調(diào)脂護(hù)肝膠囊定性定量方法研究

1、調(diào)脂護(hù)肝膠囊定性定量方法研究核心提示：【摘要】目的建立調(diào)脂護(hù)肝膠囊的定性定量方法。方法采用TLC法對(duì)處方中的虎杖、丹參、女貞子、絞股藍(lán)進(jìn)行 【摘要】 目的 建立調(diào)脂護(hù)肝膠囊的定性定量方法。方法 采用TLC法對(duì)處方中的虎杖、丹參、女貞子、絞股藍(lán)進(jìn)行鑒別；用高效液相色譜法測定虎杖苷的含量。結(jié)果 在TLC色譜中檢出虎杖、丹參、女貞子、絞股藍(lán)；虎杖苷在4122472 g范圍呈良好的線性關(guān)系，r=09995，平均回收率為988%，RSD為09%。結(jié)論 所建立的方法能夠用于本品的質(zhì)量控制。 【關(guān)鍵詞】調(diào)脂護(hù)肝膠囊；定性定量分析；高效液相色譜法；虎杖苷 【Abstract】 ObjectiveTo esta

2、blish qualitative and quantitative methods for Tiaozhihugan capsule Methods Huzhang,Danshen,Nzhenzi,Jiaogulan were identified by TLC Polydatin was determined by HPLC ResultsHuzhang,Danshen,Nzhenzi and Jiaogulan were detected by TLC A good linear relationship was noted at the range of 4122472 g of po

3、lydatin，(r=09995)The average recovery was 988%，and RSD was 09%Conclusion The established methods can be used for the quality control of Tiaozhihugan capsule 【Key words】 Tiaozhihugan capsule；Qualitative and quantitative analysis； HPLC；Polydatin 調(diào)脂護(hù)肝膠囊系由虎杖、丹參、女貞子、絞股藍(lán)等藥研制而成的中藥新藥。功能健脾疏肝，活血解毒，降脂護(hù)肝。主治脂肪肝，

4、癥屬脾虛肝郁，瘀毒內(nèi)結(jié)者。為了有效地控制其內(nèi)在質(zhì)量，對(duì)方中的虎杖、丹參、女貞子、絞股藍(lán)分別進(jìn)行了薄層鑒別，對(duì)虎杖中的虎杖苷采用高效液相色譜法進(jìn)行了含量測定1-2。 1 儀器與試液 LC-10A高效液相色譜儀（日本島津）；島津SPD-10A檢測器；N2000色譜工作站；虎杖苷對(duì)照品（批號(hào)：111575-200502）、丹參酮A對(duì)照品（批號(hào)：0766-200010）、齊墩果酸對(duì)照品（批號(hào)：110709-200304）、人參二醇對(duì)照品3（批號(hào)：701-9405）均由中國藥品生物制品檢定所提供；化學(xué)試劑均為分析純；調(diào)脂護(hù)肝膠囊由本院制劑室提供，批號(hào)：080325、080329、080402。 2 薄層

5、鑒別4 21 虎杖 取本品內(nèi)容物2 g，加甲醇25 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?5 mol/L硫酸溶液25 ml，水浴加熱30 min，放冷，用三氯甲烷振搖提取2次，每次15 ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄? ml使溶解，作為供試品溶液。另取虎杖苷對(duì)照品加乙酸乙酯制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方量稱取除虎杖外的其他藥材，照制備工藝的方法制成缺虎杖的空白樣品，按供試品溶液制備方法制成缺虎杖的陰性溶液。吸取供試品、陰性樣品、對(duì)照品溶液各10 l，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚（3060）-甲酸乙酯-甲酸（15

6、51）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色，陰性無干擾。 22 丹參 取本品內(nèi)容物2 g，加乙醚25 ml，振搖，放置1 h，濾過，濾液揮干（濾渣備用），殘?jiān)右宜嵋阴? ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參酮A對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方量稱取除丹參外的其他藥材，照制備工藝的方法制成缺丹參的空白樣品，按供試品溶液制備方法制成缺丹參的陰性溶液。吸取上述三種溶液各10 l，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以

7、甲苯-乙酸乙酯（191）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的暗紅色斑點(diǎn)，陰性無干擾。 23 女貞子 取上述丹參鑒別項(xiàng)下的濾渣，加甲醇25 ml，加熱回流05 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇-三氯甲烷（32）混合溶液2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取齊墩果酸對(duì)照品，加乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方量稱取除女貞子外的其他藥材，照制備工藝的方法制成缺女貞子的空白樣品，按供試品溶液制備方法制成缺女貞子的陰性溶液。吸取上述三種溶液各10 l，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮-乙酸乙酯（521）為

8、展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾。 24 絞股藍(lán) 取人參二醇對(duì)照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另取虎杖鑒別項(xiàng)下的供試品溶液，作為絞股藍(lán)的供試品溶液。按處方量稱取除絞股藍(lán)外的其他藥材，照制備工藝的方法制成缺絞股藍(lán)的空白樣品，按虎杖供試品溶液制備方法制成缺絞股藍(lán)的陰性溶液。吸取上述三種溶液各10 l，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚（6090）-乙酸乙酯（83）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110加熱至斑

9、點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾。 3 含量測定 31 色譜條件 色譜柱：依利特C18柱，46 mm200 mm，5 m；檢測波長：306 nm；流動(dòng)相：乙腈-水（1585）；流速：10 ml/min；柱溫：25；理論板數(shù)按虎杖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。 32 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24 h的虎杖苷對(duì)照品適量，加稀乙醇制成每1 ml含20 g的溶液，即得（實(shí)際所配濃度為206 g/l）。 33 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，稱定重量，加熱回流30 min，

10、冷卻至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，取上清液，即得。 34 陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn) 取除虎杖外的其余處方量藥材，按制備工藝制備缺虎杖的陰性樣品，再按上述供試品溶液制備方法制成缺虎杖的陰性溶液，測定，液相色譜圖與供試液色譜圖比較，結(jié)果表明，陰性對(duì)照液對(duì)虎杖苷的測定無干擾。 35 線性關(guān)系考察 精密吸取濃度為206 g/ml的虎杖苷對(duì)照品溶液2、4、6、8、10、12 l進(jìn)樣，測定其峰面積積分值，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為：Y=59178x-32897，r=09995。結(jié)果表明虎杖苷在4122472 g范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。 36 精密度試驗(yàn) 取同

11、一供試品溶液，精密吸取10 l，注入液相色譜儀，連續(xù)測定6次，計(jì)算RSD（%）為14%，說明精密度良好。 37 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在0、4、8、12、24 h精密吸取10 l，進(jìn)樣測定，計(jì)算結(jié)果RSD（%）為17%，說明24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。 38 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品6份，分別制備供試品溶液，測定、計(jì)算。結(jié)果RSD（%）為13%，說明重復(fù)性良好。 39 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量為17157 mg/g的同批樣品1 g，共6份，分別精密加入虎杖苷對(duì)照品溶液（C=01531 mg/ml）100 ml，即1531 mg，照供試品溶液的制備方法,以上述條件進(jìn)行測定,計(jì)算回收率

12、，平均值為988%， RSD為09%。結(jié)果見表1。 310 三批樣品測定數(shù)據(jù) 取三批樣品， 按上述方法測定，結(jié)果見表2。 4 討論 41 虎杖主要含大黃素、大黃素甲醚等苷類化合物；絞股藍(lán)主要含人參二醇、2-羥基人參二醇為母核構(gòu)成的皂苷類化合物5，因此,鑒別實(shí)驗(yàn)中采用稀硫酸水解，三氯甲烷提取水解物，以大黃素對(duì)照品，人參二醇對(duì)照品作對(duì)照，用不同的展開劑展開，分別鑒別制劑中的虎杖和絞股藍(lán)，結(jié)果斑點(diǎn)清晰，分離度好。菲醌類化合物為方中丹參抗炎的主要成分，此類成分見光易氧化分解，所以在供試品溶液及丹參酮A化學(xué)對(duì)照品溶液的制備過程中應(yīng)盡可能避光，減少放置時(shí)間。 42 虎杖為方中的君藥，所含的虎杖苷為降脂、抗氧化的有效成分之一，因此，筆者以虎杖苷作為本品的定量評(píng)價(jià)指標(biāo)，由于方中成分復(fù)雜，干擾大，后經(jīng)反復(fù)摸索，建立了本文的方法，經(jīng)方法學(xué)考察，結(jié)果準(zhǔn)確,方法穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，能夠有效的控制調(diào)脂護(hù)肝膠囊的質(zhì)量。 參考文獻(xiàn) 1 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典一部.北京：化