臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法

1、。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法第一章總則第一條 為規(guī)范臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理，保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量，使臨床診斷和治療更為科學(xué)、合理，特制定本辦法。第二條臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)指以臨床診斷治療為目的，以擴(kuò)增檢測(cè)DNA或 RNA為方法的檢測(cè)技術(shù)， 如聚合酶鏈反應(yīng) （ PCR）、連接酶鏈反應(yīng) （ LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的放大系統(tǒng) （TAS）自主序列復(fù)制系統(tǒng)（ 3SR）和鏈替代擴(kuò)增（ SDA）等。第三條 本辦法適用于開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)立在二級(jí)以上醫(yī)院。第四條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須使用經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的臨床檢驗(yàn)試劑開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。第五條

2、衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心（以下簡(jiǎn)稱衛(wèi)生部臨檢中心）和省、自治區(qū)、直轄市臨床檢驗(yàn)中心 （以下簡(jiǎn)稱省臨檢中心）負(fù)責(zé)對(duì)所轄行政區(qū)域內(nèi)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量監(jiān)督管理工作。第二章實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和驗(yàn)收第六條 擬設(shè)置臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)療機(jī)構(gòu)按照臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn) （見附件）籌建實(shí)驗(yàn)室；籌建完成后，由法定代表人向衛(wèi)生部臨檢中心提出技術(shù)驗(yàn)收申請(qǐng)。申請(qǐng)時(shí)需提交以下材料：（一）醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證復(fù)印件；（二）可行性研究報(bào)告；1 、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室機(jī)構(gòu)的所在地醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、本機(jī)構(gòu)的基本情況、對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的需求以及臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的預(yù)測(cè)分析；。1。2 、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增

3、檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置平面圖；3 、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室將開展的檢驗(yàn)項(xiàng)目、實(shí)驗(yàn)設(shè)備條件和有關(guān)技術(shù)人員資料第七條衛(wèi)生部臨檢中心和省臨檢中心共同組織相關(guān)專業(yè)的專家組（以下簡(jiǎn)稱專家組），按照臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)提出申請(qǐng)的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)收。驗(yàn)收完成后，在 20 日內(nèi)將驗(yàn)收?qǐng)?bào)告寄送至申請(qǐng)機(jī)構(gòu)。第八條經(jīng)專家組技術(shù)驗(yàn)收合格的醫(yī)療機(jī)構(gòu)將本辦法第六條規(guī)定的材料及專家組驗(yàn)收?qǐng)?bào)告送至省級(jí)行政部備案。在將符合規(guī)定的全部材料送達(dá)省級(jí)衛(wèi)生行政部門后 15 日內(nèi)未收到省級(jí)衛(wèi)生行政部門不同意的意見，方可開展專家組技術(shù)驗(yàn)收合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。第九條 未經(jīng)專家組驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行

4、政部門備案的醫(yī)療機(jī)構(gòu)不得擅自開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。第三章實(shí)驗(yàn)室監(jiān)督管理第十條臨床基因檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須按照臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范（另發(fā)）開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)工作。第十一條臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn)。經(jīng)培訓(xùn)合格者，由培訓(xùn)單位發(fā)給合格證書， 并將培訓(xùn)合格人員名單報(bào)衛(wèi)生部臨檢中心備案。 獲得培訓(xùn)合格證書者方可從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)工作。培訓(xùn)單位為衛(wèi)生部臨檢中心，或由省級(jí)衛(wèi)生行政部門指定并經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心認(rèn)定的機(jī)構(gòu)。培訓(xùn)時(shí)使用規(guī)定的統(tǒng)一教材。第十二條 以科研為目的的基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。不得向臨床出具檢驗(yàn)報(bào)告，不得向病人收取任何費(fèi)用。第十三條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須按照臨床基

5、因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范開展室內(nèi)質(zhì)量控制，并參加衛(wèi)生部臨檢中心組織的室內(nèi)質(zhì)量評(píng)價(jià)。2。第十四條衛(wèi)生部臨檢中心按照本方法和臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范協(xié)調(diào)、組織省臨檢中心對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。 監(jiān)測(cè)結(jié)果報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門， 同時(shí)抄送被監(jiān)測(cè)的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室所在醫(yī)療機(jī)構(gòu)。第十五條衛(wèi)生部臨檢中心或省級(jí)臨檢中心受省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門委托可對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢查， 現(xiàn)場(chǎng)檢查工作人員在履行職責(zé)時(shí)應(yīng)出示證件。 在進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢查時(shí)，檢查人員有權(quán)調(diào)閱有關(guān)資料，被檢查機(jī)構(gòu)不得拒絕或隱瞞。第十六條 衛(wèi)生部臨檢中心對(duì)在室間質(zhì)量評(píng)價(jià)中不合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室提出警告，對(duì)連續(xù)二次或

6、三次中有二次發(fā)現(xiàn)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)結(jié)果不合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，衛(wèi)生部臨檢中心報(bào)省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門由省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門責(zé)令其暫停有關(guān)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目， 限期整改。 經(jīng)專家組進(jìn)行再次技術(shù)驗(yàn)收并合格， 并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門核準(zhǔn)后，方可重新開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。第十七條對(duì)于未經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組技術(shù)驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生部門備案，擅自開展臨床基因檢驗(yàn)項(xiàng)目的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，由省級(jí)衛(wèi)生行政部門依據(jù)醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例第四十七條和醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例實(shí)施細(xì)則 第八十條予以處罰， 并予以公告。公告所需費(fèi)用由被公告機(jī)構(gòu)支付。第十八條出現(xiàn)下列情況之一的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，由省級(jí)衛(wèi)生行政部門責(zé)令其停止

7、開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)， 并對(duì)其所在醫(yī)療機(jī)構(gòu)予以公告。 公告所需費(fèi)用由被公告機(jī)構(gòu)支付：（一）開展超出衛(wèi)生部臨檢中心組織的技術(shù)驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門備案臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目的；（二）使用未經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的試劑開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的；（三）在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中未開展室內(nèi)質(zhì)量控制的；（四）在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中未參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的；（五）在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中弄虛作假的；。3。（六）以科研為目的的基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目向病人收取費(fèi)用的；（七）使用未經(jīng)培訓(xùn)合格的專業(yè)技術(shù)人員從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的；第四章附則第十九條 對(duì)采供血機(jī)構(gòu)的基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室開展基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目的管理，參照本辦法執(zhí)行。第二十

8、條 衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組對(duì)申請(qǐng)開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)收所需費(fèi)用按國(guó)家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。第二十一條本辦法由衛(wèi)生部負(fù)責(zé)解釋。第二十二條本辦法自發(fā)布之日起施行。附：臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)臨床檢驗(yàn)擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法，制定本標(biāo)準(zhǔn)一、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則（一）臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則1 、 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)2 、 標(biāo)本制備區(qū)3 、 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)4 、 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)如使用全自動(dòng)分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并。（二）各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。4。（三） 進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑

9、儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū) >標(biāo)本制備區(qū) >擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū) >擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。（四） 不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時(shí)，不得將工作服帶出。二、工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)（一）試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)1 、2-8C 和 -15C 冰箱2 、混勻器3 、微量加樣器（覆蓋 1-1000ul ）4 、移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）5 、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）6 、專用工作服和工作鞋7 、專用辦公用品（二）標(biāo)本制備區(qū)1 、2-8C 冰箱、 -20C 或 -80C 冰箱2 、高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)3 、混允器4 、水

10、浴箱或加熱模塊5 、微量加樣器（覆蓋 1-1000ul ）。5。6 、可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）7 、超凈工作臺(tái)8 、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）9 、專用工作服和工作鞋10 、專用辦公用品如需處理大分子DNA，應(yīng)具有超聲波水浴儀。（三）擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)1、 核酸擴(kuò)增儀2、 微量加樣器（覆蓋 1-1000ul）3、 可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）4、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）5、 專用工作服和工作鞋6、 專用辦公用品(四) 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)視檢驗(yàn)方法不同而定?；緝x器設(shè)備如下：1 、 微量加樣器

11、（覆蓋1-1000ul ）2 、 可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）3 、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）4 、 專用工作服和工作鞋。6。5 、 專用辦公用品為了對(duì)以個(gè)特定序列進(jìn)行 PCR做重復(fù)檢測(cè) , 需要三個(gè)不同的區(qū)域 , 每一個(gè)區(qū)域的具體技術(shù)操作和試劑在下面詳細(xì)列出 .1、樣品準(zhǔn)備區(qū)這個(gè)區(qū)域?qū)ｉT用作樣品的準(zhǔn)備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應(yīng)該采取預(yù)防措施：1） PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作。2）組織培養(yǎng)物、 組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準(zhǔn)備間處理，以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或 RNA。3）用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不

12、能用作操作靶序列。4） DNA樣品應(yīng)該用有專門的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。5）大體積樣品應(yīng)該用單獨(dú)包裝的無菌一次性移液管吸取。6）管子打開前都要簡(jiǎn)短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生，而且管子不能用力崩開，這樣會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。7）任何時(shí)候都應(yīng)該穿實(shí)驗(yàn)服和帶手套，手套要經(jīng)常更換，尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實(shí)驗(yàn)服要專門用于樣品準(zhǔn)備間，經(jīng)常清洗。2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCRRNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會(huì)。為了避免這一問題， 反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。在 RNA-PCR中應(yīng)用 UNG以防止污染的方法也有報(bào)道。7。3、前 PC

13、R區(qū)必須有專門用于準(zhǔn)備各種反應(yīng)的區(qū)域，這個(gè)區(qū)域必須保持干凈，而且沒有來自克隆和樣品準(zhǔn)備的污染。 前 PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備， 特別是專門用于前 PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。4、 PCR實(shí)驗(yàn)室試劑的操作1）所用的所有溶液都應(yīng)該沒有核酸和（或）核酸酶（DNase和 RNase）污染。2）所有 PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的新鮮蒸餾的去離子水，用0.22 m過濾的，并且是高壓滅菌。3）在 20到 25貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。4）所用試劑都應(yīng)該以大體積配制，實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量

14、進(jìn)行貯存。5）所有試劑和樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。6）新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)。7）樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存。5、在前 PCR區(qū)建立 PCR混合物1）可以把即刻可用的“主混合物 ”溶液配好、分裝并保存在-20 或 4，在實(shí)驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。2）如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì)，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。8。3）作為一個(gè)規(guī)則，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性對(duì)照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。 而且，你也希望通過使用一個(gè)已知的弱陽性樣品來驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。4）陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染，陰性對(duì)照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。5）當(dāng)做陽性對(duì)照時(shí)，有兩個(gè)理由決定了應(yīng)該使用最少數(shù)量的核酸。6）由于必須有對(duì)照反應(yīng)，對(duì)照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。6、控制污染的方法已設(shè)計(jì)出很有力的酶學(xué)方法用來消除一種形式的污染使用 UNG，這一技術(shù)能有效地消除由 PCR產(chǎn)物引起的