葡聚糖凝膠層析脫鹽

1、 思考題 影響凝膠分離效果的因素： 影響凝膠分離效果的因素： 2、柱子的影響：柱的長(zhǎng)短粗細(xì)對(duì)層析效果都會(huì)產(chǎn)生影響。 柱子的影響：柱的長(zhǎng)短粗細(xì)對(duì)層析效果都會(huì)產(chǎn)生影響。 一般柱內(nèi)徑為1cm， 如果樣品較多，最好用2 cm。 一般柱內(nèi)徑為 1cm，如果樣品較多 ，最好用2-3cm。直徑 太小時(shí)會(huì)發(fā)生“ 管壁效應(yīng)” 即柱管中心組分移動(dòng)較慢， 太小時(shí)會(huì)發(fā)生 “ 管壁效應(yīng) ” 。 即柱管中心組分移動(dòng)較慢 ， 管壁周?chē)苿?dòng)較快。進(jìn)行脫鹽時(shí)，柱高50cm比較合適 管壁周?chē)苿?dòng)較快 。 進(jìn)行脫鹽時(shí) ， 柱高 50cm比較合適 ； 比較合適； 分級(jí)分離時(shí)，100cm就足夠了 分級(jí)分離時(shí)，100cm就足夠了。 就足

2、夠了。 3、凝膠的裝填：要均勻，不能有斷路或氣泡。 凝膠的裝填：要均勻，不能有斷路或氣泡。 4、加樣：樣品濃度和黏度合適。一般樣品所用體積為柱 加樣：樣品濃度和黏度合適。 體積的1 體積的1-4%。 思考題 影響凝膠分離效果的因素： 影響凝膠分離效果的因素： 5 、 洗脫 ： 洗脫液只要能溶解被洗脫物質(zhì)并不使其變性 洗脫： 就可以了。洗脫速度要恒定且合適。一般來(lái)講， 就可以了。洗脫速度要恒定且合適。一般來(lái)講，洗脫速 度慢，一些樣品可以與凝膠基質(zhì)充分平衡，分離效果好。 度慢，一些樣品可以與凝膠基質(zhì)充分平衡，分離效果好。 但洗脫速度過(guò)慢會(huì)造成樣品擴(kuò)散加劇，區(qū)帶變寬， 但洗脫速度過(guò)慢會(huì)造成樣品擴(kuò)散加

3、劇，區(qū)帶變寬，切實(shí) 驗(yàn)時(shí)間大大延長(zhǎng)。 驗(yàn)時(shí)間大大延長(zhǎng)。 6、分配系數(shù)Kav ：Kd = （Ve-Vo）/（Vt-Vo） 分配系數(shù)Kav Ve-Vo） Vt-Vo） 相關(guān)知識(shí) Vt：床的總體積=外水體積+內(nèi)水體積+顆粒自身體積 Vt：床的總體積=外水體積+內(nèi)水體積+ Ve：洗脫體積 Ve： Vo：外水體積 Vo： 大分子（大于孔徑上限）全部在外水體積中， 大分子 （ 大于孔徑上限 ） 全部在外水體積中 ， 它在膠床 中的洗脫體積等于外水體積。 中的洗脫體積等于外水體積。（Kd=0） 小分子（小于孔徑下限）自由出入網(wǎng)孔， 小分子 （ 小于孔徑下限 ） 自由出入網(wǎng)孔 ， 它在膠床中的 洗脫體積等于床體積。 洗脫體積等于