原發(fā)性肝癌患者細胞因子水平的變化與轉(zhuǎn)移和復發(fā)的關系

1、原發(fā)性肝癌患者細胞因子水平的變化與轉(zhuǎn)移和復發(fā)的關系         08-07-14 16:53:00     編輯：studa20          作者：滕木儉 王明海 潘樂玉【摘要】目的：觀察原發(fā)性肝癌患者細胞因子IL4、IFN、IL1在肝癌組織中的表達，探討細胞因子的變化、漂移與肝癌轉(zhuǎn)移和復發(fā)的關系。方法：應用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（RTPCR）檢測并比較肝癌組和對照組細胞因子IFN（Th1）

2、、IL4（Th2）、IL1的水平。結(jié)果：34例肝細胞性肝癌患者與15例單純肝硬化患者相比，肝癌組織中IFN（Th1）的表達強度、陽性表達頻度較對照組明顯降低，分別為0.92±0.36（18/34，53.9%）和1.63±0.64（12/15，80.0%）（P0.01）。IL4（Th2）在肝癌組織中的表達強度較對照組明顯增強，分別為1.76±0.49和1.01±0.51（P0.01）。IL1在肝癌組織中和對照組的表達強度及頻度分別為1.01±0.32（30/34，88.2%）和0.35±0.30（4/15，26.7%）（P0.001）。

3、3種細胞因子在肝癌組織中有5種不同表達方式。結(jié)論：原發(fā)性肝癌患者的抗腫瘤免疫存在嚴重缺陷，細胞因子間的平衡被打破，使已處于抑制狀態(tài)的Th細胞免疫更趨惡化，致使腫瘤細胞容易發(fā)生肝內(nèi)轉(zhuǎn)移及術后復發(fā)。    【關鍵詞】肝腫瘤白細胞介素1白細胞介素4干擾素型腫瘤轉(zhuǎn)移腫瘤復發(fā)，局部       The relationship between immunoregulatory cytokines and intrahepatic metastasis and recurrence in primary hepato

4、cellular carcinoma    【ABSTRACT】Objective:To observe the expression of immunoregulatory cytokines including interleukin4(IL4,Th2)、 interferon(IFN,Th1)、interleukinbetal (IL1) in the tissues of hepatocellular carcinoma(HCC),and to investigate the relationship between the changes of immu

5、noregulatory cytokines in patients with hepatocellular carcinoma and intrahepatic metastasis and recurrence.Methods:The immunoregulatory cytokines:IFN(Th1)、IL4(Th2)、IL1 were analyzed by RTPCR.Results:34 cases with HCC were compared with the ones with liver cirrhosis,the expression rates and density

6、of IFN(Th1) in the tissues of hepatocellular carcinoma were much lower than that in the liver cirrhosis,they are 0.92±0.36(18/34,53.9%) and 1.63±0.64(12/15,80.0%),respectively.There is significant difference between them (P0.01).The expression density and levels of IL4(Th2) in the tissues

7、of hepatocellular carcinoma increased clearly,compared with the control group.They are 1.76±0.49 and 1.01±0.51,respectively.Their difference showed statistical significance (P0.01).The expression rates and levels of IL1 in the tissues of hepatocellular carcinoma and liver cirrhosis were 1.

8、01±0.32(30/34,88.2%) and 0.35±0.30(4/15,26.7%),respectively.There was significant difference between them (P0.001).Above three immunoregulatory cytokines in patients with hepatocellular carcinoma showed five different expression styles.Conclusion:There is severe deficiency of immune respon

9、ses against tumors in patients with hepatocellular carcinoma,the balance between those above immunoregulatory cytokines was destroyed,so that immune responses against tumors were weaker and in further suppression,which may enhance the incidence rates of intrahepatic metastasis and recurrence of hepa

10、tocellular carcinoma after operation.    【KEY WORDS】Liver neoplasmsInterleukin1Interleukin4Interferon typeNeoplasm metastasisNeoplasm recurrence,local    我國肝癌患者大多合并嚴重肝硬化，機體免疫狀態(tài)已發(fā)生某些改變，并且容易發(fā)生肝內(nèi)及遠處轉(zhuǎn)移。肝臟局部、全身免疫狀態(tài)和抗腫瘤免疫與原發(fā)性肝癌復發(fā)及轉(zhuǎn)移關系的研究已取得一些進展13。腫瘤免疫研究占據(jù)重要位置46。本研究應用RTPCR法對肝癌

11、組織細胞因子進行檢測，以探討肝細胞癌患者免疫狀態(tài)改變及其與肝癌轉(zhuǎn)移和復發(fā)的關系。    1  資料與方法    1.1  一般資料  肝細胞性肝癌（HCC）組織均來源于我院2000年3月到2002年3月手術切除標本，均經(jīng)術后病理證實，肝硬化組織來源于同期門脈高壓癥手術肝活檢。其中肝細胞性肝癌組（肝病組）34例，男23例，女11例，年齡3571歲，中位年齡43歲；門脈高壓癥肝硬化組（對照組）15例，男11例，女4例，年齡2963歲，中位年齡37歲。    1.2  方

12、法    1.2.1  標本收集處理  （1）部分標本離體后均迅速切取多塊小組織，30min內(nèi)浸入液氮中，之后轉(zhuǎn)移到-80冰箱中凍存?zhèn)溆茫唬?）所有標本均行常規(guī)病理檢查及分類。    1.2.2  細胞因子IL4、IFN、IL1的測定  RTPCR檢測細胞因子試劑盒（瑞士Rochr公司產(chǎn)品）：CIT變性液10ml，2MNaOAC（pH4.0，600l），MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶200U/l（20l）；逆轉(zhuǎn)錄反應體系（RT reaction buffer），Taq DNA聚合酶1U/l（40l），PCR反

13、應體系（PCR reaction buffer），去Rnase水。    提取總RNA：（1）100mg標本剪碎后加500l CIT變性液，在勻漿器內(nèi)勻漿，若為細胞標本，吹打即可，加入50l 2M NaOAC、500l水飽和酚、100l氯仿，每步均需要混勻10s，冰浴515min。（2）410000g離心10min，小心吸取上清移入新Eppenderf管中，切忌吸入蛋白，加入等體積的異丙醇，-20放置1h。（3）412000g離心10min，棄上清，沉淀使用100l CIT變性液重溶，加入等體積異丙醇混勻，-20放置1h。（4）412000g離心10min，棄上清

14、，用75%乙醇洗一遍，至此可加入1ml無水乙醇于-70儲存?zhèn)溆茫嗫芍苯記龈?，溶于適量無Rnase的去離子水中。（5）紫外分光光度計測出A260及A280的值，計算所提總RNA的含量。    逆轉(zhuǎn)錄（RT）反應：DEPC處理0.5ml于Eppendorf管中，加入逆轉(zhuǎn)錄反應體系試劑，快速離心混勻，37，1h，95，10min滅活MMLV，快速離心沉淀。    PCR反應：在上述20l RT產(chǎn)物的0.5ml Eppendorf管中，繼續(xù)加入PCR反應體系試劑，快速離心混勻，加入100l液體石蠟。循環(huán)條件：94 1min，72 1min，循環(huán)35次，末次延長7min，電泳鑒定。定量分析：用凝膠成像分析系統(tǒng)判定陽性細胞因子和actin表達強度。見表1。表1  RTPCR檢測相關細胞因