檢驗方法驗證的類型及基本要求

1、精品資料檢驗方法驗證的類型及基本要求（一） 概述方法驗證的目的是證明所采用的方法達到相應的檢測要求。由于分析性質的差異，本節(jié)中所討論的驗證內容不適用微生物分析方法。驗證的內容主要包括準確度、精密度、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍、粗放性和耐 用性 9 9 個方面。藥典收載的方法一般比較成熟，需驗證的內容與新開發(fā)的檢驗方法有很大 差異，美國藥典中明確規(guī)定其所收載的方法需做系統(tǒng)適應性試驗，這即是美國藥典對方法驗證的要求。某一方法需到底須進行哪些項目的驗證，應根據(jù)實際情況而定，并不是所一的方法都必需進行以上 9 9 個方面的驗證試驗。方法驗證的范圍，一般來說，可分為以下3 3 種情況區(qū)別對待。1

2、 1、對于直接引用有法定依據(jù)的方法，如藥典標準和部頒標準，僅做系統(tǒng)適應性試驗即可。但若將法定方法用于測定新藥，或將某一品種的法定方法用于另一品種，就需進行系統(tǒng)的方法驗證。2 2、對于已在一實驗室驗證過但需在另一個實驗室使用的分析方法，可采用對照試驗法。即取同一批樣品，按此方法在兩實驗室分別進行檢驗，將結果進行比較（如用 t t 檢驗法計算），判斷是否有顯著性差異。這特別適用于大公司（包括跨國公司）的情況。母公司完成了系統(tǒng) 的方法驗證工作，子公司實驗室均可用結果對照的方法進行判斷，節(jié)省了大量人力、物力。國外稱這種做法為 技術轉移”（TechnicalTechnical transfertrans

3、fer ）。3 3、其他分析方法可分為 4 4 種類型，驗證要求可參見下表不同分析方法的驗證要求驗證項目類型類型 I I類型 IIII類型 IIIIII 類型 IVIV精品資料定量測定限度試驗準確度 要求 要求* *精密度要求要求要求專屬性要求要求要求*要求檢測限要求*定量限要求*線性要求要求*范圍要求要求*注：“一一”表示不坐要求；“* *”表示需根據(jù)實驗特性決定是否坐要求。類型 I I 指用于測定原料藥中主要成分或制劑中活性組分（包括防腐劑）的定量分析方法。類型 IIII 指用于測定原料藥中雜質或制劑中降解產(chǎn)物的分析方法，包括定量分析和限度試驗。類型 IIIIII 指用于測定性能特性（如溶

4、解度、溶出度）的分析方法。類型 IVIV 指鑒別試驗。（二）驗證的內容及基本要求1.1. 準確度準確度是指用該方法測定的結果與真實值接近的程度，一般用回收率表示。準確度的測定至少要區(qū)方法范圍內地個濃度級別，每個濃度級別至少要測定3 3 次。如某方法的范圍是80%120%80%120%，則應取 80%80%、100%100%、120%120% 3 3 個濃度，每個濃度測定 3 3 次，計算 9 9 個測定結果的回收率及相對標準偏差，回收率及相對標準偏差均應在規(guī)定限度之內。（1 1）原料藥含量分析 可通過分析已知純度的對照品或樣品進行測定，或用本法所得結果與另一驗證的方法所得結果進行比較。（2 2

5、）制劑中各組分的含量分析按制劑處方取適量各組分進行有機物混合得有一混合精品資料物進行測定，從而確定方法的準確度。若不可能得到處方中所有組分，可往制劑中加入已知量的被分析物進行測定，另一方法是把此方法的分析結果與另一已建立準確度的方法法的分 析結果進行比較。（3 3）雜質的定量分析 往樣品中加入已知量的的雜質進行測定；若不可能得到某種雜質或降解產(chǎn)物，可把此方法的分析結果與另一已驗證的方法的結果進行比較來確定。雜質的量可用雜質與主藥響應值的比值來表示。2.2. 精密度精密度制在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差（變異系數(shù)

6、）表示。精密度又分為重復性、中間精密度、重現(xiàn)性 3 3 類。在相同條件下，由同一分析人員測定所得結果的精密度稱為重復性；在同實驗室，不同時間由不同分析員用不同設備測定結果的精密度，稱為中間精密度； 在不同實驗室由不同分析人員測定結果的精密度，稱為重現(xiàn)性。（1 1）重復性 方法重復性的確定至少要取方法范圍內的3 3 個濃度級別，每個濃度級別至少要測定 3 3 次；或取 100%100%的樣品濃度至少測定 6 6 次。應自樣品制備開始制備 6 6 份樣品溶 液，所得結果的相對標準偏差即為方法重復性。自動進樣器重復性的測試，一般取同一樣品溶液至少重復進樣 1010 次，其相對標準偏差不應大于1%1%

7、。（2 2）中間精密度 中間精密度主要是為考察隨機變動因素（如時間、人員、設備等）對精密度的影響，但不必對每個可能的影響因素進行單個的考察，可設計方案對其進行統(tǒng)一考察。色普分析方法由于受外界因素的影響較大，故一般需考察中間精密度，至少應在兩種不同條件下進行考察（如不同時間，更換實驗人員等）。（3 3）重現(xiàn)性 一般實驗室不進行此項考察，只有當分析方法將被法定標準采用時，才進行重現(xiàn)性試驗。建立藥典分析方法時常需通過協(xié)同檢查得出重現(xiàn)性的結果。如紫外分光光精品資料度法中吸收系數(shù) E1%1cmE1%1cm 的確定，需通過 5 5 個以上實驗室分析，測定結果符合數(shù)理統(tǒng)計要 求，才能采納使用，收入標準。準確

8、度和精密度之間沒有必然的聯(lián)系。測量的精密度不能說明測量值與真實值的關系，精密度的測量值不一定是準確的，因為引起測量值遠離真值的誤差可能會對一系列的測量發(fā)生同 樣的影響，而不影響精密度，這即是系統(tǒng)誤差的概念。3.3.專屬性專屬性系指在其他成分（如雜質、降解物、輔料等）可能存在下，采用的方法能準確測定出被測物的特性。對于鑒別試驗，應證明當樣品中含有被分析物時呈正反應，當不含被分析物是呈（陰性）負 反應。必要時，需證明與被分析物結構相似的或相近的物質均不呈正反應。對于雜質的測定，一般取含一定雜質量的樣品進行分析，證明此雜質測定其具有適宜的準確度和精密度即可。對于含量分析，可通過加入一定量的雜質或賦形

9、劑至樣品中，通過分析證明結果不受影響。若雜志或降解產(chǎn)物為未知物，可將樣品用強光照射、高溫、高濕、酸堿水解或氧化的方法進 行加速破壞，而后將此樣品進行分析，將分析結果與另一個經(jīng)驗證的方法或法定方法所得結 果進行比較。含量測定應比較兩方法的分析結果，雜質測定若有色譜圖，則應對比雜質峰的形狀。4.4.檢測限檢測限指樣品中被測物能被檢測出的最低量。（1 1）非儀器分析目視法 通過用已知濃度的樣品分析來確定可檢出的最低水平作為檢 測限。（2 2）儀器分析方法 可以非儀器分析所用的目視法來確定檢測限，也可用已知濃度的精品資料樣品與空白試驗對照，以信噪比為2:12:1 或 3:13:1 來確定檢測限的最低水

10、平。不論用哪種方法，均需制備相應檢測限濃度的樣品，反復測試來確定。5.5.定量限定量限系指樣品中被測物能被定量測定的最低量，其測定結果應具一定準確度和精密度。雜質和降解物用定量測定方法研究時，應確定定量限。（1 1）非儀器分析法 與檢測限的非儀器分析方法所用方法相同，只是所得結果需符合 一定的準確度和精密度要求。（2 2）儀器分析法一般以信噪比為 10:110:1 時相應的濃度作為定量限的估計值，然后配置相應定量限濃度的樣品，反復測試來進行確定。6.6.線性線性指在設計的范圍內，測試結果與試樣中被測物濃度直接呈正比關系的程序。應在規(guī)定的范圍內測定線性關系?？捎靡毁A備液精密稀釋或分別精密稱樣，制

11、備一系列的供試品（至少 5 5 份不同濃度的供試品）進行測定。以測得的響應信號作為被測物濃度的函數(shù)，進行線 性回歸，求出回歸方程及相關系數(shù)。7.7.范圍范圍指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。 分析方 法的范圍應根據(jù)具體分析發(fā)以及對線性、 準確度、精密度的結果和要求確定。無特殊要求時， 通?？刹捎靡韵聵藴剩?1)對于原料藥和制劑的含量測試，范圍以內感為測試濃度的80%120%80%120%。(2)雜質測定，范圍應為測試濃度的50%50% 120%120%。(3)含量均勻度，范圍應為測試濃度的70%130%70%130%，根據(jù)某些劑型的特點（如氣霧劑），此范圍可

12、適當放寬。精品資料(4)溶出度范圍應為標準規(guī)定范圍的土 20%20%。如某一劑型的溶出度規(guī)定，1h1h 后溶出度不得小于 20%20% , 24h24h 后溶出度不得小于 90%90%，則考察此劑型的溶出度應為0110%0110%。(5)若含量測定與雜質檢查同時測定，用百分歸有法，則線性范圍應為雜質規(guī)定限度的-20%-20%至含量限度的 20%20%。8.8.粗放性分析方法的粗放性(RuggednessRuggedness )指在不同實驗條件下(如不同實驗室、不同實驗員、不 同的實驗員、不同批的試劑、不同的分析溫度、不同時間等)對同一樣品進行分析所得結果的重現(xiàn)性。此實驗條件應仍在方法規(guī)定的限度內。將在不同實驗條件下所得結果的重現(xiàn)性與方法的重復新年感進行比較，來衡量分析方法的粗放性。9.9. 耐用性耐用性(RobustnessRobustness )指測定條件有小的變動時，測定結果不受影