固相萃取_高效液相色譜法同時測定大豆中5種除草劑(1)_圖文

1、作者簡介 崔勇(1977-, 男, 碩士, 主管技師, 主要從事理化檢驗工作。=化學(xué)測定方法固相萃取-高效液相色譜法同時測定大豆中5種除草劑崔勇, 劉思潔, 張冠英, 張博, 王蘊馨, 李青(吉林省衛(wèi)生監(jiān)測檢驗中心, 長春 130062摘要 目的:建立大豆中5種除草劑多殘留同時檢測的高效液相色譜分析方法。方法:樣品經(jīng)甲醇提取, C 18固相萃取小柱凈化后, 采用高效液相色譜方法分離, 檢測波長為230n m 。結(jié)果:5種除草劑(普殺特、苯達松、氟磺胺草醚、喹禾靈、2, 4-滴丁酯 在0151010mg/L范圍內(nèi)線性良好, 回收率為7719%10118%, 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1124%6150%,

2、方法的定量限為01050108m g/kg, 能達到國家有關(guān)上述除草劑殘留限量的要求。結(jié)論:本法操作簡便, 準(zhǔn)確可靠, 為質(zhì)量監(jiān)控提供了參考。關(guān)鍵詞 除草劑; 大豆; 高效液相色譜法; 固相萃取中圖分類號 R 115 文獻標(biāo)識碼 A 文章編號 1004-8685(2009 08-1790-03Si m u ltaneous determ inat ion of 5h erb icide residues in soybean by h igh per form an ce liqu id chro m a tography w ith solid pha se extractionCUI Y

3、ong , LI U S i 2jie , Z HA NG Guan 2yi ng, Z HA NG B o , W A NG Y un 2xin , LI Qing (Jili n Center f or San itatio n Inspectio n and Test , Changchun 130062, Ch i naAbstra ct O bjective :A h i gh per f or m ance li quid chro m atography (HPLC m e t hod for s i m u ltaneo us dete r m ina ti on of 5he

4、 rbi 2cides res i dues i n so ybean was deve l oped and evalua ted 1M ethods :The ana l ytes i n soy bean were extracted w it h m ethanol 1The ex 2tract was c l eaned up usi ng an SPE -C 18cartri dge , separated and determ i ned by H PL C w ith UV detector at a wave length of 230nm 1R e s u lts :The

5、 linear ity of 5herb i c i des was good i n t he range of 0151010mg/L1The recovery of the me t hod was 7719%10118%and relative standard devi atio n (RSD 1124%6150%1The li m its of quan tita ti on (L OQ of the 5herb i c i de res i dues were 01050108m g/kg1C onc l u sion :The m ethod is accurate , re

6、liab le and easy to be o perated 1It can be used for the deter m i na 2ti on of 5herb icide residues i n soybean 1K ey wor ds H erb icide ; Soy bean ; H i gh perfor m ance liqu i d chro m atography ; Soli d phase extracti on 大豆作為四大作物之一, 在我國以及全世界都有很大的種植面積, 特別近年來高產(chǎn)高油轉(zhuǎn)基因品種的種植, 使大豆產(chǎn)量大大提高, 大豆田雜草眾多, 危害嚴(yán)重,

7、 可使大豆減產(chǎn)40%50%。因此在大豆田使用化學(xué)除草劑已經(jīng)得到各國的廣泛認可1。大豆田常常使用多種類型除草劑, 除草劑殘留分析方法也逐漸由單一種類除草劑的檢測向多殘留分析發(fā)展。目前我國除草劑殘留檢測方法主要是色譜檢測法, 但一般是針對一種或兩種除草劑的檢測2, 3。為滿足我國食品安全的快速檢驗的要求, 迫切需要研究大豆中除草劑多殘留的同時快速檢測技術(shù)。我們借鑒和參考其它種類除草劑的分析方法35, 建立了采用固相萃取-高效液相色譜法同時測定大豆中多種除草劑殘留的檢測方法。該方法靈敏, 線性范圍寬, 結(jié)果準(zhǔn)確可靠。1 材料與方法111 儀器及設(shè)備W a ters 2996型高效液相色譜儀, 附紫外

8、檢測器; UP WS -1-10T 型純水器(杭州永潔達科技有限公司; C 18小柱(500m g/3m , l W ate rs , US A ; 固相萃取裝置(G l ass Spe-edM ate -12, ASI ; RV05-S T 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、HS260型振蕩器(I KA; 3-18K 型離心機(S I G MA 。112 試劑乙腈(色譜純; 甲醇(色譜純; 正己烷、鹽酸均為分析純; 超純水1812M 8#c m; 除草劑標(biāo)準(zhǔn)品:普殺特、苯達松、氟磺胺草醚、喹禾靈、2, 4-滴丁酯(德國DR 公司, 純度99%以上 。113 液相色譜條件Zorbax SB-C 18色譜柱(5L

9、m, 250mm 416mm ; 柱溫:30e ; 檢測波長:230n m; 進樣量:10L ; l 流動相:011%磷酸:乙腈(體積比為30:70; 流速:110m l/mi n 。114 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備儲備液:精密稱取普殺特、苯達松、氟磺胺草醚、喹禾靈、2, 4-滴丁酯標(biāo)準(zhǔn)品各10m g 用乙腈溶解定容至50m , l 儲于4e 冰箱中。工作液:測定前用乙腈稀釋成標(biāo)準(zhǔn)系列溶液, 濃度為015、110、210、410、810、1010mg /L, 經(jīng)0145L m 濾膜過濾后, 進樣20L , l 用峰面積對濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。115 樣品測定取500, 經(jīng)打碎, 四分法稱豆試1790中國衛(wèi)生

10、檢驗雜志2009年8月第19卷第8期 Ch i nes e J ournal ofH ealt h Lab oratory T echnol ogy , Aug 2009; V ol 19 No 8樣10100g 于離心管中, 加入30m l 甲醇, 超聲提取10m in , 離心(3000r/mi n , 5m i n, 取上層清液于分液漏斗中, 殘渣再按上述操作提取1次。合并上層清液。在甲醇提取液中加入3m l 水, 用10m l 甲醇飽和的正己烷振搖提取, 靜置分層后, 棄正己烷層。同法重復(fù)提取一次。收集甲醇層于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至近干, 待凈化。分別用乙腈、甲醇和水各310m l 活化C

11、18固相萃取小柱, 再用01001m ol/LHC :l 乙腈(體積比為8:2 310m l 平衡小柱, 試樣濃縮液用01001m ol/LH C:l 乙腈(體積比為8:2 510m l 溶解后上柱; 用01001m ol/LH C:l 乙腈(體積比為8:2 610m l 淋洗小柱, 抽干; 用810m l 乙腈洗脫待測組分, 收集全部洗脫液?？刂屏芟春拖疵撍俣葹?0滴/min 左右。將洗脫液氮氣濃縮吹干, 加入110m l 乙腈, 混勻, 經(jīng)0145L m 濾膜過濾后, 用于HPLC 分析。2 結(jié)果與討論211 檢測波長的選擇根據(jù)紫外光譜分別掃描可知, 待測的5種除草劑在200n m 附近均

12、有最大的紫外吸收。在230n m 處有較強吸收, 由于大豆試樣基體復(fù)雜, 在200n m 波長下檢測, 干擾嚴(yán)重, 因此采用230nm 作為檢測波長, 此時樣品中其他物質(zhì)干擾較小, 方法有較高靈敏度。212 流動相的選擇由于本實驗采用的紫外檢測波長是230n m, 乙腈在此波長下吸光值低, 分離效果比甲醇好, 所以選擇乙腈作為流動相中的有機溶劑。為了改變待測組分在色譜柱上的保留行為, 采用011%磷酸作為流動相的水相, 各組分峰形明顯改善。采用等度洗脫:011%磷酸:乙腈(體積比為30:70, 流速為110m l/m i n 待測組分獲得滿意的分離結(jié)果, 見圖1 。11I m az ethap

13、yr(3116m i n; 21Ben t azone(3182m i n ; 31Fo m esafen(5159m i n; 41Qu i zalof op -ethyl (14120m i n; 512, 4-D-butyi ate(14154m i n圖1 標(biāo)準(zhǔn)及樣品色譜圖(a 、b213 提取溶劑的選擇實驗中分別采用二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、甲醇作為提取溶劑, 結(jié)果表明:二氯甲烷提取樣品時乳化現(xiàn)象嚴(yán)重, 而乙酸乙酯在用正己烷除脂過程中也出現(xiàn)了不同程度乳化現(xiàn)象。用乙腈或甲醇提取兩次, 各待測組分的提取效率均在7217%10115%范圍內(nèi)?？紤]到甲醇的價格比乙腈低, 而且測定大豆中除草劑

14、時, 所用提取溶劑量大, 因此本實驗中采用甲醇作為提取溶劑。比較超聲提取和震蕩提取, 結(jié)果表明:超聲提取所用效率更高, 因此確定采用超聲提取10m i n 。214 固相萃取條件的優(yōu)化分別采用硅膠柱和C 18固相萃取小柱進行試驗, 結(jié)果表明C 18小柱凈化的效果較好。選擇的淋洗液為乙腈:011001m ol/LHC l(體積比為2:8 6m l 時, 可以去除雜峰干擾, 各待測物的回收率均高于75%。當(dāng)淋洗液中乙腈比例加大或淋洗體積加大時, 普殺特和苯達松的回收率受到了顯著的影響。本實驗選用乙腈作為洗脫液淋洗待測物。取加標(biāo)試樣提取液于C 18固相萃取小柱上, 洗脫液量分別用10、810、410

15、和210m l 淋洗, 結(jié)果表明, 在洗脫體積810m l 時, 待測除草劑的洗脫效率已經(jīng)達到要求, 此后如果再增加乙腈的用量進行洗脫, 則會洗脫雜質(zhì)而干擾分析, 故本實驗在進行SPE 處理時, 洗脫液乙腈的用量為810m l 。圖2 固相萃取中淋洗條件優(yōu)化215 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍與最低檢出限將1145種除草劑標(biāo)準(zhǔn)溶液取20L l 注入H PLC , 以除草劑峰面積為縱坐標(biāo), 以濃度為橫坐標(biāo), 5種除草劑標(biāo)準(zhǔn)在0151010m g/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系, 5種除草劑的線性相關(guān)系數(shù)在019975019998之間。普殺特、苯達松和氟磺胺草醚的檢出限為01015m g/kg, 定量限為0105

16、m g/kg, 喹禾靈和2, 4-滴丁酯的檢出限為01025mg /kg, 定量限為0108mg/kg , 可以滿足最大殘留限量的檢測要求。216 精密度和準(zhǔn)確度試驗在大豆空白樣品中添加不同含量的3個水平5種除草劑的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液, 按照115步驟進行回收率實驗, 每個添加濃度平行測定6次, 測定精密度, 結(jié)果見表1。5種除草劑在0105110mg /kg濃度范圍內(nèi), 加標(biāo)回收率在7719%10118%, 所測定的RS D 在1124%6150%之間。方法的準(zhǔn)確度和精密度均符合殘留分析的要求。圖3為5種除草劑加標(biāo) 大豆樣品的色譜圖。11I m azet hapyr(3112m i n ; 21B

17、entaz one(3176m i n; 31Fo m esaf en (5148m i n ; 41Qu i zal ofop-ethyl (13195m in; 512, 4-D-bu t y i ate(14127m i n圖3 大豆樣品加標(biāo)色譜圖(下轉(zhuǎn)第1791中國衛(wèi)生檢驗雜志2009年8月第19卷第8期 Ch i nese Jou rnal ofH ea l th Laboratory Technol ogy , Aug 2009; Vo l19 N o 8作標(biāo)準(zhǔn)曲線有悖這個原理; 另外, 不同體積法進樣易受進樣針的準(zhǔn)確性、儀器性能穩(wěn)定性等因素的影響, 況且大體積進樣在填充柱中適用,

18、 對毛細柱而言本身就存在嚴(yán)重過載的問題。鑒于上述原因, 采用多個標(biāo)準(zhǔn)管酯化、固定體積進樣制作標(biāo)準(zhǔn)曲線更為現(xiàn)實、準(zhǔn)確性更高。218 樣品凈化對普通的固體食品或含脂量不高的固體食品來說經(jīng)過沉淀劑沉淀處理后其水提取液即可直接用于酯化, 有些高脂固體食品的基體比較復(fù)雜, 直接酯化后會有大量的雜峰產(chǎn)生, 這些雜峰不僅嚴(yán)重干擾甜蜜素的分離, 而且污染色譜柱, 使分析時間延長。通過將樣品的提取液預(yù)先用正己烷萃取12遍可以有效地消除這些雜峰。圖2是慕司水提取液直接酯化的分離圖譜, 圖3是慕司水提取液經(jīng)正己烷預(yù)萃取后再酯化的分離圖譜。從圖2可以看到較多的雜峰, 全部分離完畢需要15m in ; 圖3中的雜峰已被

19、消除, 只需分離7m in 就能完成分析(見圖2、圖3 。219 洗針液選擇氣相色譜法一般用試驗溶劑作為洗針液, 在實驗過程中發(fā)現(xiàn)正己烷提取液的粘滯性很強, 用正己烷不容易洗滌干凈, 采用自動進樣時容易造成卡針、斷針現(xiàn)象, 用丙酮洗針能夠很好地克服這個毛病, 并且不會對色譜分離造成影響。3 小結(jié)實驗室檢測方法應(yīng)該適應(yīng)現(xiàn)實社會政治、經(jīng)濟等各方面發(fā)展的客觀需要, 以便更好地服務(wù)社會、促進社會和諧地發(fā)展。高脂固體食品中甜蜜素含量的毛細管氣相色譜測定方法有效消除了高脂食品中的干擾因素, 靈敏度高、檢測限低、線性范圍寬, 操作比較簡便、快速, 檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性符合相關(guān)要求, 與國標(biāo)方法相比有較大的優(yōu)點,

20、 能夠滿足GB2760-2007中甜蜜素的限量要求, 同時也能滿足美、英等國家和地區(qū)對食品中甜蜜素的限量要求, 適合于高脂固體食品甜蜜素含量的檢測, 此法也適用于含脂量不高的普通固體食品。參考文獻1GB2760-20071食品添加劑衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)S12王駿1毛細管柱氣相色譜法測定食品中甜蜜素含量J1糧食與食品工業(yè), 2006, 6(13:57-5913湛嘉, 俞雪鈞, 計宏, 等1復(fù)雜基體的食品中甜蜜素的檢測方法J1上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報, 14(4:424-42714GB/T5009197-20031食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定S15顧建華, 徐愛萍1毛細管氣相色譜法測定黃酒中甜蜜素含量J1中國衛(wèi)生檢驗

21、雜志, 2007, 17(5:940-94116郝義, 孫維, 唐巖1食品中甜蜜素的毛細管氣相色譜法測定J1中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2005, 15(11:1341-139617殷德榮1氣相色譜法測定食品中甜蜜素與前處理方法的再研究J1中國食品衛(wèi)生雜志, 2000, 12(2:26-2718王竹天1食品衛(wèi)生檢驗方法(理化部分 注解(下 M1北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2008:72-731(收稿日期:2009-04-29(上接第1791頁表1 大豆試樣的加標(biāo)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差試驗(n =6 除草劑本底(m g/kg添加濃度(mg /kg回收率(% RSD (% 普殺特ND1108415411201578155113010582114121苯達松ND11010017615001595145141010588