HPLC測定心寧膠囊中葛根素含量

1、HPLC測定心寧膠囊中葛根素含量摘要目的：采用HPLC測定心寧膠囊中葛根素含量，以控制該制劑的質(zhì)量。方法：用十八烷基鍵合硅膠柱分離葛根素，以甲醇-水-磷酸(2807200.15)為流動相，檢測波長250nm。結(jié)果：葛根素峰與其它組分峰的分離度大于1，理論塔板數(shù)以葛根素峰計算為8310；線性范圍0.22g(r=0.9999)；平均回收率99.4%，RSD=2.47%(n=5)。結(jié)論：本法簡便、快速，適用于該產(chǎn)品質(zhì)量分析檢驗。關(guān)鍵詞心寧膠囊；葛根素；HPLCDetermination of puerarin in Xinning capsule by HPLC assayWang Yonglin

2、(Wang YL),Tao Ling (Tao L),Zhou Baozhu (Zhou BZ) (Department of pharmacy,Guiyang Medical College,Guiyang,550004)ABSTRACTOBJECTIVE:To domminate the quality of Xinning capsule,the contents of Puerarin in Xinning capsule was determined by HPLC.METHOD:Puerarin was separated on Spherisorb C18 column and

3、detected at 250nm,by using methanol-water-phosphoric acid (2807200.15)as mobile phase.RESULTS:The resolution was greater than 1. The number of theoretical plates calculaled for Puerarin peak was 8310;The standard curve was linear over the range of 0.22g with the correllation coefficient 0.9999.The a

4、verage recovery was 99.4% with RSD=2.47%(n=7).CONCLUSION:The method is simple and fast,and can be used for quantitative analysis of Xinning capsule.KEY WORDSXinning capsule,puerarin,HPLC心寧膠囊系由葛根、丹參等中藥經(jīng)提取加工制成的膠囊劑，具有補氣活血、通脈鎮(zhèn)痛的功能。臨床用于治療冠心病、心絞痛。藥理試驗研究及文獻資料12表明，葛根素是心寧膠囊中的主要有效成分。本實驗采用HPLC對心寧膠囊中葛根素的含量測定方法進

5、行了研究，結(jié)果表明，該法操作簡便、快速、重現(xiàn)性好，可用于心寧膠囊的質(zhì)量控制。1儀器與試藥LC-6A高效液相色譜儀，SPD-6AV紫外-可見分光光度檢測器，C-R6A色譜數(shù)據(jù)處理機(日本島津)。甲醇(色譜純)、磷酸(分析純)、葛根素對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用)。2方法與結(jié)果2.1對照品溶液的制備精密稱取葛根素對照品25mg，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；精密吸取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。2.2供試品溶液的制備取本品10粒的內(nèi)容物，混勻，取約0.1g,精密稱定，置25ml量瓶中，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理1h，放冷，稱量，用甲

6、醇補足減失的重量，搖勻，取上清液離心作為供試品溶液。同法制備不含葛根的陰性樣品溶液。2.3色譜條件島津Shim-Pack CLC-ODS色譜柱(0.156.0 )；流動相：甲醇-水-磷酸(2807200.15)；流速：1ml/min;柱溫：室溫；檢測波長：250nm(葛根素的最大吸收波長13)。2.4系統(tǒng)適用性試驗分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性供試液注入色譜儀，記錄色譜(1)，從中可見葛根素峰保留時間約為12min，陰性樣品譜在葛根素峰位置處無假陽性峰，即本試液條件下葛根素峰與其它組分分離完全。理論塔板數(shù)以葛根素峰計算為8310，葛根素峰與其它組分峰的分離度大于1。1心寧膠囊中葛根素HPL

7、CA對照品；B供試品；C陰性樣品；1葛根素峰2.5線性關(guān)系考察精密吸取葛根素對照品溶液(0.1008mg/ml)2，4，6，8，10l進樣，記錄色譜，以峰面積(v.s)對重量(g)進行線性回歸，回歸方程為：c(g)=4.98610-6A-9.3510-4(r=0.9999)擬合成過原點的方程為：c(g)=4.979910-6A，將一供試品溶液進樣分析所得峰面積分別代入兩方程計算，結(jié)果的相對偏差為0.005%， 由此可看出截距近似為零，故采用外標一點法計算含量。線性范圍0.22g。2.6精密度試驗取一供試品按供試品溶液的制備方法制備供試液，重復進樣5次，RSD為0.8%。2.7重現(xiàn)性試驗取一供試

8、品按供試品溶液的制備方法制備5份供試液，分別進樣，RSD為0.85%。2.8回收率試驗采用加樣回收，精密稱取已測定含量的同一樣品7份，分別精密加入葛根素對照品，按供試品溶液的制備方法制備供試液，進樣，記錄色譜，計算回收率。平均回收率為99.4%，RSD為2.47%。2.9樣品測定按供試品溶液的制備方法制備供試液，對照品溶液，分別進樣，記錄色譜，測定峰面積。測定了5批樣品中葛根素含量，測定結(jié)果見表1。表15批樣品含量測定結(jié)果.n=3批號含量/gRSD/%9703121.230.479704191.350.829704231.460.339705081.410.519705161.270.533討

9、論 3.1葛根主要含黃酮類化合物(大豆苷、大豆苷元、葛根素等)、尿囊素、-谷甾醇、胡蘿卜苷、香豆素等成分4，其中葛根素含量較高，文獻報道56不同產(chǎn)地、生長季節(jié)及品種含量差異較大，鑒于大生產(chǎn)中的原料受產(chǎn)地、來源、品種等因素的影響，使測定結(jié)果產(chǎn)生較大的差異，故對葛根藥材中葛根素的含量作了限度規(guī)定，葛根素含量以(C21H20O9)計，不得少于2.20%。3.2經(jīng)穩(wěn)定性試驗考察，樣品溶液在室溫下(25)放置，每隔2h測定1次，5次測定的結(jié)果RSD為1.87%。說明樣品液中葛根素含量在10h內(nèi)穩(wěn)定。3.3提取條件試驗表明，選擇不同濃度的乙醇、甲醇，在超聲波浴中超聲(功率125W)處理，結(jié)果基本相同(1.170.03)%。但乙醇作溶劑的供試液在色譜分離中柱效不如甲醇提取液好，由于流動相是甲醇體系，葛根素在柱中分離過程中乙醇有一定的展寬影響，甲醇則無此現(xiàn)象。故采用甲醇作溶劑超聲處理提取分離樣品中葛根素，具有操作簡便、提取率高、雜質(zhì)少等優(yōu)點。含量測定方法的回收率、精密度高，重現(xiàn)性好。作者單位：王永林陶玲周寶珠 (貴陽550004貴陽醫(yī)學院藥學系)參考文獻1陰健，郭力弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用(1).北京：北京學苑出版社，1993：626.2王曉青，傅靜.葛根的藥理作用研究進展.北京中醫(yī)藥大學學報，1994，17(3)：39.3中國藥典一部.1995：6