多發(fā)性骨髓瘤患者外周血與骨髓中瘤細(xì)胞的檢測(cè)及臨床意義

1、多發(fā)性骨髓瘤患者外周血與骨髓中瘤細(xì)胞的檢測(cè)及臨床意義         08-03-07 16:50:00     編輯：studa20       作者：蔣元強(qiáng)，李建勇，吳雨潔，楊慧，沈云峰，陳麗娟，徐衛(wèi)，錢思軒，吳漢新，陸化，盛瑞蘭【摘要】  本研究探討多發(fā)性骨髓瘤（MM）患者的循環(huán)骨髓瘤細(xì)胞（circulating myeloma cells, CMC）和骨髓骨髓瘤細(xì)胞(marrow myeloma c

2、ells, MMC)的相關(guān)性及其臨床意義。采用四色流式細(xì)胞術(shù)對(duì)55例MM患者同時(shí)檢測(cè)CMC和MMC的百分率，并結(jié)合患者的2微球蛋白（2-MG）、血漿白蛋白（Alb）水平、染色體核型、腎功能等預(yù)后相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)分析。將患者分成4組：A組為同時(shí)檢測(cè)到CMC和MMC患者；B組為僅檢測(cè)到MMC患者；C組為僅檢測(cè)到CMC患者；D組為未檢測(cè)到瘤細(xì)胞患者。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與其他各組相比，A組的2-MG和肌酐濃度顯著增高，白蛋白水平明顯低下。就上述預(yù)后因素而言，在檢測(cè)到與未檢測(cè)到骨髓瘤細(xì)胞患者之間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。初發(fā)、復(fù)發(fā)/難治患者的CMC和MMC百分率明顯高于部分緩解和完全緩解的患者。骨髓瘤患者CMC與MM

3、C顯著相關(guān)。結(jié)論：骨髓瘤患者CMC和MMC百分率不僅反映腫瘤負(fù)荷，而且預(yù)示病情進(jìn)展，特別是同時(shí)檢測(cè)到CMC和MMC的多發(fā)性骨髓瘤患者。 【關(guān)鍵詞】  多發(fā)性骨髓瘤；骨髓瘤細(xì)胞；循環(huán)骨髓瘤細(xì)胞；骨髓骨髓瘤細(xì)胞Detection of Circulating and Bone Marrow Myeloma Cells in Patients with Multiple Myeloma and Its Clinical SignificanceAbstractThis study was aimed  to investigate the correlation between

4、circulating myeloma cells (CMC) and bone marrow myeloma cells (MMC)     in patients with multiple myeloma (MM)and its clinical significance. Four-color flow cytometry was used to detect the percentage of CMC and MMC in 55 patients with MM. Other prognosis-associated factors such

5、as 2 microglobulin (2-MG), serum albumin (Alb), chromosomal abnormalities and renal function were simultaneously analyzed. The patients were divided into four groups: group A, in which  CMC and MMC were simultaneously detected; group B, in which only MMC were detected; group C, in which only CM

6、C were detected; group D, in which no myeloma cells were detected in peripheral blood or bone marrow. The results showed that the concentrations of 2-MG and creatinine were significantly increased and Alb markedly decreased in group A as compared with other groups. Statistical differences existed in

7、 the above-mentioned factors between patients with myeloma cells detected and not detected. The percentages of CMC or MMC in newly diagnosed, refractory and relapsed patients were apparently higher than those in patients with partial and complete remission, respectively. CMC were strikingly correlat

8、ed with MMC. It is  concluded that  the percentages of CMC and MMC not only imply tumor load in MM patients, but also predict the progression of MM, espectively for patients with MM, in those patients CMC and MMC were   simultaneously detected.Key wordsmultiple myeloma; myeloma c

9、ell; circulating myeloma cell; bone marrw myeloma cell多發(fā)性骨髓瘤(MM) 是以漿細(xì)胞的異常增生為特征的惡性腫瘤性疾病，臨床表現(xiàn)多樣，預(yù)后相關(guān)因素多而復(fù)雜。對(duì)其預(yù)后相關(guān)因素作系統(tǒng)的分析可直接指導(dǎo)臨床治療方案的選擇及療效和預(yù)后的評(píng)估。 本研究根據(jù)骨髓瘤細(xì)胞（MC）的免疫表型特征， 采用四色流式細(xì)胞術(shù)同時(shí)檢測(cè)MM患者外周血和骨髓中MC的比例，探討二者的相關(guān)性及其臨床意義。材料和方法病例2002年2月-2005年12月同時(shí)檢測(cè)外周血循環(huán)骨髓瘤細(xì)胞（circulating myeloma cells, CMC）和骨髓骨髓瘤細(xì)胞（marrow mye

10、loma cells, MMC）的MM患者55例，其中男34例，女21例，年齡44-81歲，中位年齡58.5歲。患者均以臨床表現(xiàn)、骨髓檢查、X 線攝片、生化和免疫學(xué)指標(biāo)等確診，診斷標(biāo)準(zhǔn)見文獻(xiàn)1，其中IgG型31例、IgA型12例、輕鏈型10例、IgM型1例、不分泌型1例。按Durie-Salmon 分期法(D-S臨床分期)2：期6例，占10.91%；期18例，占32.73%；期31例，占56.36%。按新的多發(fā)性骨髓瘤國(guó)際分期（ISS）3：期13例，占23.63%；期20例，占36.36%；期22例，占40%。有腎功能損害15例，腎功能正常40例。實(shí)驗(yàn)試劑與儀器單克隆抗體包括CD19-ECD、

11、CD45-FITC、CD56-PE、CD138-PC5等及其相應(yīng)的標(biāo)記熒光素的同型對(duì)照、PE標(biāo)記的同型對(duì)照均為美國(guó)Caltag公司產(chǎn)品（clone 1E7.2），其余單克隆抗體均為法國(guó)Immunotech公司產(chǎn)品。Epics XL型流式細(xì)胞儀為Beckman-Coulter公司產(chǎn)品，分析采用Expo32-ADC分析軟件。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分別新鮮抽取同一例MM患者肝素抗凝的外周血（5 ml）和骨髓標(biāo)本（3 ml），在6小時(shí)內(nèi)，用密度梯度離心法分別分離標(biāo)本中單個(gè)核細(xì)胞。將單個(gè)核細(xì)胞數(shù)調(diào)整至1×106/ml，取100 l加CD19-ECD、CD45-FITC、CD56-PE、CD138-PC

12、5各20 l，避光放置15分鐘，加Fix &Perm 試劑盒A固定液100 l，避光放置 15分鐘，加PBS 2 ml， 400×g離心5分鐘，棄上清，再加1.5 ml PBS重懸，然后上機(jī)檢測(cè)，對(duì)外周血至少分析50 000個(gè)細(xì)胞，對(duì)骨髓標(biāo)本分析30 000個(gè)細(xì)胞；同時(shí)設(shè)同型對(duì)照管。檢測(cè)方法參見文獻(xiàn)4。定義及判斷標(biāo)準(zhǔn)分別檢測(cè)出由單克隆抗體CD19-、CD45、CD56、CD138標(biāo)識(shí)的CMC及MMC百分?jǐn)?shù)，按Rawstron等5檢測(cè)MM微小殘留病灶定義標(biāo)準(zhǔn)，把流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)瘤細(xì)胞表達(dá)百分?jǐn)?shù)的有效值定為>0.01%為陽(yáng)性，<0.01%為陰性。患者分為4組。A組：同時(shí)

13、檢出CMC和MMC的患者；B組：只檢出MMC的患者；C組：只檢出CMC的患者；D組：都未檢出MC的病例。按國(guó)內(nèi)MM的診斷標(biāo)準(zhǔn)1，根據(jù)患者骨髓瘤細(xì)胞蛋白水平、骨髓中原漿細(xì)胞的比例、溶骨性病變的數(shù)目和大小等，分為初發(fā)及復(fù)發(fā)/難治組(包括初診12 例；原發(fā)難治2例；緩解后病情又有進(jìn)展5例)和緩解組（其中部分緩解28例，完全緩解8例）。結(jié)合臨床上患者的2微球蛋白（2-MG）、血清白蛋白(Alb)水平、骨髓染色體核型異常、乳酸脫氫酶(LDH)水平、D-S臨床分期、ISS分期、骨髓原漿細(xì)胞百分比、腎功能等預(yù)后相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)性分析，研究相應(yīng)的臨床意義。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用確切概率法和卡方檢驗(yàn)法分別檢驗(yàn)各組別之間C

14、MC和MMC與其他MM預(yù)后因素的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，用t檢驗(yàn)檢測(cè)初發(fā)、復(fù)發(fā)/難治及部分緩解患者之間瘤細(xì)胞表達(dá)的差異，用Pearson分布法檢測(cè)CMC陽(yáng)性與MMC陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果A、B、C、D組病例的構(gòu)成比及瘤細(xì)胞的百分比，CMC、MMC間的相關(guān)性A組13例中，初發(fā)8例，難治1例，緩解后病情又有進(jìn)展2例，部分緩解2例，無(wú)完全緩解患者。檢出CMC、MMC的平均百分比分別是3.57%(0.37%-24.8%)、17.9%(1.41%-74.6%)，13例中初發(fā)及復(fù)發(fā)/難治患者占84.62%。B組13例患者中，初發(fā)3例，難治1例，部分緩解后病情又有進(jìn)展2例，部分緩解7例。骨髓標(biāo)本中MMC平均百分比為9.

15、94%(3.22%-31.4%)，13例中初發(fā)及復(fù)發(fā)/難治患者占46.15%。C組4例中，初發(fā)1例，緩解后病情又有進(jìn)展1例，部分緩解2例。CMC的平均百分比為0.95%(0.16%-1.4)，4例中初發(fā)及復(fù)發(fā)患者占50。D組25例患者中部分緩解 17例，完全緩解 8例均未檢出CMC和MMC。檢測(cè)CMC陽(yáng)性與MMC陽(yáng)性表達(dá)的Pearson點(diǎn)相關(guān)系數(shù)rn=0.3912(2=8.4156，P=0.004)，有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳細(xì)資料見表1。MM病人CMC和MMC的流式圖見圖1、圖2。Table 1. Distribution of MM patients in each group and percentage of CMC and MMC（略）A、B、C、D組和其他臨床預(yù)后因素的關(guān)系A(chǔ)、B、C、D 4組病例中D組