總活性的5%CK-BB含量極少，用一般方法測不出。（1） C

35、K-MB是診斷急性心肌梗死最有價值的生化指標(biāo)。此同工酶對診斷心肌梗死的特異性可高達(dá)100%（2）心肌梗死以外的心臟疾患有時也可有血清CK-MB的輕度升高。諸如室上性心律不齊、心包炎、心肌炎、心絞痛和充血性心衰等，其升高機(jī)制可能和心肌細(xì)胞膜通透性增加有關(guān)。（3）肌營養(yǎng)不良：肌肉創(chuàng)傷、皮肌炎患者CK-MMi顯增高雖CK-MB也升高，但不超過總CK活性5%多次肌肉注射的患者也可有CK-M由高。二、乳酸脫氫酶（LD）（一）連續(xù)監(jiān)測法測定LD總活性乳酸脫氫酶是一種含鋅的、參與糖無氧酵解及糖異生的重要酶，能可逆地催化乳酸和丙酮酸之間的氧化還原反應(yīng)，在人及動物組織中廣泛存在。LD是由H亞基和M亞基構(gòu)成的四聚

36、體，不同的組合方式構(gòu)成五種同工酶。人體以心、腎、骨骼肌含量最豐富，其次為肝、脾、胰及肺組織含量亦較多。1 .原理340nm處吸光度的增加速率與樣品中LD活性成正比。2 .生理變異血清LD高低和性別關(guān)系不大，嬰兒酶活性可達(dá)成年人兩倍，兒童和少年活性比成年人高10唳15%。3 .參考值：血清LD:109245U/L（成人）。4 .臨床意義血清LD活性增高主要見于心肌梗死、肝病、肺梗死、惡性腫瘤、白血病、惡性淋巴瘤等的輔助診斷同時，某些腫瘤轉(zhuǎn)移后所致的胸、腹水中LD活性往往也升高。表3-5-2常見疾病LD總酶和LD同工酶的變化疾病LD總酶LD同工酶心肌梗死升高最慢（810d）,升高時間長（510天）

37、可高于正常上限10倍LD1>LDZ可持續(xù)兩周充血性心衰，心肌炎可高于正常上限5倍LD1>LD2病毒性肝炎部分患者可高于正常上限5倍LD5>LD4肝硬化輕度升高LD明顯升高LD5>LD4原發(fā)性肝癌部分病例升高同上梗阻性黃疸不定常LD4>LD5肌肉損傷視損傷程度而異以LD5升高為主惡性腫瘤可升高以LD3為主LD3>LD1（二）瓊脂糖電泳法測定LD同工酶1 .原理：LD同工酶在一定的電泳條件下在支持物上被分離后，以乳酸鈉為底物，NAD作受氫體，LD催化乳酸脫氫生成丙酮酸，同時使NADS原成NADHNADH各氫傳遞給酚嗪二甲酯硫酸鹽（PMS,PMSZ將氫傳遞給氯化碘

38、代硝基四氮陛鹽（INT）,使其還原成紫紅色甲月贊化合物。當(dāng)有LD活性的區(qū)帶存在即顯紫紅色，顏色深淺與酶活性成正比，用光密度掃描儀掃描區(qū)帶定量。2 .臨床意義：按LD同工酶在組織中的分布可將其分為三類。一類以心肌為代表，主要含LD1,活性占該組織的一半以上，腎、胰、膈肌與紅細(xì)胞次之；另一類以肝臟為代表，含LD5為主，其LDs占該組織總活性的50艱上，皮膚、骨髓、關(guān)節(jié)滑液、白細(xì)胞、血小板次之；再一類是以肺、脾為代表，含LD3為主，腦、腸、淋巴結(jié)與內(nèi)分泌腺等次之。在成年人存在著如下規(guī)律：LD2>LD1>LD3>LD4>LD5，值得注意的是有學(xué)者報告，部分正常兒童血中LD1可大

39、于LD2。(1)急性心肌梗死發(fā)作后早期，血清中的LD1和LD2活性均升高，而LD1升高更早，更明顯，可致LD1LD2比值增高。(2)活動性風(fēng)濕性心肌炎、急性病毒性心肌炎及某些溶血性疾病，如鐮形細(xì)胞貧血，惡性貧血等，腎壞死、假性肥大性肌營養(yǎng)不良等，LD1及LD2的活性也升高。(3)當(dāng)急性肺部病變、白血病、膠原病、心包炎、病毒感染等LD2及LD3增高。而惡性病時，LD3也常增高。(4)肝炎、急性肝細(xì)胞損害及骨骼肌損傷時LD5常常增高。而當(dāng)心肌梗死并發(fā)充血性心力衰竭時，LD5也可升高。習(xí)題7.下列關(guān)于乳酸脫氫酶敘述錯誤的是A.細(xì)胞中LDL含量比血清高100倍B.標(biāo)本宜存在4C.LDH同工酶和CK-M

40、即合檢測可用于助診急性心肌梗死D.LDH有五種同工酶，每種同工酶最適反應(yīng)條件不同E.LDH主要存在于細(xì)胞質(zhì)中正確答案B三、連續(xù)監(jiān)測法測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）體內(nèi)有60多種氨基轉(zhuǎn)移酶，ALT和AST是其中最重要的兩種。AST有兩種同工酶，分別存在于細(xì)胞質(zhì)（c-AST）和線粒體（m-AST）,ALT絕大多數(shù)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，可能有極少量在線粒體中。ALT和AST在于體內(nèi)多種器官和組織中，以含量從多到少為序，AST為心臟、肝、骨骼肌和腎等；ALT為肝、腎、心、骨骼肌等。（一）原理在340nm處連續(xù)監(jiān)測吸光度下降速率，計算出ALT活性濃度。（二）生理變異此酶生理變異較小，性別、年齡、進(jìn)食、適度運動

41、對酶活性無明顯影響，每天雖有生理性波動，但無統(tǒng)計學(xué)意義。（三）參考值：成人<40UL。（四）臨床意義ALT在肝細(xì)胞中含量較多，且主要存在于肝細(xì)胞的可溶性部分，當(dāng)肝臟受損時，此酶可釋放人血，致血中該酶活性濃度增加，故測定ALT常作為判斷肝細(xì)胞損傷的靈敏指標(biāo)，但其他疾病或因素亦會引起ALT不同程度的增高。1 .急性病毒性肝炎：ALT陽性率為80%-100%急性黃疸型肝炎患者出現(xiàn)黃疸前23周即有轉(zhuǎn)氨酶的明顯升高，最高可達(dá)500U以上，多為ALT>AST肝炎恢復(fù)期，ALT轉(zhuǎn)入正常；重癥肝炎或亞急性肝壞死時，一度上升的ALT在癥狀惡化的同時，酶活性反而降低，是肝細(xì)胞壞死后增生不良，預(yù)后不佳。

42、監(jiān)測ALT可以觀察病情的發(fā)展，并作預(yù)后判斷。2 .慢性活動性肝炎或脂肪肝：ALT輕度增高（100200U）,或?qū)僬７秶?，且AST>ALT3 .肝硬化、肝癌時，ALT有輕度或中度增高，提示可能并發(fā)肝細(xì)胞壞死，預(yù)后嚴(yán)重。4 .其他原因引起的肝臟損害，如心功能不全時，肝淤血導(dǎo)致肝小葉中央帶細(xì)胞的萎縮或壞死，可使ALT、AST明顯升高。某些化學(xué)藥物如異煙腫、氯丙嗪、苯巴比妥、四氯化碳、神劑等可不同程度的損害肝細(xì)胞，引起ALT的升高。5 .骨骼肌損傷、多發(fā)性肌炎等亦可引起轉(zhuǎn)氨酶升高。另外，應(yīng)注意兩種情況：重癥肝炎由于大量肝細(xì)胞壞死，此時血中ALT可僅輕度增高，臨終時常明顯下降，但膽紅素卻進(jìn)行性升

43、高，即所謂的“酶膽分離”，常是肝壞死征兆。另一種情況是少數(shù)人血清中ALT長期持續(xù)升高，肝穿無明顯病理改變，預(yù)后良好。四、連續(xù)監(jiān)測法測定血清門（天）冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）（一）原理在340nm處監(jiān)測吸光度的下降速率，從而計算AST活性。（二）生理變異：此酶生理變異較小。（三）參考值：成人<45U7L。（四）臨床意義1. 主要用于診斷AMI;2. AST也是肝炎患者的觀察指標(biāo)，且AST/ALT比值對判斷肝炎的轉(zhuǎn)歸特別有價值3. m-AST在判斷肝實質(zhì)細(xì)胞損害程度、急慢性肝炎的鑒別有一定價值。表3-5-3常見疾病ALT和AST及共同工酶的變化疾病ALTASTAST/ALT病毒性肝炎明顯升高

44、，隨病，f而異可達(dá)正常上限10100倍同ALT,較ALT輕且恢復(fù)早<1.0重癥肝炎升高在正常上限20倍內(nèi)，后的膽分離現(xiàn)象升高超過ALT>1.0肝硬化常輕度土曾高升高超過ALT>1.0梗阻性黃疸輕度升高同ALT常<1.0溶血性黃疸無變化無變化心肌梗死輕度升高明顯升高，與CK和LD比較，無優(yōu)點>1.0肌肉損傷正常或輕度升高急性期可輕度升高>1.0習(xí)題8“酶膽分離”通常是哪種疾病的征兆A.急性心肌梗死B.肝壞死C.肝癌D.脂肪肝E.膽石癥正確答案B五、連續(xù)監(jiān)測法測定血清堿性磷酸酶（ALP）ALP指一組底物特異性較低，在堿性環(huán)境中（最適pH10左右）能水解很多磷酸單

45、酯化合物的酶。人體各組織ALP同工酶可分為3類，即胎盤ALP、腸ALR肝/骨/腎ALP。一般認(rèn)為骨中的ALP和骨的鈣化作用關(guān)系密切。（一）原理以磷酸對硝基酚為底物，2-氨基-2-甲基-l-丙醇或二乙醇胺為磷酸?；氖荏w。在堿性環(huán)境下，ALP催化磷酸對硝基酚水解產(chǎn)生游離的對硝基酚，對硝基酚在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成黃色。根據(jù)405nm處吸光度增高速率來計算ALP活性單位。（二）生理變異ALP變化與年齡密切相關(guān)，新生兒ALP略高于成年人，以后逐漸增高，在15歲有一次高峰，可達(dá)成年人上限2.55倍，以后下降。第二高峰在1015歲之間，可達(dá)成人上限45倍。20歲后降至成年人值，到老年期又輕度升高，可能與生理性

46、的激素變化有關(guān)。孕婦血清ALP在妊娠3個月即開始升高，9個月可達(dá)峰值，約為正常值的2倍，可維持到分娩后1個月，升高的ALP來自胎盤，和胚泡壁的細(xì)胞滋養(yǎng)層的發(fā)育程度直接相關(guān)。高脂餐后，血清ALP活性升高，無黃疽肝臟疾病患者血中發(fā)現(xiàn)有ALP升高應(yīng)警惕有無肝癌可能。（三）參考值女性：112歲<500U/L;>15歲40150u/L;男性：112歲<500U/L;1215歲<750U/L;>15歲40-150U/L。（四）臨床意義在臨床上，血清ALP活力測定常作為肝膽疾病和骨骼疾病的臨床輔助診斷指標(biāo)。尤其是黃疸的鑒別診斷。1 .血清ALP活性升高：見于骨paget病、膽道

47、梗阻、惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移或肝轉(zhuǎn)移、佝僂病、骨軟化、成骨細(xì)胞瘤、甲狀旁腺功能亢進(jìn)及骨折愈合期。2 .血清ALP活性降低：比較少見，主要見于呆小病，磷酸酶過少癥，維生素C缺乏癥。甲狀腺功能低下、惡性貧血等也可見血清ALP下降。表3-5-4常見疾病血清ALP活性變化疾病ALP增高變形性骨炎極度上升，可達(dá)正常上限50倍骨腫瘤中度上升佝僂?。ㄜ浌遣。┛蛇_(dá)正常上限13倍梗阻性黃疸明顯升高，可達(dá)正常上限1015倍肝實質(zhì)疾病（肝炎、肝硬化）輕度上升，很少超過正常上限3倍肝癌常明顯上升，無黃疸而有血清ALP活性上升應(yīng)考慮肝占位性病變六、連續(xù)監(jiān)測法測定血清丫谷氨?；D(zhuǎn)移酶（GGTGGT一種底物特異性不高的酶，能作用于

48、一系列含谷氨酰基的化合物，其生理功能不十分清楚。各器官GGT勺理化性質(zhì)有差異，用瓊脂糖電泳可分出4個區(qū)帶。1.原理L-丫谷氨酰-3-竣基-4-硝基苯胺+雙甘肽+谷氨酰雙甘肽在405410nm處吸光度增高速率與GGTM生呈正比關(guān)系。（二）生理變異年齡與妊娠對GG破響不大。男性血中GG怡量明顯高于女性，可能與前列腺有豐富的GGTW關(guān)。酗酒會引起GG醐顯升高，升高程度與飲酒量有關(guān)，診斷疾病時必須排除這一因素。（三）參考值男性1150U/L（37C）;女性730U/L（37C）。（四）臨床意義1 .測定尿中該酶活性有助于診斷腎小管疾患；人體各器官中GG怡量以腎臟最高，其次是前列腺、胰、肝、盲腸和腦。腎

49、臟中GG怡量雖高，但腎臟疾病時，血液中該酶活性增高卻不明顯。90%2 .GGTi要用于診斷肝膽疾病。原發(fā)性肝癌、胰腺癌和乏特氏壺腹癌時，血清GG怖性顯著升高，特別在診斷惡性腫瘤患者有無肝轉(zhuǎn)移和肝癌術(shù)后有無復(fù)發(fā)時，陽性率可達(dá)GGTW工酶n與AFP聯(lián)合檢測可使原發(fā)性肝癌AFP檢測的陽性率明顯提高；GGM反應(yīng)慢性肝細(xì)胞損傷及其病變活動時比轉(zhuǎn)氨酶敏感，在急性恢復(fù)期若ALT已經(jīng)正常，而GG時性持續(xù)升高提示肝炎慢性化。嗜酒或長期接受某些藥物如苯巴比妥、苯妥英鈉、安替比林時，血清GGTM性常升高?？诜茉兴帟笹GT1增高20%表3-5-5常見疾病丫-谷氨?；D(zhuǎn)移酶的變化疾病增圖肝膽疾病（膽石癥、炎癥）肝實

50、質(zhì)性疾?。ǜ窝住⒏斡不┟黠@土曾高，可達(dá)正常上限的530倍陽性率在80%A上輕度增高，達(dá)正常上限25倍肝癌明顯土曾高，且陽性率高誘導(dǎo)作用（乙醇、苯巴比妥、抗抑郁藥，抗癲癇藥等）輕度升高，停藥后正常七、淀粉酶測定（AMY淀粉酶包括唾液淀粉酶和胰淀粉酶，Cl一是該酶的激活劑。（一）方法（1）碘一淀粉比色法測定：B血清（或血漿）中a淀粉酶（a-AMY）催化淀粉分子中a-1,4糖昔鍵水解，產(chǎn)生葡萄糖、麥芽糖及含有a-1,6糖昔支鏈的糊精。在底物過量的條件下，反應(yīng)后加入碘液與未被水解的淀粉結(jié)合成藍(lán)色復(fù)合物，其藍(lán)色的深淺與空白管比較、從而推算出淀粉酶的活性單位。（2）對一硝基苯麥芽七糖昔法：以對-硝基苯麥

51、芽七糖甘為底物，經(jīng)a-淀粉酶催化，水解為游離的寡糖（G、G、G）及葡萄糖單位減少的對一硝基苯寡糖甘（4NP-G、4NP-G、4NP-G）;4NP-G、4NP-G及一部分4NP-G,受a-葡萄糖甘酶催化，水解為對一硝基酚和葡萄糖。對一硝基酚的生成量，在一定范圍內(nèi)與R-淀粉酶活力成正比；但其摩爾數(shù)僅為酶解底物（4NP-G）的三分之一，還有三分之二結(jié)合在4NP-G中。反應(yīng)式如下：PNP（對一硝基苯酚）的生成引起405nm處吸光度的上升，上升速率與AMY的活力成正比。（3）2-氯-4-硝基苯麥芽三糖昔法CNP（2-氯-4-硝基苯酚）的生成引起405nm處吸光度的上升，上升速率與AMY勺活力成正比。（二

52、）生理變異成年人血中AMYW性別、年齡、進(jìn)食關(guān)系不大，新生兒AMYfe乏.滿月后才出現(xiàn)此酶，逐步升高，約在5歲時達(dá)到成人水平，老年人AMYF始下降，約低25%（三）參考值碘-淀粉比色法：血清80180U/L;尿液1001200U/L對一硝基苯麥芽七糖苷法：血清淀粉酶220UL（37）尿淀粉酶1200UL（37）（四）臨床意義淀粉酶主要由唾液腺和胰腺分泌，可通過腎小球濾過。1. 升高：（1）急性胰腺炎：血和尿中的AMY!著增高。發(fā)病后812h血?#AMY臺增高，1224h達(dá)高峰，25天下降至正常。尿AMY勺于發(fā)病后1224h開始升高，下降比血清AMS慢，因此，在急性胰腺炎后期測定尿AMYM有價值

53、。特別是急性胰腺炎時。碘-淀粉比色法結(jié)果如超過500U有意義，達(dá)350U時應(yīng)懷疑此病。（ 2） 流行性腮腺炎（3）急性闌尾炎、腸梗阻、胰腺癌、膽石癥、潰瘍病穿孔及嗎啡注射后等均可見血清AMY曾高，但常低于500U。2. 降低：正常人血清中AMYE要由肝臟產(chǎn)生，故血清與尿中AMYW時減低主要見于肝炎、肝硬化、肝癌及急性和慢性膽囊炎等。腎功能障礙時，血清AMY1可降低。八、比色法測定酸性磷酸酶（ACP）ACP是作用類似于ALP的磷酸酶（最適pH7.0以下），ACP同工酶可分為前列腺ACP（PAR和非前列腺ACP（如紅細(xì)胞ACR溶酶體ACP破骨細(xì)胞/吞噬細(xì)胞AC吟）兩大類。前列腺含有豐富的PAP,比

54、其他組織多100倍（一）方法連續(xù)監(jiān)測法：a-磷酸秦胺在酸T條件下被ACP水解為a-蔡酚和磷酸，a-蔡酚再和固紅TR鹽反應(yīng)生成穩(wěn)定的重氮化合物。通過測定在405nm吸光度的變化速率來計算ACP的活性。前列腺酸性磷酸酶可被酒石酸抑制，血清加入酒石酸后可測得非前列腺酸性磷酸酶活性，總酸性磷酸酶活性減去非前列腺酸性磷酸酶活性得前列腺酸性磷酸酶活性。（二）生理變異男、女性血中AC哈量無差異，新生兒ACP活性與成人相似，出生后l個月中血清酶活性甚高，然后隨年齡的增長而逐漸下降，青春期又可出現(xiàn)一活性峰值，至20歲降至成人水平。（三）參考值：成人總酶活性為09U/L,前列腺酸性磷酸酶為03U/L（連續(xù)監(jiān)測法）。（四）臨床意義臨床血清ACP測定主要用于前列腺癌的輔助診斷及療效觀察指標(biāo)。前列腺癌，特別是有轉(zhuǎn)移時，血清ACP可明顯升高，前列腺酸性磷酸酶更有意義。溶血性疾病、變形性骨炎、急性尿潴留及近期作過直腸檢查者，此酶亦可輕度增高。第四節(jié)代謝物濃度酶法測定代謝物濃度測定也可以采用酶法。酶法分析的優(yōu)點是特異性高，在準(zhǔn)確性、精密度、靈敏度和線性測定范圍等都較高。由于酶作用的特異性，成分復(fù)雜